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PGRN及其降解体在VICs表型转换和成骨分化中的作用及机制研究

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PGRN及其降解体在VICs表型转换和成骨分化中的作用及机制研究

作者：皇改改重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分:目的:了解颗粒蛋白前体（progranulin,PGRN）及其降解体在主动脉瓣膜间质细胞（valve interstitial cells,VICs）表型转换和成骨分化中的作用,为钙化性主动脉瓣膜疾病（calcific aortic valve disease,CAVD）的临床早期干预和... 详细信息

第一部分:目的:了解颗粒蛋白前体（progranulin,PGRN）及其降解体在主动脉瓣膜间质细胞（valve interstitial cells,VICs）表型转换和成骨分化中的作用,为钙化性主动脉瓣膜疾病（calcific aortic valve disease,CAVD）的临床早期干预和治疗提供理论基础。方法:取非钙化主动脉瓣组织（3例）和CAVD主动脉瓣组织（6例）,通过免疫组织化学染色及Western blot检测颗粒蛋白前体PGRN及其降解体、肌纤维样表型转变标志物α-SMA、collage I,早期成骨指标Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2,Runx2）,晚期成骨指标骨桥蛋白（osteopontin,OPN）、骨钙素（osteocalcin,OCN）的表达;Western blot检测促炎因子TNF-α及凋亡指标C Caspase3、Bax;采用I型胶原酶连续消化法分离人和猪的VICs,观察细胞形态及生长状态,并采用细胞免疫荧光染色行表型鉴定;采用成骨培养基（osteogenic medium,OM）诱导人VICs钙化,Western blot检测PGRN及其降解体的表达;采用OM或TNF-α诱导猪VICs构建钙化模型,并加入人PGRN重组蛋白或转染腺病毒Ad-45GRN分别上调PGRN及其降解体45-GRN水平。qPCR和Western blot检测α-SMA、collage I、Runx2、OPN、OCN的表达;Western blot检测TNF-α及C Caspase3、Bax的表达;细胞免疫荧光染色检测α-SMA的表达;碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色检测早期成骨指标ALP表达的改变;晚期通过茜素红S染色检测钙盐累积。结果:与非钙化瓣膜组织相比,CAVD瓣膜组织中PGRN和其降解体45KD GRN（45-GRN）都增加,但45-GRN的含量和增加的趋势显著高于PGRN;α-SMA、collage I、Runx2、OPN、OCN、TNF-α、C Caspase3及Bax在CAVD组中表达均明显高于正常组。成功分离出原代VICs,α-SMA和Vimentin阳性,vWF阴性。与正常培养组相比,OM诱导的人VICs细胞PGRN明显减少,45-GRN却显著增加。PGRN可降低VICs的ALP活性和钙盐沉积;PGRN可下调α-SMA、成骨相关指标Runx2、OPN、OCN的表达,TNF-α、C Caspase3及Bax的表达水平明显被抑制;但是,45-GRN显著上调TNF-α、C Caspase3及Bax,并促进VICs的肌纤维样表型转变指标和成骨相关指标水平的上升。结论:PGRN可抑制炎症,对VICs的凋亡、表型转换和成骨分化发挥负向调控作用,45-GRN则发挥正向调控作用。第二部分:目的:探讨PGRN及45-GRN影响VICs表型转换和成骨分化的作用机制。方法:采用猪VICs,加入人PGRN重组蛋白和转染腺病毒Ad-45GRN分别上调PGRN和45-GRN水平。Western blot检测PGRN/45-GRN对成骨信号通路中Smad1/5/8、NF-κB和AKT的总蛋白及磷酸化水平的影响;Western blot检测AKT的激活剂SC-79在PGRN抑制VICs表型转换和成骨分化中的作用;最后分别加入Smad1/5/8的抑制剂LDN193189、NF-κB的抑制剂BAY11-7082、以及AKT的抑制剂LY294002进行45-GRN促进VICs表型转换和成骨分化作用的反向验证。结果:PGRN可明显抑制p-AKT的表达,45-GRN可显著上调成骨信号通路中Smad1/5/8、NF-κB和AKT的磷酸化水平。结论:PGRN可明显抑制VICs的表型转换和成骨分化,其作用可能是通过抑制AKT信号通路来实现的。45-GRN可能是通过激活Smad1/5/8、NF-κB和AKT信号通路从而促进VICs的钙化。

关键词：钙化性主动脉瓣膜疾病主动脉瓣膜间质细胞 PGRN 表型转换成骨分化

BMP7基因沉默抑制钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化

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中国生物工程杂志 2019年第5期39卷 63-71页

作者：程瑜施琼安利钦范梦恬皇改改翁亚光重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室

目的:探究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)基因沉默对钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的干预及治疗提供理论依据。方法:非CAVD瓣膜组织(non-CAVD组)取自手术治疗的主动脉夹层患者,CAVD瓣膜组织(CAVD组)取自因钙化性主动脉瓣狭窄而进行主动脉瓣膜置换术的患者,采用免疫组化和Western blot法检测non-CAVD组和CAVD组中BMP7、Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白质表达水平。选取健康家猪处死后即刻于无菌条件下取主动脉瓣叶,采用胶原酶连续消化法分离主动脉瓣膜间质细胞,观察其形态特征,并用免疫荧光染色行表型鉴定。采用脂质体转染法将BMP7-siRNA转染猪主动脉瓣膜间质细胞,采用qPCR和Western blot法验证BMP7表达的变化;利用钙盐培养基诱导细胞成骨分化,建立体外主动脉瓣膜间质细胞钙化模型后,采用ALP染色和茜素红S染色实验分别检测细胞早期及晚期成骨分化能力;采用qPCR和Western blot法分别检测细胞成骨相关基因及蛋白质Runx2、OCN和OPN的表达情况。并用Western blot法检测BMP7下游信号通路中Smad1/5/8的磷酸化水平。结果:BMP7和Runx2蛋白在CAVD组中表达明显高于non-CAVD组。成功分离出原代猪主动脉瓣膜间质细胞,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(vimentin)染色阳性,血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)染色阴性。转染BMP7-siRNA后猪主动脉瓣膜间质细胞中BMP7的mRNA和蛋白质水平均明显下调,早期及晚期成骨分化能力均明显降低。沉默BMP7基因的表达,可下调Runx2、OCN和OPN的基因及蛋白质表达,且磷酸化的Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白水平明显降低。结论:BMP7基因沉默抑制钙盐诱导的主动脉瓣膜间质细胞的成骨分化能力,BMP7/Smads信号通路可能在该过程中发挥重要作用。

关键词：钙化性主动脉瓣膜病瓣膜间质细胞骨形态发生蛋白7 成骨分化 RNA干扰

颗粒蛋白前体抑制钙盐诱导主动脉瓣膜间质细胞成骨分化

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中国细胞生物学学报 2020年第1期42卷 46-54页

作者：皇改改施琼安利钦范梦恬朱梦颖翁亚光重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

该文主要研究颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)对猪主动脉瓣膜间质细胞(valve interstitial cells,VICs)成骨分化的影响及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的早期干预及治疗提供理论依据。采用免疫组化检... 详细信息

该文主要研究颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)对猪主动脉瓣膜间质细胞(valve interstitial cells,VICs)成骨分化的影响及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的早期干预及治疗提供理论依据。采用免疫组化检测正常组和CAVD组中Runx2、OPN的表达,Western blot检测PGRN、纤维化指标α-SMA、钙化指标(Runx2、OPN)的表达以及AKT磷酸化水平。采用胶原酶连续消化法分离VICs,并用免疫荧光染色行表型鉴定。体外实验加入人PGRN重组蛋白,采用ALP染色、茜素红S染色、qPCR和Western blot检测细胞早期及晚期成骨分化能力以及AKT的磷酸化水平;并加入AKT的激活剂SC-79进行反向验证。结果表明,与正常组织相比,CAVD瓣膜组织中PGRN明显降低,α-SMA、Runx2、OPN和p-AKT在CAVD组中表达均明显高于正常组。成功分离出原代VICs,α-SMA和vimentin阳性,vWF阴性。PGRN可使VICs的ALP活性降低、钙盐沉积明显减少;PGRN可下调纤维化/钙化指标,且AKT的磷酸化水平降低;SC-79可减弱PGRN对纤维化/钙化指标的下调作用。提示PGRN能够抑制静止的VIC向肌纤维母细胞样的活化VIC乃至成骨样VIC进行转化,AKT信号通路可能在该过程中发挥重要作用。

关键词：钙化性主动脉瓣膜病瓣膜间质细胞 PGRN 纤维化成骨分化

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船舶废气排放的法律控制及其技术探讨

船舶工程 2024年第4期46卷 175-176页

作者：王改改重庆人文科技学院教务处

随着全球工业化的加速,船舶废气排放问题成为海洋环境保护的焦点。作为国际航运的重要组成部分,船舶在行驶过程中,会排放出大量的废气,进而可能造成海洋生态污染,因此,有必要对船舶废气排放管理进行严格的法律控制,积极推动有效的技术... 详细信息

随着全球工业化的加速,船舶废气排放问题成为海洋环境保护的焦点。作为国际航运的重要组成部分,船舶在行驶过程中,会排放出大量的废气,进而可能造成海洋生态污染,因此,有必要对船舶废气排放管理进行严格的法律控制,积极推动有效的技术实施。在法律管制机制方面,目前,国际船舶协会已经实施了相关法律法规,具体目标是减少船舶废气排放和保护海洋环境,为限制船舶废气排放提供了实质性保护。然而,仅仅依靠法律是无法达到这一目标的,还有必要采用技术解决问题。因此,探讨船舶废气排放的法律控制及其技术等相关内容,对于推动行业快速发展,建立更加和谐的人与海洋发展观具有重要的价值。

关键词：海洋环境保护国际航运生态污染全球工业化国际船舶管制机制发展观相关法律法规

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枸杞子在我国保健食品中的应用

食品工业科技 2024年第6期45卷 12-23页

作者：段昊刘改改松伟闫文杰北京联合大学生物化学工程学院生物活性物质与功能食品北京市重点实验室北京100023

枸杞子属于食药同源物质,富含多糖、甜菜碱、花色苷、类胡萝卜素等活性成分,在免疫力提升、缓解视疲劳、抗氧化等保健功能中具有良好的应用价值,也因此受到了国内外研究者和消费者的喜爱。目前,枸杞子在我国保健食品中的应用频率较高,... 详细信息

枸杞子属于食药同源物质,富含多糖、甜菜碱、花色苷、类胡萝卜素等活性成分,在免疫力提升、缓解视疲劳、抗氧化等保健功能中具有良好的应用价值,也因此受到了国内外研究者和消费者的喜爱。目前,枸杞子在我国保健食品中的应用频率较高,但缺乏系统的整理和分析。基于此,本文分析了枸杞子在我国保健食品中的应用现状、合规性使用依据、主要功效成分的影响因素,并详细论述了枸杞子主要的保健功能和作用机制,以期为枸杞子在我国保健食品中的研究开发和应用提供一定的参考及依据。

关键词：枸杞子保健食品保健功能应用现状影响因素

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基于变速GTAW焊接温度场解析模型的熔深预测研究

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天津大学学报（自然科学与工程技术版） 2024年第1期57卷 64-72页

作者：武少杰曲皇屹程方杰天津大学材料科学与工程学院天津300350 哈尔滨工业大学先进焊接与连接国家重点实验室哈尔滨150001 天津市现代连接技术重点实验室天津300350

焊接热过程解析模型是一种能够直观反映焊接过程中工件内部的热行为、明确焊接工艺参数与熔池形貌间的物理关系、快速计算得到熔深的方法.目前常用的焊接温度场解析模型通常将电弧近似为一个功率恒定的匀速运动热源进行计算,而非参考实... 详细信息

焊接热过程解析模型是一种能够直观反映焊接过程中工件内部的热行为、明确焊接工艺参数与熔池形貌间的物理关系、快速计算得到熔深的方法.目前常用的焊接温度场解析模型通常将电弧近似为一个功率恒定的匀速运动热源进行计算,而非参考实际焊接过程,即通过实时调整焊接热输入(焊接电流或焊接速度)来保证熔透.因此,目前的焊接温度场解析模型并不适用于焊接熔透控制.为了使解析模型能够计算时变速度下的熔深,本文针对钨极氩弧焊(GTAW)工艺建立了适用于计算时变焊接速度的焊接温度场解析模型.首先以匀速移动点热源的温度场解析模型为基础,推导出了时变焊接速度移动点热源在热源作用时间内引起的温度变化公式,通过连续性证明验证了公式的连续可积性并进一步推导出了适用于时变焊接速度运动单椭球热源的焊接温度场解析模型.为了提高计算速度,减少计算量,采用坐标变化方法实现了热源及其附近温度场的快速求解.基于数值积分法得到了解析模型求解方法,实现了熔池温度场的准确计算,并通过提取等温线实现了熔深和熔宽的预测.最后,通过工艺试验验证了解析模型的精度.结果表明:在0~4 s阶段,计算熔深基本与实际测得的熔深相同,误差控制在6%以内;在速度发生改变的4~16 s阶段,由于热源系数不再适用,计算误差增大,但熔深计算误差仍控制在17%以内,熔宽计算误差在12%以内.因此,建立的焊接温度场解析模型基本可以满足时变速度下的熔深预测.

关键词：钨极氩弧焊解析计算焊接温度场熔深预测

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长株潭“三生”空间适宜性耦合协调度分析

水土保持研究 2024年第5期31卷 389-398页

作者：马炎生吴大放罗改改湖南省第一测绘院广州大学地理科学与遥感学院

[目的]探索“三生”空间适宜性之间的耦合协调关系，明确国土空间发展的主要矛盾和影响因素，为促进长株潭地区“三生”空间协调发展提供科学依据。[方法]基于长株潭地区发展现状，构建“三生”空间适宜性评价指标体系，分别评价生产、... 详细信息

[目的]探索“三生”空间适宜性之间的耦合协调关系，明确国土空间发展的主要矛盾和影响因素，为促进长株潭地区“三生”空间协调发展提供科学依据。[方法]基于长株潭地区发展现状，构建“三生”空间适宜性评价指标体系，分别评价生产、生活、生态空间的适宜性，并采用耦合协调度模型基于三类适宜性的空间分布分析耦合协调性，探索“三生”空间适宜性之间的作用关系。[结果]2000—2020年生产空间面积先减后增、生活空间面积加速递增、生态空间面积加速递减，大量农业生产空间和林地生态空间转化为工业生产空间和城市生活空间。“三生”空间适宜性呈现出由市区向外扩散的“生活—生产—生态”圈层空间格局特征，生产空间适宜性北高南低、中高外低，生活空间适宜性呈现“一片八核多点”分布特征，生态空间适宜性东高西低、南高北低。基于适宜性的“三生”空间格局中，生产、生活和生态空间分别占国土面积的34.36%,19.55%和46.09%,其与“三生”空间现状差异明显，突出生态保护的重点区域。研究区整体处于基本协调水平，高度协调、基本协调、临界失调和失调区域面积分别占国土面积的56.29%,36.65%,6.91%和0.16%。“三生”空间适宜性耦合协调度空间分异明显，反映出不同的国土空间发展矛盾，需采取针对性措施促进“三生”空间协调发展。[结论]“三生”空间适宜性之间呈现生态空间与生产或生活空间不协调、生产和生活空间较协调的特点，生态空间与生产空间之间、生态空间与生活空间之间适宜性的不协调是长株潭地区国土空间发展的主要矛盾，地形地貌是影响“三生”空间适宜性耦合协调度的根本因素。

关键词： “三生”空间适宜性评价耦合协调度长株潭

民族地区乡村旅游与铸牢中华民族共同体意识的互构逻辑

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贵州社会科学 2024年第5期 104-111页

作者：李永皇刘力波陕西师范大学贵州省民族研究院

民族地区乡村旅游与铸牢中华民族共同体意识存在互利互惠、互促互馈的互构逻辑。民族地区乡村旅游为铸牢中华民族共同体意识提供了必要的实践场域，铸牢中华民族共同体意识为民族地区乡村旅游提供了重要的精神引领。以民族地区乡村旅游... 详细信息

民族地区乡村旅游与铸牢中华民族共同体意识存在互利互惠、互促互馈的互构逻辑。民族地区乡村旅游为铸牢中华民族共同体意识提供了必要的实践场域，铸牢中华民族共同体意识为民族地区乡村旅游提供了重要的精神引领。以民族地区乡村旅游发展为载体铸牢中华民族共同体意识，以铸牢中华民族共同体意识为主线助推民族地区乡村旅游发展，应从空间、文化、经济、社会、心理等方面实现二者的全面互构，以旅游活动为载体构建互嵌式社会结构、以文旅融合增强各族群众对中华文化的认同、以产业兴旺提升各族群众的收入水平、以治理有效增进各族群众的民生福祉、以情感共融系牢民族团结奋进的精神纽带。

关键词：民族地区乡村旅游铸牢中华民族共同体意识实践场域精神引领

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响应面法优化余甘果百香果低糖复合果冻配方

食品工业科技 2024年第13期45卷 195-203页

作者：陈美花廖杏莲牛改改蓝尉冰庞庭才北部湾大学食品工程学院广西高校北部湾海产品高值化利用与预制食品重点实验室钦州市食品风味分析与调控重点实验室广西钦州535011

为丰富果冻种类,提高余甘果和百香果的附加值,以余甘果和百香果为主要原料,以感官评分、色泽及质构特性为指标,通过单因素实验探究百香果汁添加量、复配胶添加量、赤藓糖醇添加量对余甘果百香果复合果冻品质的影响,在此基础上,以感官评... 详细信息

为丰富果冻种类,提高余甘果和百香果的附加值,以余甘果和百香果为主要原料,以感官评分、色泽及质构特性为指标,通过单因素实验探究百香果汁添加量、复配胶添加量、赤藓糖醇添加量对余甘果百香果复合果冻品质的影响,在此基础上,以感官评分为响应值,通过响应面法优化余甘果百香果复合果冻配方。结果表明,余甘果百香果复合果冻的最佳配方为百香果汁添加量19%、复配胶添加量2.0%(可得然胶、魔芋胶和黄原胶三者的质量比为30:3:7)、赤藓糖醇添加量26.8%;在此条件下制得的复合果冻呈橘黄色,富有光泽,口感细腻,余甘果和百香果的特征风味突出,风味协调,酸甜可口,回甘悠长,硬度、弹性及咀嚼性适中,总体可接受性非常好,感官评分为8.65分。本研究可为零添加香精、色素和蔗糖的余甘果百香果低糖复合果冻的开发提供参考。

关键词：余甘果百香果果冻可得然胶赤藓糖醇响应面法配方

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