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新疆北疆地区猪场5种常见传染病的分子检测

新疆北疆地区猪场5种常见传染病的分子检测

绵羊Toll样受体家族(toll-like receptors)在肺泡巨噬细胞的分布及脂多糖(LPS)刺激对TLR2、4表达的影响

中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九...

作者：肖盛中张勋宋佳玮蔡卓轩盛金良新疆石河子大学动物科技学院

目前,猪蓝耳病（PRRS）、猪伪狂犬病（PR）、猪圆环病毒病（PCVD）、猪瘟（CSF）、猪肺炎支原体（Mh）是危害我国养猪业健康发展的常见动物传染病,造成猪的生产性能严重下降,给养猪业带来重大经济损失。为了掌握新疆北疆地区石河子、伊... 详细信息

目前,猪蓝耳病（PRRS）、猪伪狂犬病（PR）、猪圆环病毒病（PCVD）、猪瘟（CSF）、猪肺炎支原体（Mh）是危害我国养猪业健康发展的常见动物传染病,造成猪的生产性能严重下降,给养猪业带来重大经济损失。为了掌握新疆北疆地区石河子、伊犁、哈密等地养殖场猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病、猪瘟、猪肺炎支原体临床发病病例的感染情况,对2015-2017年间新疆北疆地区兽医临床病例样品进行病理剖检观察和分子检测,确定新疆北疆地区这5种传染病的发病病例与病原感染之间的关系,为这些疾病的诊断和防控提供依据。通过兽医临床病理剖检观察,采集各病变脏器组织提取总RNA,根据Genbank中5种病原基因序列设计合成PRRSV、PRV、PR、PCDV、CSF、MP特异性扩增引物,经RT-PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳检测阳性条带进行检测分析。结果表明,兽医临床发病样品中经典蓝耳病毒阳性率2.47%（2/81）,高致病性蓝耳病毒阳性率79.01%（64/81）,推测变异蓝耳病毒阳性率6.17%（5/81）,猪伪狂犬病毒阳性率54.17%（26/48）,猪圆环病毒阳性率56.52%（26/46）,猪瘟病毒阳性率16.67%（1/6）,猪肺炎支原体阳性率11.1%（2/18）;高致病性蓝耳病毒与猪伪狂犬病毒混合感染率58.54%（24/41）,高致病性蓝耳病毒与猪圆环病毒混合感染率46.51%（20/43）,猪圆环病毒与猪伪狂犬病毒混合感染率36.11%（13/36）;高致病性蓝耳病毒、猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒混合感染率38.71%（12/31）。新疆北疆地区猪场兽医临床病例5种传染病感染引起的发病率和死亡较高,混合感染给兽医临床病例的诊断带来了困难,应加强这些疾病的疫苗防控和畜群的净化。

关键词：猪蓝耳病猪伪狂犬病猪圆环病毒病猪瘟猪肺炎支原体分子检测

来源： cnki会议评论

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绵羊Toll样受体家族(toll-like receptors)在肺泡巨噬细胞的分布...

产肠毒素性大肠杆菌K99菌毛抗原成熟肽的克隆表达及部分免疫学特性的分析

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：盛金良陈创夫杨霞王远志张辉新疆石河子大学动物科技学院新疆石河子大学医学院

Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)是近年来备受关注的一种病原体识别受体,它在固有免疫中通过对病原体相关的分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP)的识别发挥作用,通过刺激信号的级联反应导致细胞因子的产生和协... 详细信息

Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)是近年来备受关注的一种病原体识别受体,它在固有免疫中通过对病原体相关的分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP)的识别发挥作用,通过刺激信号的级联反应导致细胞因子的产生和协同刺激因子的表达,在天然免疫和获得性免疫中起到了桥梁的作用,在免疫学、分子生物学以及临床研究中具有重要

关键词：绵羊肺泡巨噬细胞脂多糖 toll样受体实时定量PCR

来源： cnki会议评论

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上海畜牧兽医通讯 2008年第3期 28-30页

作者：姜文亿盛金良王远志陈创夫新疆石河子大学动物科技学院 832003 新疆地方与民族高发病重点实验室 832003

采用PCR方法,以83912(含K99)标准株菌液为模板扩增K99菌毛基因,克隆至pBS-T载体。提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。经测序正确后,构建原核表达载体pET-28a-K99,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,菌体蛋白经SDS-PAGE... 详细信息

采用PCR方法,以83912(含K99)标准株菌液为模板扩增K99菌毛基因,克隆至pBS-T载体。提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。经测序正确后,构建原核表达载体pET-28a-K99,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,菌体蛋白经SDS-PAGE,在约18Ku有一明显特异性条带,表达产物经初步纯化后,免疫印迹法(Western blotting)分析证实,此重组蛋白与K99阳性血清发生特异性反应。然后将初步纯化的重组蛋白免疫实验兔,并设对照组,建立间接ELISA法进行抗体检测,分析表达产物的抗原性和免疫原性,并对各组进行攻毒试验,为进一步对幼畜腹泻疫苗的研制奠定基础。

关键词：大肠杆菌K99 菌毛抗原克隆表达免疫学特性分析

基于ADAMS和ANSYS的环卫垃圾桶动力学仿真分析

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中国工程机械学报 2014年第6期12卷 540-544页

作者：盛金良刘海滨宋世明同济大学机械与能源工程学院上海201804

为了分析环卫垃圾桶在提升卸料过程中的运动学、动力学和强度问题,应用动力学仿真分析(ADAMS)软件和有限元分析(ANSYS)软件对其进行联合分析.在ANSYS软件中生成环卫垃圾桶的模态中性文件,在ADAMS软件中建立以环卫垃圾桶为柔性体的刚柔... 详细信息

为了分析环卫垃圾桶在提升卸料过程中的运动学、动力学和强度问题,应用动力学仿真分析(ADAMS)软件和有限元分析(ANSYS)软件对其进行联合分析.在ANSYS软件中生成环卫垃圾桶的模态中性文件,在ADAMS软件中建立以环卫垃圾桶为柔性体的刚柔耦合模型,并进行运动学和动力学的仿真.利用ADAMS与ANSYS的接口把载荷谱导入ANSYS,在ANSYS软件中分析环卫垃圾桶的应力分布,得出了在环卫垃圾桶裙边结构上进行加厚或是设置网状加强筋的结论,为环卫垃圾桶的结构设计改进提供了参考.

关键词：环卫垃圾桶翻桶机构刚柔耦合动力学仿真分析有限元分析

绵羊防御素(sBD1)mRNA在不同发育阶段的组织分布和定量分析

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畜牧兽医学报 2009年第1期40卷 20-25页

作者：盛金良陈创夫杨霞王远志张辉曹旭东史前伟赵民石河子大学动物科技学院石河子832003 石河子大学医学院石河子832003

为确定绵羊防御素(Sheep beta defensin-1,sBD1)mRNA在组织器官中的分布和不同发育阶段的表达是否存在差异。利用RT-PCR(Reverse Transcription PCR)方法检测绵羊防御素sBD1 mRNA在组织器官的分布情况,通过荧光定量RT-PCR(Fluorescence quantitative RT-PCR)检测不同发育阶段绵羊防御素的表达差异。结果表明:在胎羊的舌、皱胃、十二指肠、空肠、盲肠检测到绵羊防御素sBD1 mRNA,在羔羊和成年羊消化道的舌、食道、瘤胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠和呼吸道的气管、肺均检测到绵羊防御素sBD1 mRNA,在各发育阶段的心、肝、肾以及羔羊、成年羊的淋巴结和体外培养的羔羊肺泡巨噬细胞均未检测到sBD1 mRNA;实时定量PCR比较表明,sBD1 mRNA在不同发育阶段皱胃、十二指肠和空肠表达量的高低为sBD1 mRNA表达量(羔羊)>sBD1 mRNA表达量(成年羊)>sBD1 mRNA表达量(胎羊)。绵羊防御素sBD1 mRNA主要分布在消化道和呼吸道,且在整个发育过程中是持续表达的,其在消化道表达量高低为sBD1 mRNA表达量(羔羊)>sBD1 mRNA表达量(成年羊)>sBD1 mRNA表达量(胎羊)。

关键词：绵羊防御素1 组织分布实时定量RT-PCR 定量分析

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牛病毒性腹泻病毒E2抗原表位表达及验证

生物技术 2016年第2期26卷 152-157页

作者：黄美玲吴鹏李天森张国奇杨霞陈创夫盛金良石河子大学生命科学学院新疆石河子832000 石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

[目的]获得高效表达的重组牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)E2免疫抗原蛋白。[方法]应用软件分析BVDV-E2蛋白抗原表位,将富含抗原表位基因片段连接表达载体p GEX-4T-1,并转化至大肠杆菌(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-P... 详细信息

[目的]获得高效表达的重组牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)E2免疫抗原蛋白。[方法]应用软件分析BVDV-E2蛋白抗原表位,将富含抗原表位基因片段连接表达载体p GEX-4T-1,并转化至大肠杆菌(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot检测诱导表达蛋白,经镍柱分离纯化;以纯化蛋白为包被抗原,用间接ELISA检测抗原对免疫血清的反应性。[结果]成功克隆BVDV-E2抗原表位基因,并在大肠杆菌中高效表达,Western Blot和ELISA证实表达重组蛋白对BVDV阳性血清具有反应原性。[结论]获得大小为49.5 k Da的BVDV-E2抗原表位蛋白,并且该抗原稀释度在1:40,抗体稀释度在1:20时结合效果最佳。可用于后续的纳米抗体筛选的研究。

关键词：抗原表位 E2蛋白 Western Blot 间接ELISA

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一例由免疫失败引起的绵羊痘病例报告

当代畜牧 2021年第5期50卷 5-8页

作者：吕文华杨艳钱天皓张彦红盛金良石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

绵羊痘是羊较为常见的疾病之一。笔者对病死绵羊进行了临床症状观察与病理剖检,在光学显微镜下观察到脾脏大量充血、出血,有大量炎性细胞;肾小球有异物沉着,肾小管毛细血管充血,肾间质充血严重;乳腺部毛细血管允血,腺泡内大量上皮细胞... 详细信息

绵羊痘是羊较为常见的疾病之一。笔者对病死绵羊进行了临床症状观察与病理剖检,在光学显微镜下观察到脾脏大量充血、出血,有大量炎性细胞;肾小球有异物沉着,肾小管毛细血管充血,肾间质充血严重;乳腺部毛细血管允血,腺泡内大量上皮细胞增生为主,并未观察到病毒包涵体。病例经临床剖检和实验室检测,并结合临床发病情况以及词养情况分析最终确诊为绵羊痘。

关键词：绵羊痘免疫失败绵羊病例报告

绵羊肌肉生长抑制素MSTN原核表达及其纳米抗体文库的构建与鉴定

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中国生物工程杂志 2014年第9期34卷 87-93页

作者：李尤简张国奇郭吉星陈新凯豆晓霞陈创夫盛金良石河子大学动物科技学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室石河子832003

克隆绵羊肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因并在大肠杆菌中诱导表达,纯化重组蛋白免疫健康的双峰驼（Bactrian camel）,分离其外周血淋巴细胞提取总RNA,利用RT-PCR扩增骆驼重链抗体IgG2、IgG3的可变区（VHH）基因片段,将VHH片段与pC... 详细信息

克隆绵羊肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因并在大肠杆菌中诱导表达,纯化重组蛋白免疫健康的双峰驼（Bactrian camel）,分离其外周血淋巴细胞提取总RNA,利用RT-PCR扩增骆驼重链抗体IgG2、IgG3的可变区（VHH）基因片段,将VHH片段与pCANTAB5E连接后电转入大肠杆菌TG1构建纳米抗体文库。结果显示,纳米抗体文库容量为9.5×10~5,挑取部分克隆进行测序分析,所获得的纳米抗体文库具有良好的多态性,为进一步筛选绵羊MSTN的高特异性纳米抗体片段奠定了基础。

关键词：绵羊肌肉生长抑制素纳米抗体噬菌体展示文库

羊种布鲁氏菌的分离鉴定及其ugpB基因的原核表达

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羊种布鲁氏菌的分离鉴定及其ugpB基因的原核表达