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猪圆环病毒2d型病毒样颗粒疫苗的制备及发酵工艺研究

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中国兽医科学 2024年

作者：王运航吕熙段梦迪魏甜李毅张雅雅陈相杨郭慧琛孙世琪白满元敬晓棋榆林学院生命科学学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

为制备猪圆环病毒2d型（porcine circovirus type 2d， PCV2d）病毒样颗粒（virus-like particles， VLPs）疫苗并对其免疫效果进行评价。本研究采用原核表达系统表达PCV2d Cap蛋白，并对其发酵工艺条件进行了优化，去除His-SUMO标签使... 详细信息

为制备猪圆环病毒2d型（porcine circovirus type 2d， PCV2d）病毒样颗粒（virus-like particles， VLPs）疫苗并对其免疫效果进行评价。本研究采用原核表达系统表达PCV2d Cap蛋白，并对其发酵工艺条件进行了优化，去除His-SUMO标签使其体外自组装形成VLPs，通过SDS-PAGE和Western-blot进行验证，采用透射电镜和纳米粒度仪进行表征，将验证正确的VLPs免疫小鼠，测定其抗体水平和细胞因子水平。结果显示，在0.5 mmol/L IPTG、N源补料速率为12%时，蛋白表达量最高，利用透射电镜、纳米粒度仪进行表征鉴定，发现PCV2d可自组装形成VLPs，粒子直径约为20～25 nm。PCV2d VLPs与ISA 201佐剂混合免疫小鼠，特异性抗体滴度达到1∶512以上，中和抗体滴度达到1∶32以上，IL-4和IFN-γ细胞因子水平均可达到80 pg/mL，且明显高于PBS组。综上所述，本研究利用原核表达系统构建表达并成功获得PCV2d VLPs，且可以诱导机体产生良好的细胞免疫和体液免疫，这为猪圆环病毒2d型疫苗及猪圆环病毒多价疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2d型病毒样颗粒大肠杆菌表达系统发酵工艺

基于猪圆环病毒2型病毒样颗粒的间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国兽医科学 2022年第1期52卷 56-61页

作者：敬晓棋王运航张韵白满元榆林学院生命科学学院榆林市动物疾病诊断与检测重点实验室陕西榆林719000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室片肃兰州730046

为了建立一种更加安全、可靠的猪圆环病毒2型(PCV2)抗体检测方法,以实验室前期通过大肠杆菌表达系统获取的PCV2病毒样颗粒(VLPs)为包被抗原,建立了一种间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法检测272份来自不同猪场的血清,并与不同间接EL... 详细信息

为了建立一种更加安全、可靠的猪圆环病毒2型(PCV2)抗体检测方法,以实验室前期通过大肠杆菌表达系统获取的PCV2病毒样颗粒(VLPs)为包被抗原,建立了一种间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法检测272份来自不同猪场的血清,并与不同间接ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果表明,基于PCV2 VLPs的间接ELISA的特异性和敏感性分别为100.00%和91.67%。其与Ceditest CIRC Ig G ELISA试剂盒(Cedi-Diagnostics B.V.)和猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒(科前)的符合率分别为97.56%和95.12%。因此,基于PCV2 VLPs的间接ELISA可以有效地用于猪血清样本中PCV2抗体的检测,为PCV2的流行病学调查及PCV2 VLPs疫苗的免疫效果评价提供了新的选择。

关键词：猪圆环病毒2型病毒样颗粒间接ELISA 敏感性特异性

我国口蹄疫生物制品知识产权保护现状分析及建议

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中国兽医杂志 2023年第7期59卷 150-153页

作者：白满元董虎孙世琪刘业兵郭慧琛宋建领苗海生田波中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 中国兽医药品监察所北京海淀100081 云南省畜牧兽医科学院云南昆明650000

口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触传染性动物疫病[1],感染猪、牛、羊等主要畜种,可造成巨大的经济损失,引发严重的负面社会影响。世界动物卫生组织... 详细信息

口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触传染性动物疫病[1],感染猪、牛、羊等主要畜种,可造成巨大的经济损失,引发严重的负面社会影响。世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,OIE)将其列为法定报告的动物传染病,我国政府将其排在一类动物传染病首位,这充分显示了国内外对该病的重视程度。预防和控制牲畜口蹄疫是各级政府所面临的紧迫而严峻的课题,因此各种口蹄疫疫苗和诊断产品不断被推向市场。在我国加大知识产权保护的大背景下,如何保护口蹄疫相关生物制品所涉及技术的知识产权,增强产品研制和技术创新单位的科研信心,保护其利益不受侵犯,是当下行业内科研人员和各级政府亟需关注的问题。本文通过统计分析我国近年来的口蹄疫生物制品的知识产权现状和关联行业情况,对口蹄疫生物制品相关知识产权保护提出了建议。

关键词：动物传染病口蹄疫疫苗知识产权保护生物制品分析及建议牲畜口蹄疫口蹄疫病毒

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港口物流绩效评价研究

港口物流绩效评价研究

作者：白满元燕山大学

学位级别：硕士

经济全球化和物流技术的迅猛发展,为港口物流的发展提供了广阔的国际市场和先进的技术支持,但同时也使港口物流面临着更加激烈的竞争和复杂的挑战。因此,通过港口物流绩效评价改善绩效水平,对于港口物流适应新发展有着重要意义。本文研... 详细信息

经济全球化和物流技术的迅猛发展,为港口物流的发展提供了广阔的国际市场和先进的技术支持,但同时也使港口物流面临着更加激烈的竞争和复杂的挑战。因此,通过港口物流绩效评价改善绩效水平,对于港口物流适应新发展有着重要意义。本文研究的主要目的是系统地构建港口物流绩效评价的指标体系和评价模型,为改善港口物流绩效提供理论依据。根据研究需要,主要采用对比分析、定性分析与定量分析相结合、理论分析与实证分析相结合等方法论述了如何有效开展港口物流绩效评价。首先,回顾了国内外港口物流绩效评价的相关理论研究现状,尤其是重点分析了评价指标的选取和评价模型的构建,为下文系统构建港口物流绩效评价体系提供借鉴。其次,从港口物流的演变过程,以及港口物流新发展阶段的基本功能、延伸功能和特点进行了分析;接着系统分析了港口物流绩效评价的概念、作用、过程和综合评价方法等。再次,重点从财务、物流作业、客户服务和员工素质等方面设计了港口物流绩效评价指标体系,并且采用类加权主成分模型和系统聚类法定量分析港口物流绩效水平。最后,通过实证分析国内港口物流企业的绩效水平,论证了本文构建的指标体系和评价模型的科学性,并依据评价结果,提出了相应的发展对策。

关键词：港口物流绩效评价指标体系类加权主成分模型系统聚类分析

不同佐剂对口蹄疫病毒样颗粒疫苗免疫效果的评价

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中国兽医学报 2023年第12期43卷 2439-2444页

作者：王翱飞滕志东罗新柳海云董虎白满元孙世琪郭慧琛张小丽甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730000 云南省畜牧兽医科学院云南热带亚热带动物病毒病实验室云南昆明650224

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是一种高度传染性疾病,严重影响着畜牧业的发展。近年来,病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗因具有安全、高效等优点,成为当前FMD疫苗研究热点。为解决FMDV VLPs疫苗免疫原性弱的问题,本研... 详细信息

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是一种高度传染性疾病,严重影响着畜牧业的发展。近年来,病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗因具有安全、高效等优点,成为当前FMD疫苗研究热点。为解决FMDV VLPs疫苗免疫原性弱的问题,本研究选取CpG、GM-CSF和FliB佐剂,与ISA206联合后分别与FMDV VLPs配伍,免疫豚鼠后通过检测豚鼠特异性抗体、中和抗体、脾淋巴细胞增殖能力及FMDV的攻毒保护率,探究其对FMDV VLPs疫苗的免疫增强效果。结果表明,CpG与ISA206联合作为佐剂可有效地刺激机体产生更高水平的特异性抗体和中和抗体,同时能够提高动物的攻毒保护率,从而增强了FMDV VLPs疫苗的免疫效力,研究结果为FMDV VLPs疫苗及其他蛋白质类疫苗最优佐剂的选择提供了依据。

关键词：口蹄疫病毒样颗粒疫苗佐剂

生物矿化的口蹄疫病毒样颗粒疫苗的免疫原性评价

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畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1598-1607页

作者：李硕张韵白满元赵瑞翀宋河涛穆素雨滕志东董虎马娥宁孙世琪郭慧琛尹双辉中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室兰州大学动物医学院兰州730000 甘肃农业大学动物医学院兰州730070 云南省畜牧兽医科学院云南热带亚热带动物病毒病实验室昆明650224

生物矿化技术可以增强口蹄疫(foot-and-mouth,FMD)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的耐热性,但并无试验数据支撑矿化FMD VLPs用于临床的可行性。本研究旨在评价矿化FMD VLPs疫苗在牛和猪上的免疫原性。用VLPs和矿化VLPs免疫猪,... 详细信息

生物矿化技术可以增强口蹄疫(foot-and-mouth,FMD)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的耐热性,但并无试验数据支撑矿化FMD VLPs用于临床的可行性。本研究旨在评价矿化FMD VLPs疫苗在牛和猪上的免疫原性。用VLPs和矿化VLPs免疫猪,采用液相阻断ELISA(LPBE)检测猪血清中的特异性抗体滴度,并经酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测免疫猪外周血淋巴细胞(PBLs)经体外刺激后分泌的特异性IFN-γ。用矿化A型VLPs、矿化O型VLPs、矿化的A型和O型二价VLPs分别免疫牛,采用LPBE、中和试验、夹心ELISA检测血清中的特异性抗体、中和抗体以及IL-4和IFN-γ的含量。结果显示,VLPs与矿化VLPs免疫猪的血清抗体水平无显著差异,相对于VLPs,矿化VLPs免疫猪的PBLs分泌的IFN-γ水平高于VLPs免疫猪(P<0.05);3种疫苗免疫牛血清中IL-4和IFN-γ水平均高于PBS组,矿化二价疫苗与相应的矿化单价疫苗免疫牛的血清特异性抗体和中和抗体效价均无显著差异。综上所述,矿化VLPs对牛和猪均具有良好的免疫原性,不同血清型的矿化VLPs可以联合使用并且矿化壳层可增强VLPs诱导细胞免疫应答的能力。

关键词：口蹄疫病毒病毒样颗粒疫苗生物矿化动物免疫

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银行业管制放松与地区金融科技发展

金融评论 2024年第3期16卷 23-48,155,156页

作者：胡海峰白宗航班元浩北京师范大学经济与工商管理学院金融系山东财经大学金融学院中国社会科学院数量经济与技术经济研究所

以金融科技赋能金融高质量发展是推进中国式现代化的内在要求,也是优化中国金融体系结构、探索中国特色金融发展道路的根本遵循。本文基于2003~2021年全国工商注册企业和银行业分支机构数据,系统考察银行业管制放松对地区金融科技发展... 详细信息

以金融科技赋能金融高质量发展是推进中国式现代化的内在要求,也是优化中国金融体系结构、探索中国特色金融发展道路的根本遵循。本文基于2003~2021年全国工商注册企业和银行业分支机构数据,系统考察银行业管制放松对地区金融科技发展的影响及其作用机制。研究发现,银行业管制放松显著促进地区金融科技发展,这一结论在经过一系列内生性处理和稳健性检验后依然稳健。机制分析表明,银行业管制放松主要通过金融可得性和人才集聚两条路径促进地区金融科技发展,并且适当严格的监管环境有利于强化银行业管制放松对地区金融科技发展的促进作用。异质性分析表明,银行业管制放松对于地区金融科技发展的促进作用在高银行业结构多样性、高金融稳定性地区以及中心和内陆城市更加显著。进一步地,银行业管制放松对地区金融科技的推动作用虽然能够改善家庭金融市场参与度,但也会导致金融鸿沟和网络金融风险。本文的研究为数字经济时代以金融科技推动构建中国式现代化金融体系提供政策参考。

关键词：金融科技银行业管制放松金融监管金融高质量发展

铁素体系耐热钢焊接热影响区相变行为的CSLM原位观察

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金属学报 2024年第6期60卷 802-816页

作者：申洋谷征满王聪东北大学冶金学院沈阳110819 南昌航空大学江西省航空构件成形与连接重点实验室南昌330063

铁素体系耐热钢焊接时热影响区的相变行为会严重影响焊接件的室温组织,在后续严苛的条件下运行服役时会对电站安全稳定运行产生严重威胁。高温激光扫描共聚焦显微镜(CSLM)能够重现热影响区焊接热循环,实现对微观组织演变的原位观察以及... 详细信息

铁素体系耐热钢焊接时热影响区的相变行为会严重影响焊接件的室温组织,在后续严苛的条件下运行服役时会对电站安全稳定运行产生严重威胁。高温激光扫描共聚焦显微镜(CSLM)能够重现热影响区焊接热循环,实现对微观组织演变的原位观察以及相变动力学的量化分析,具有优化焊接工艺和促进耐热钢铁材料发展的潜力。本工作利用CSLM对P11、P22、P913种典型Cr-Mo铁素体耐热钢热影响区连续冷却过程中的相变行为进行了原位表征,研究板条组织的生长特征与相变动力学。结果表明,根据形核位置能量势垒的高低,贝氏体板条依次在原奥氏体晶界、夹杂物、晶粒内部畸变区域、先前的贝氏体板条、晶粒内部的自由表面上形核;同时,依附于原奥氏体晶界和先前贝氏体生长的贝氏体板条以及在原奥氏体晶粒内部呈放射状切变生长的马氏体板条均通过碰撞晶界或其他板条的方式停止生长,并形成交叉互锁的结构。随着温度的降低,粗晶热影响区中板条的生长速率明显高于细晶热影响区,这主要归因于过冷度的增加和原奥氏体晶粒尺寸的增大。

关键词：铁素体耐热钢热影响区固态相变原位观察高温激光扫描共聚焦显微镜

基于broccoli的RNA荧光适体设计与筛选

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四川大学学报（自然科学版） 2024年第4期61卷 310-319页

作者：何祖洋白九元赵云四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610065

为了在活细胞RNA成像中提供更加精准的工具,本文旨在基于broccoli的RNA荧光标记创建荧光强度高、稳定性好的绿色荧光适体.采用理性设计对broccoli进行优化,并通过测定光谱特征和理化性质对broccoli变体进行多轮筛选.结果发现基于对RNA... 详细信息

为了在活细胞RNA成像中提供更加精准的工具,本文旨在基于broccoli的RNA荧光标记创建荧光强度高、稳定性好的绿色荧光适体.采用理性设计对broccoli进行优化,并通过测定光谱特征和理化性质对broccoli变体进行多轮筛选.结果发现基于对RNA荧光适配体broccoli的三轮突变筛选,获得了荧光强度提升3.3倍的broccoli四位点突变体(命名为Bro);再利用设计的3WJ支架,组建了3WJ-n×Bro RNA荧光适配体家族;采用嵌入串联重复Bro的方式可以显著提升适体的荧光强度,其中3WJ-4×Bro的荧光强度超过3WJ-Bro的2.7倍,且表现出更低的盐离子依赖性和更高的热稳定性、光稳定性和监测灵敏度.结果表明本文设计出的3WJ-n×Bro家族并从中筛选出优异的核酸适配体3WJ-4×Bro,可为在RNA水平上实现活细胞RNA成像提供可视化工具.

关键词： RNA荧光适体 Broccoli适体 RNA成像