检索结果-南通市图书馆

利用HPLC和荧光探针DAF-FM DA检测细胞内的甲醛和一氧化氮

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

利用HPLC和荧光探针DAF-FM DA检测细胞内的甲醛和一氧化氮

作者：白雪琴汕头大学

学位级别：硕士

背景和目的:人体中可通过赖氨酸特异性脱甲基酶1(lysine-specific demetheylase 1,LSD1),氨基脲敏感型胺氧化酶(semicarbazide-sensitive amine oxidase,SSAO)等酶催化代谢产生内源性甲醛。研究表明内源性甲醛浓度升高可能与多种疾病有... 详细信息

背景和目的:人体中可通过赖氨酸特异性脱甲基酶1(lysine-specific demetheylase 1,LSD1),氨基脲敏感型胺氧化酶(semicarbazide-sensitive amine oxidase,SSAO)等酶催化代谢产生内源性甲醛。研究表明内源性甲醛浓度升高可能与多种疾病有关,如阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)、糖尿病合并心血管并发症、癌症等。由于甲醛性质活泼,生成后可迅速与体内生物分子结合,从而影响其在生物水平的准确定量。因此,开发高灵敏度、高特异性的探针用于内源性甲醛定量分析具有重要的生物学意义。目前常见的检测方法主要通过对采集的生物样本中的内源性甲醛进行衍生化反应,利用高效液相色谱法对衍生化产物进行定量分析。而通过荧光探针结合靶分子的检测方法,因其具有高灵敏度,以及可实时捕捉实时观察的优点,这些年被广泛应用于胞内小分子检测。然而,目前已报道可用于检测甲醛的探针不多,且毒性大,因此未能实现商业化及广泛应用。一氧化氮荧光探针3-氨基,4-氨甲基-2’,7’-二氟荧光素二乙酸盐(3-Amino,4-aminomethyl-2’,7’-difluorescein diacetate,DAF-FM DA)已商业化并被广泛应用于胞内一氧化氮检测。其以荧光素为荧光基团,邻苯二胺的-NH为识别基团。一氧化氮与DAF-FM DA中的-NH反应生成含三氮唑的荧光素衍生物,并发出强烈的荧光。甲醛与一氧化氮化学结构相似,分子量接近,且甲醛中的羰基也可与-NH发生加成反应。因此,我们推测DAF-FM DA也可能与甲醛反应产生荧光,从而可通过DAF-FM DA探针结合高效液相色谱法检验细胞内甲醛浓度。方法:(1)利用本实验室搭建的无水甲醛气体生产装置,将制备的无水甲醛气体通入到无水二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)溶液中,制备出无水甲醛DMSO溶液,高效液相色谱法检测溶液甲醛浓度。(2)碱解法酯解探针DAF-FM DA为DAF-FM。(3)DAF-FM分别与甲醛、一氧化氮反应后并利用高效液相色谱检测生成产物及其荧光强度。(4)高效液相色谱质谱联用法对DAF-FM分别与甲醛、一氧化氮反应后生成产物进行鉴定。(5)宫颈癌细胞(He La)经一氧化氮合酶抑制剂(N-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)孵育30分钟(minute,min),以抑制细胞内的一氧化氮的产生,再装载荧光探针DAF-FM DA孵育30 min,最后外源性地加入甲醛孵育30 min,通过倒置荧光显微镜观察胞内荧光,并收集细胞采用高效液相色谱法检测产物。(6)人乳腺癌细胞(MCF-7)、人肾上皮细胞(HEK293TN)、单核巨噬细胞(RAW264.7)、人脐静脉内皮细胞(HUVECs)经L-NAME孵育30 min,再装载荧光探针DAF-FM DA孵育30 min,并收集细胞采用高效液相色谱法检测产物。(7)单核巨噬细胞(RAW264.7)经脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)孵育6小时(hour,h),然后装载荧光探针DAF-FM DA孵育30 min,并收集细胞采用高效液相色谱法检测产物。结果:(1)甲醛、一氧化氮与DAF-FM反应后均有荧光产物生成。采用高效液相色谱法可有效分离。(2)DAF-FM与无水甲醛DMSO溶液反应产物荧光强度强于与等摩尔浓度的甲醛水溶液反应产物。(3)质谱扫描结果显示DAF-FM与甲醛反应生成的产物,分子离子峰为423.0。二级质谱结果显示,产生稳定的碎片离子峰m/z 379.0。DAF-FM与一氧化氮反应生成的产物分子离子峰为424.0,经二级质谱碰撞后,产生稳定的碎片离子峰m/z 379.9。(4)荧光探针DAF-FM DA装载He La细胞可观察到经L-NAME预处理的细胞在外源性甲醛孵育后胞内发绿色荧光,未经L-NAME预处理的细胞也可观察到绿色荧光。而单独经L-NAME处理的对照细胞未观察到荧光。(5)MCF-7、HEK293TN、RAW264.7、HUVECs细胞经L-NAME预处理再装载荧光探针DAF-FM DA后,经高效液相色谱法可检测到DAF-FM与甲醛的产物峰。(6)RAW264.7细胞经LPS孵育再装载荧光探针DAF-FM DA,经高效液相色谱法可检测到DAF-FM与甲醛或一氧化氮的产物峰。结论:(1)采用高效液相色谱法,荧光探针DAF-FM DA可以与无水甲醛DMSO溶液、甲醛水溶液、一氧化氮反应,生成具有荧光的产物。因此,通过高效液相色谱法探针DAF-FM DA可以用于检测甲醛和一氧化氮。(2)荧光探针DAF-FM DA与无水甲醛DMSO溶液结合效率强于与甲醛水溶液。(3)采用高效液相色谱法,荧光探针DAF-FM DA可检测胞内甲醛和一氧化氮。

关键词：甲醛荧光探针 DAF-FM DA 一氧化氮高效液相色谱法

PCSK9通过降解ApoER2拮抗apoE/ApoER2的抗炎作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PCSK9通过降解ApoER2拮抗apoE/ApoER2的抗炎作用

作者：白雪琴南华大学

学位级别：硕士

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症性疾病,血管壁的炎症是其发展过程中的主要表现之一。内皮细胞是贴衬于血管腔面的单层扁平上皮,其损伤及功能障碍不仅是AS的起始环节,同时在扩大血管炎症反应中也起了关键的作用。载脂蛋... 详细信息

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症性疾病,血管壁的炎症是其发展过程中的主要表现之一。内皮细胞是贴衬于血管腔面的单层扁平上皮,其损伤及功能障碍不仅是AS的起始环节,同时在扩大血管炎症反应中也起了关键的作用。载脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)是血浆脂蛋白的结构蛋白,在血浆富含甘油三酯脂蛋白代谢中起重要作用。除通过参与脂质代谢影响AS发生、发展外,apoE的抗炎作用对于抑制AS发生发展也十分重要。载脂蛋白E受体2(apolipoprotein E receptor-2,ApoER2)是一个广泛存在于细胞膜上的跨膜内吞受体蛋白,其作为apoE的受体对apoE具有高度的亲和性。有研究表明,apoE与内皮细胞膜上的ApoER2结合刺激内皮一氧化氮合酶产生及内皮细胞迁移,同时也减弱单核细胞-内皮细胞粘附。前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9)是近年来发现的一种新的蛋白水解酶,其通过调节肝细胞膜上的低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)的数量,影响血浆低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin,LDL-C)水平,从而间接参与AS的发生及进展。除降解LDLR外,PCSK9还可以降解LDLR家族的其他成员,如ApoER2、低密度脂蛋白受体相关蛋白1(low density lipoprotein receptor-related protein 1,LRP1)等。研究指出PCSK9与炎症相关联,炎症刺激PCSK9表达,同时,沉默PCSK9基因能减少炎性细胞因子的产生,但PCSK9与炎症间的具体机制仍待阐明。由于PCSK9能够降解ApoER2,那么PCSK9对ApoER2的降解与apoE/ApoER2抗炎作用之间是否存在联系,这将是本课题关注的重点。目的:PCSK9对ApoER2的降解与apoE/ApoER2抗炎作用间的联系。方法:Western blot检测LPS对TLR4、PCSK9、TNF-α、IL-6表达的影响;apoE3对LPS所致的HUVECs中PCSK9、ApoER2、TNF-α、IL-6表达的影响;PCSK9对ApoER2、TNF-α、IL-6表达的影响。并用ELISA分别检测各实验组上清PCSK9、TNF-α、IL-6水平。同时,Western blot检测apoE三种亚型(apoE2,apoE3,apoE4)对非炎状态下HUVECs、HepG2细胞PCSK9及ApoER2表达的影响。结果:明确LPS通过与HUVECs膜上的TLR4结合上调PCSK9、TNF-α、IL-6的表达。apoE3抑制LPS所致的HUVECs炎症状态并下调PCSK9的表达,上调ApoER2的表达,但apoE的三种亚型对非炎状态下HUVECs、HepG2细胞中PCSK9及ApoER2表达无影响。PCSK9下调ApoER2表达,并上调TNF-α、IL-6表达。结论:PCSK9通过降解ApoER2拮抗apoE/ApoER2的抗炎作用。

关键词：前蛋白转化酶枯草溶菌素9 载脂蛋白E 载脂蛋白E受体2 动脉粥样硬化炎症内皮细胞

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

英语专业学习者学习动机减退的动态实证研究

英语专业学习者学习动机减退的动态实证研究

作者：白雪琴中国海洋大学

学位级别：硕士

在外语或二语学习过程中，学习者的学习动机会受到多种因素的影响，消极因素对学习者的影响更加显著。在外语或是二语的学习过程当中，时常发现有相当部分的学习者在英语的学习过程中显现出了愈来愈弱的学习动机，有的学习者乃至呈现出... 详细信息

在外语或二语学习过程中，学习者的学习动机会受到多种因素的影响，消极因素对学习者的影响更加显著。在外语或是二语的学习过程当中，时常发现有相当部分的学习者在英语的学习过程中显现出了愈来愈弱的学习动机，有的学习者乃至呈现出了学习动机完全丧失的现象。事实上一些负面消极的因素在学习者学习英语的过程中大量存在，值得学者关注研究。本文从影响英语学习者学习英语的负面因素入手，着眼于研究学习者英语学习“动机减退”现象。文中的“动机减退”是指影响学习者学习动机激发以及降低学习者原有动机水平的现象，既包括学习者内部负面的影响因素也包含外部负面环境因素。“动机减退”研究起步较晚，研究成果相对较少，主要集中在欧美地区与亚洲的日本。国内学者对此现象的研究明显不足，并且研究多从宏观因子分析与模型构建角度出发。上述研究没有把动机看作一个动态的发展过程来研究。因此本研究采用定性与定量相结合的追踪式动态研究方式，不仅总结了影响英语学习的“动机减退”的主要因子，而且探究了英语专业学习者英语学习“动机减退”动态的变化趋势，以及各主要因子在不同阶段对学习者的影响程度，还有英语学习者学习“动机减退”的发展类型，旨在使“动机减退”微观化，为避免“动机减退”构建有针对性地解决措施。论文对某高校外国语学院英语专业一年级学习者进行了历时一年的英语学习“动机减退”现象的跟踪实证研究。研究分三个阶段分别对58，49，44名学习者（三次都有参与的人数为37）进行了问卷调查研究，以及对部分学习者和三位任课老师进行了回溯访谈，以此确认了影响英语专业学习者英语学习“动机减退”的主要因子，分别为：语言环境因子，未来职业因子，教师因子，自身因子，课堂因子，教材因子，学习辅助设备因子还有目标因子等。三个阶段的首要影响因子分别为：教师因子，语言环境因子还有未来职业规划因子。研究发现：“动机减退”是个动态发展变化的过程，主要表现在以下三方面：第一，每个阶段的主要动机减退影响因子都不同;第二，每个阶段出现动机减退的学习者人数不同;第三，学习者“动机减退”现象的变化形式不同，基本呈现六种变化趋势：积极平稳型，消极平稳型，倒U-型，U-型，上升型以及下降型。学习者的动机状况不是一成不变的，而是随着时间的推移发生改变，每个阶段的动机减退的影响因子都有所不同，呈现出不同的发展类型。为了提高并保持学习者的学习动机，教师应根据不同时间段学习者表现出来的动机减退现象的特点以及整个时期学习者的动机减退变化趋势特点适时进行策略调整，帮助学习者维持相对较高的学习动机状态。

关键词：英语专业学习者动机减退影响因子动态变化实证研究

武威汉代医简“瘀方”治疗类风湿关节炎35例临床观察

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

甘肃科技纵横 2020年第12期49卷 41-43页

作者：白雪琴兰州市中医医院甘肃兰州730050

目的:观察武威汉代医简“瘀方”治疗类风湿性关节炎(RA)的临床疗效。方法:将兰州市中医医院于2019年1月至2019年12月收治的70例RA患者就诊顺序分为观察组与对照组各35例。对照组予甲氨蝶呤片和柳氮磺吡啶肠溶片治疗,观察组在此基础上予... 详细信息

目的:观察武威汉代医简“瘀方”治疗类风湿性关节炎(RA)的临床疗效。方法:将兰州市中医医院于2019年1月至2019年12月收治的70例RA患者就诊顺序分为观察组与对照组各35例。对照组予甲氨蝶呤片和柳氮磺吡啶肠溶片治疗,观察组在此基础上予武威汉代医简“瘀方”治疗,观察治疗前后主要症状(关节疼痛、关节肿胀及关节屈伸不利)评分及红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)等实验室指标水平,并评价临床疗效。结果:观察组总有效率为94%,高于对照组的77%,2组患者临床疗效差异比较有统计学意义;2组患者治疗后关节疼痛、关节肿胀及关节屈伸不利等主要症状评分及ESR、CRP、RF等实验室指标水平较本组治疗前下降;治疗后观察组主要症状评分及实验室指标水平较对照组改善更明显。结论:武威汉代医简“瘀方”治疗类风湿关节炎疗效确切,能缓解患者主要临床症状,降低ESR、CRP及RF指标水平。

关键词：瘀方类风湿关节炎关节屈伸不利 C-反应蛋白类风湿因子

工业4.0背景下膜压饰面制品行业发展路径浅谈

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国人造板 2019年第9期26卷 22-24页

作者：白雪琴中国林产工业协会膜压饰面制品专业委员会

德国工业4.0与《中国制造2025》都指向一个核心——智能制造、制造革新。本文以CNC雕铣机发展为例,浅谈工业4.0环境下膜压饰面制品行业内的变革,其中,以CNC全自动正反面橱柜门板生产线为例,介绍膜压饰面制品造型开料生产线的全自动化,... 详细信息

德国工业4.0与《中国制造2025》都指向一个核心——智能制造、制造革新。本文以CNC雕铣机发展为例,浅谈工业4.0环境下膜压饰面制品行业内的变革,其中,以CNC全自动正反面橱柜门板生产线为例,介绍膜压饰面制品造型开料生产线的全自动化,有效地解决生产中存在的问题,提高生产效率与质量。引进先进生产设备,实现行业生产发展的自动化、智能化和信息化,构建行业发展新生态。

关键词：工业4.0 膜压饰面制品行业 CNC雕铣机

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

L-阿拉伯糖干预高血糖患者的临床研究

L-阿拉伯糖干预高血糖患者的临床研究

作者：白雪琴北京中医药大学

学位级别：硕士

本论文共分为两个部分：文献综述部分和临床研究部分。其中文献综述部分又包括糖尿病预防和治疗的现代研究进展、糖尿病预防和治疗的中医研究进展和L-阿拉伯糖的研究进展。糖尿病预防和治疗的研究进展主要从中医和西医两个不同角... 详细信息

本论文共分为两个部分：文献综述部分和临床研究部分。其中文献综述部分又包括糖尿病预防和治疗的现代研究进展、糖尿病预防和治疗的中医研究进展和L-阿拉伯糖的研究进展。糖尿病预防和治疗的研究进展主要从中医和西医两个不同角度对糖尿病的病因病机以及预防思想和治疗方法进行了诠释、探讨及分类总结,回顾了近些年中医中药和西医对糖尿病的研究和治疗进展情况,通过对比分析,总结了各医家在中药干预治疗糖尿病和西药控制糖尿病两个方面的研究进展,并对在目前研究中所存在的问题和今后的发展方向做了综述,从客观的角度突出了糖尿病预防与治疗的重要性。 L-阿拉伯糖的现代研究进展重点诠释了L-阿拉伯糖的理化特性和降糖降脂的生理功能,结合近些年各国各领域对L-阿拉伯糖的研究、制备和应用情况,为L-阿拉伯糖作为“健康糖”应用于预防糖尿病防止因为平常高糖高脂肪饮食引起的糖尿病提供了科学的综述。临床部分观察了L-阿拉伯糖对餐后血糖值的影响和抑制血糖升高的作用时间段。将符合世界卫生组织（WHO）和国际糖尿病联盟（IDF）于2006年11月共同发布的糖尿病及中间型高血糖（intermediate hyperglycaemia）诊断标准的IFG患者10例、IGT患者10例和2DMT患者10例作为测试组,进行蔗糖试剂和混合糖试剂两次实验。所有受试者在观察开始前均接受关于糖尿病预防方面的知识教育。每次测试进行四次血糖值的检查记录。观察时间为1个周,主要观察指标为一般情况、空腹血糖、1／2h后血糖、1h后血糖和2h后血糖等。结果：服用蔗糖与蔗糖和阿拉伯糖混合糖的1／2hPG比较存在差异显著;1／2h血糖差值、1h血糖差值比较存在差异显著,实验期间未发现有不良反应。结论：L-阿拉伯糖有短时间抑制餐后血糖升高的功效,对血糖升高幅度起主要作用,且在体内的有效作用时间段约为30分钟到1小时,进而可推出在该时间段内蔗糖对血糖的影响受到了L-阿拉伯糖的有效抑制。结论：L-阿拉伯糖可以抑制糖尿病及中间型高血糖患者负荷蔗糖后血糖的升高,而且L-阿拉伯糖为保健糖,食用安全,有临床推广价值。

关键词：空腹血糖受损糖耐量异常 2型糖尿病临床研究 L-阿拉伯糖

顾及地表覆被类型的青藏铁路安多段冻土形变特征分析

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

测绘与空间地理信息 2022年第8期45卷 45-48,53页

作者：白雪琴曹云刚西南交通大学地球科学与环境工程学院四川成都611756

冻土的冻涨融沉导致地表形变,影响铁路路基的稳定性,给青藏铁路的安全运营与维护带来巨大困难。本文利用Sentinel-1A时间序列遥感数据集,定量反演青藏铁路安多段2018年7月到2020年2月的地表形变信息,并采用多尺度面向对象分类法对该地... 详细信息

冻土的冻涨融沉导致地表形变,影响铁路路基的稳定性,给青藏铁路的安全运营与维护带来巨大困难。本文利用Sentinel-1A时间序列遥感数据集,定量反演青藏铁路安多段2018年7月到2020年2月的地表形变信息,并采用多尺度面向对象分类法对该地区进行地物分类,进而揭示不同覆盖类型下的地表形变特征。研究结果显示地表覆被类型与冻土形变特征有较强的关联性,其中植被可有效稳定土层环境,减弱冻土冻融活动;无任何覆盖物的裸土直接与外界进行水热交换,地表形变最为显著;人造地物则加重了地表载荷,且均位于平坦、气温较高的地区,该处冻土活动对温度变化敏感。此外,在地形起伏剧烈、土层含水量较小、气温较低的季节冻土区,降水为地表周期性形变的主导影响因素,从山顶到山谷,地表下沉趋势减弱;在地形起伏平缓、土层含水较大、气温较高的岛状多年冻土区,温度为地表周期性形变的主导因素,顶部到山谷的形变趋势增强。

关键词：青藏铁路地表形变地表覆被冻土

水胶体敷料预防脑卒中卧床患者压疮发生疗效的观察

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

临床医药文献电子杂志 2018年第58期5卷 125-126页

作者：白雪琴山西省大同市第四人民医院

目的探讨水胶体敷料预防脑卒中卧床患者发生压疮的效果。方法选取我院2011年1月;017年12月124例脑卒中卧床患者作为研究对象,按照护理方法的不同分为对照组和观察组,每组62例。对照组采取常规护理,观察组在常规护理基础上加用水胶体敷料... 详细信息

目的探讨水胶体敷料预防脑卒中卧床患者发生压疮的效果。方法选取我院2011年1月;017年12月124例脑卒中卧床患者作为研究对象,按照护理方法的不同分为对照组和观察组,每组62例。对照组采取常规护理,观察组在常规护理基础上加用水胶体敷料,对比两组患者压疮的发生率,护理满意度,并进行统计对比。结果观察组患者压疮的发生率明显低于对照组,住院期间护理满意度均明显好于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论水胶体敷料对于预防脑卒中卧床患者降低压疮的发生有明显的效果,并且可明显提高护理质量和护理满意度。

关键词：水胶体敷料压疮脑卒中

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

温中补虚小建中汤

抗癌之窗 2013年第4期 62-64页

作者：白雪琴

寒冬将至时,随着天气的变冷,很多人会因寒邪侵入体内,损伤脾胃,而引发胃脘及腹部疼痛,疼痛时伴有胃部寒凉感,得温症状减轻,受凉后疼痛加重,甚则出现精神不振、乏力厌食、手足发凉、泄泻等症状。严重影响个人健康和日常生活。其实以上症... 详细信息

寒冬将至时,随着天气的变冷,很多人会因寒邪侵入体内,损伤脾胃,而引发胃脘及腹部疼痛,疼痛时伴有胃部寒凉感,得温症状减轻,受凉后疼痛加重,甚则出现精神不振、乏力厌食、手足发凉、泄泻等症状。严重影响个人健康和日常生活。其实以上症状在中医理论中属于中焦虚寒的证候表现,是由于脾胃阳气不足,失其温煦,受纳运化功能减退,而致虚寒内生。从古到今,在众多针对治疗中焦虚寒证的方剂中,小建中汤是基本方剂之一,被中医名家广泛应用,疗效显著。

关键词：小建中汤温中补虚腹部疼痛中焦虚寒精神不振个人健康证候表现中医理论