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奶牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的原核表达及其活性检测

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中国预防兽医学报 2009年第10期31卷 808-812页

作者：傅军科孙延鸣张辉盛金良肖非石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

为了表达奶牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)并对其活性进行检测。根据GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列(U22385),设计一对特异性引物;采用RT-PCR方法,以LPS体外诱导的奶牛肺泡巨噬细胞为材料,从总RNA中扩增出奶牛GM-CSFcDNA基因... 详细信息

为了表达奶牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)并对其活性进行检测。根据GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列(U22385),设计一对特异性引物;采用RT-PCR方法,以LPS体外诱导的奶牛肺泡巨噬细胞为材料,从总RNA中扩增出奶牛GM-CSFcDNA基因,克隆到pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定,结果显示克隆的奶牛GM-CSF基因与GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列的核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.7%和99.3%。构建pET32a-GM-CSF原核表达重组质粒,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示重组蛋白大小约为35ku。分别运用集落形成试验与MTT比色法测定重组蛋白活性,结果显示重组奶牛GM-CSF蛋白能够诱导粒细胞前体呈集落性生长并具有较强的体外增殖淋巴细胞的活性,为下一步临床试验奠定了基础。

关键词：奶牛 GM.CSF 克隆表达活性检测

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绵羊清道夫受体1克隆及其序列分析

中国畜牧杂志 2023年

作者：曹鑫艳魏立翔高之煜蒋松张辉闫卫疆肖非孙雪梅盛金良孙延鸣张彦兵新疆泰昆集团股份有限公司石河子大学动物科技学院

为了解绵羊巨噬细胞清道夫受体1(Macrophage Scavenger Receptor 1，MSR1)基因的生物学信息特征，本研究对绵羊MSR1进行了克隆鉴定，与其他物种的MSR1氨基酸序列进行比对、构建进化树，并进行生物信息分析，预测了MSR1的理化性质。结果... 详细信息

为了解绵羊巨噬细胞清道夫受体1(Macrophage Scavenger Receptor 1，MSR1)基因的生物学信息特征，本研究对绵羊MSR1进行了克隆鉴定，与其他物种的MSR1氨基酸序列进行比对、构建进化树，并进行生物信息分析，预测了MSR1的理化性质。结果显示：绵羊MSR1基因ORF区全长1 362 bp，编码453个氨基酸，分子量约为50 kDa，构建了MSR1真核表达载体；绵羊MSR1与山羊、羚羊、马鹿、水牛、白鲸、野猪、人、家兔、小鼠的同源性分别为98.90%、96.03%、93.16%、93.16%、81.28%、78.81%、74.17%、73.51%、63.77%，同属于牛科动物的序列同源性在90%以上，进化树上在同一分支；该蛋白分子式为C2188H3473N629O680S19，理论等电点为6.00，蛋白质性质为弱酸性，51～73号氨基酸为跨膜结构，有7个潜在的糖基化位点和多个磷酸化位点，存在2个棕榈酰化位点和5个乙酰化位点，169～180位氨基酸序列区域为优势抗原决定簇。这为以后研究绵羊MSR1的功能奠定了基础。

关键词：巨噬细胞清道夫受体1 吞噬基因克隆生物信息学分析

牛病毒性腹泻病毒NS5A蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

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动物医学进展 2023年第4期44卷 1-6页

作者：钱天皓刘浩李玉豪刘照宋雯妍郑婷李崇池盛金良石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

为防控牛病毒性腹泻的流行,淘选得到抗BVDV-NS5A的纳米抗体序列,并探究其结合活性。通过重组质粒pET30a-NS5A诱导表达并纯化蛋白,免疫羊驼,获得重组质粒pCANTAB 5E-VHH,构建了一个初始的抗BVDV-NS5A纳米抗体展示文库。利用3轮固相亲和筛... 详细信息

为防控牛病毒性腹泻的流行,淘选得到抗BVDV-NS5A的纳米抗体序列,并探究其结合活性。通过重组质粒pET30a-NS5A诱导表达并纯化蛋白,免疫羊驼,获得重组质粒pCANTAB 5E-VHH,构建了一个初始的抗BVDV-NS5A纳米抗体展示文库。利用3轮固相亲和筛选,对筛选后的单克隆抗体通过ELISA验证其特异性与结合力并测序、分析。构建出具有较好多样性的噬菌体展示文库,测得库容为5.3×10^(7) CFU/mL,插入率73.9%。通过评价和分析显示,得到20株不同氨基酸序列的纳米抗体,其中7株与NS5A蛋白具有较好反应性。针对抗BVDV-NS5A蛋白淘选纳米抗体,并证明得到的纳米抗体有较好的结合力。研究结果有望用于研发BVDV诊断试剂盒、抗BVDV的候选药物,同时也为后续BVDV的致病机制研究奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 NS5A蛋白纳米抗体

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污泥静态好氧发酵中堆体板结与通风的研究

环境工程学报 2010年第10期4卷 2355-2358页

作者：盛金良王均铖龚莹赵志永同济大学机械工程学院环卫机械研究所上海200092

为研究污泥静态好氧发酵中板结对强制通风和发酵进程的影响,降低通风能耗,基于理论研究确定了压降为强制通风风量的决定性因素,并通过实验获取不同发酵阶段和强制通风条件下的堆体通风量和抗剪强度数据,分析堆体内板结的形成规律,通过... 详细信息

为研究污泥静态好氧发酵中板结对强制通风和发酵进程的影响,降低通风能耗,基于理论研究确定了压降为强制通风风量的决定性因素,并通过实验获取不同发酵阶段和强制通风条件下的堆体通风量和抗剪强度数据,分析堆体内板结的形成规律,通过计算验证板结的形成和消失对通风的影响,提出了需要改善通风的时间节点;然后基于风机的变频控制研究了风机功率变化对强制通风的影响。提出的通风解决方案采用阶段变频通风,实现了堆体温度和通风风量的有效控制。

关键词：污泥非均匀多孔介质强制通风污泥板结抗剪强度

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一种污泥好氧堆肥预处理混合破碎机的研制

环境工程 2009年第S1期27卷 349-351页

作者：盛金良朱强杨志强同济大学机械工程学院上海201804 建设部同济大学环卫机械研究所上海200092

介绍一种城市污水厂污泥好氧堆肥预处理阶段的污泥混合破碎工艺流程和污泥混合破碎机的结构参数。分析了破碎机的混合、破碎、传输特性并通过试验数据,讨论了影响破碎效果和生产力的主要因素。最后,用ANSYS软件建模校核了弯刀的结构强度。

关键词：污泥混合破碎好氧堆肥 ANSYS

牛病毒性腹泻病毒重组抗原对小鼠的免疫效果评价

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中国兽医科学 2022年第11期52卷 1437-1443页

作者：李玉豪钱天皓刘浩李崇池郑婷宋雯妍齐亚银盛金良石河子大学动物科技学院新疆石河子832001

为成功研制BVDV重组抗原蛋白(NS5A、E0、E2、mE2T)亚单位疫苗并对比分析其免疫效价,本研究对BVDV的4种不同功能蛋白进行原核表达后,与弗氏佐剂乳化进而研制成亚单位疫苗。然后,选择105只BALB/c小鼠为试验动物,将其随机分成7组进行3次免... 详细信息

为成功研制BVDV重组抗原蛋白(NS5A、E0、E2、mE2T)亚单位疫苗并对比分析其免疫效价,本研究对BVDV的4种不同功能蛋白进行原核表达后,与弗氏佐剂乳化进而研制成亚单位疫苗。然后,选择105只BALB/c小鼠为试验动物,将其随机分成7组进行3次免疫,以便从细胞免疫和体液免疫方面评估其免疫效果。在第3次免疫后第14天对小鼠进行攻毒,通过qRT-PCR方法测定小鼠体内BVDV病毒的拷贝量。结果,成功研制出BVDV重组亚单位疫苗。3次免疫后,与免疫前相比,各组小鼠白细胞数量显著上升(P<0.05),其中联合疫苗组攻毒前、后白细胞数量最高,攻毒前为6.48±0.19,攻毒后为6.08±0.82。在3次免疫之后,联合疫苗组的抗体水平最高,在倍比稀释后为0.573±0.055,灭活疫苗为0.552±0.027;亚单位疫苗组中mE2T组的抗体水平最高,为0.535±0.028。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖时发现,联合疫苗组的SI值最高,为1.963。抗体中和试验证明,各个疫苗组的小鼠血清对病毒均有一定的中和能力,其中联合疫苗组的中和能力最强,达到了1∶18.2。qRT-PCR分析小鼠体内病毒的拷贝量,发现联合疫苗组小鼠体内病毒拷贝量最低,为1×10^(2.3)/mL。上述研究结果为BVDV的预防和控制提供了基础,也为新型疫苗的研制提供了依据。

关键词：牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗亚单位疫苗小鼠

新疆3种雅罗鱼线粒体DNA控制区序列的差异和系统进化关系

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Acta Genetica Sinica 2004年第9期31卷 970-975页

作者：胡文革段子渊王金富盛金良马润林石河子大学生物工程学院石河子832003 中国科学院遗传与发育生物学研究所北京100101 石河子大学动物科技学院石河子832003

对分布在新疆的准噶尔雅罗鱼 (Leuciscusmerzbacheri)、贝加尔雅罗鱼 (Leuciscusleuciscusbaicalensis)和高体雅罗鱼 (Leuciscusidus) 3个鱼种共 2 4尾个体的线粒体DNAD loop控制区核苷酸序列进行了测定 ,获得 2 4条长度为 6 6 7～ 6 6 ... 详细信息

对分布在新疆的准噶尔雅罗鱼 (Leuciscusmerzbacheri)、贝加尔雅罗鱼 (Leuciscusleuciscusbaicalensis)和高体雅罗鱼 (Leuciscusidus) 3个鱼种共 2 4尾个体的线粒体DNAD loop控制区核苷酸序列进行了测定 ,获得 2 4条长度为 6 6 7～ 6 6 9bp的同源基因序列。 3种雅罗鱼之间的序列差异在 6 39%～ 9 89%之间 ,贝加尔雅罗鱼与高体雅罗鱼种间序列同源性高 ,变异程度小 ;贝加尔雅罗鱼与准噶尔雅罗鱼种间序列同源性最低 ,变异程度最大。所采集的贝加尔雅罗鱼两个地理群体 (赛里木湖和额尔齐斯河 )内mtDNA的平均核苷酸碱基序列差异为 1 0 7%和 1 0 8% ;两群体间的序列差异为 1 0 7% ,显示两个地理群体间无明显分化。DNA序列数据显示 ,这 3种鱼类线粒体DNAD loop序列变异丰富 ,2 4尾个体呈现独自的单倍型。同源基因序列平均含AT碱基 6 4 1% ,GC碱基 35 9% ,显示准噶尔雅罗鱼、贝加尔雅罗鱼、高体雅罗鱼的线粒体DNAD loop区核苷酸组成的不均一性。分子系统树提示 ,贝加尔雅罗鱼与高体雅罗鱼亲缘关系较近 ,准噶尔雅罗鱼是 3种雅罗鱼中较古老的鱼种。

关键词：雅罗鱼线粒体DNA D—loop控制区系统进化

新疆部分地区绵羊及青贮饲草中单核细胞增多性李氏杆菌的调查

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中国兽医杂志 2004年第8期40卷 19-20页

作者：杨霞剡根强王静梅盛金良石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

单核细胞增多性李氏杆菌(***,LM)于1926年由Murry等首先从患病的野兔和实验室中的豚鼠中分离,并明确描述与动物流行病有关,可引起多种家畜、野生动物及人的李氏杆菌病.在多种动物中,以绵羊易感性最高.而多数绵羊发病与饲喂青贮饲草有关... 详细信息

单核细胞增多性李氏杆菌(***,LM)于1926年由Murry等首先从患病的野兔和实验室中的豚鼠中分离,并明确描述与动物流行病有关,可引起多种家畜、野生动物及人的李氏杆菌病.在多种动物中,以绵羊易感性最高.而多数绵羊发病与饲喂青贮饲草有关,故又称'青贮病'.本病在70年代以前只在世界部分国家与地区的羊群中发生,尚未引起足够重视.自70年代以后,本病几乎在所有养羊国家发生,其发生频率与危害程度有逐步升高的趋势.

关键词：新疆绵羊青贮饲草单核细胞增多性李氏杆菌分离李氏杆菌病

大型滚筒式好氧发酵反应器筒体及支撑件结构分析

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机械设计与制造 2016年第3期 1-4,9页

作者：刘幸福盛金良同济大学机械与能源工程学院上海201804

针对设计的一种处理量为50t/d的大型滚筒式城市生活垃圾好氧发酵反应器,运用三弯矩方程理论计算支撑处和筒体的受力,并在此基础上对筒体弯曲强度和滚圈与托轮间的接触强度进行分析。建立大型滚筒式城市垃圾好氧发酵反应器的有限元整体模... 详细信息

针对设计的一种处理量为50t/d的大型滚筒式城市生活垃圾好氧发酵反应器,运用三弯矩方程理论计算支撑处和筒体的受力,并在此基础上对筒体弯曲强度和滚圈与托轮间的接触强度进行分析。建立大型滚筒式城市垃圾好氧发酵反应器的有限元整体模型,修正以往分析过程中有限元模型物料载荷加载的不妥之处,建立一种更适合于经破碎后的城市生活垃圾的物料载荷力学模型,应用ANSYS对筒体弯曲应力和支撑装置接触应力进行模拟分析,得到更加接近实际工况的应力分布规律。对模拟分析结果与理论计算结果进行比较,两者具有很好的一致性结果。同时分析结果表明,该滚筒式反应器支撑位置布局设计很合理,并且筒体结构和支撑装置满足强度要求。这为应用于城市垃圾好氧堆肥的滚筒式反应器设计与研究提供了有意义的参考。

关键词：大型滚筒式反应器城市垃圾物料载荷力学模型弯曲强度接触强度 ANSYS