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鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用

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河南农业科学 2024年第2期53卷 128-135页

作者：魏蔷李青梅金前跃宋亚鹏白怡霖张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 郑州大学农学院河南郑州450001

为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iE... 详细信息

为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶2~7和1∶2~4。亚型鉴定表明,这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型,重链均为IgG1亚型。将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原,与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%。综上,成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株,二者分泌抗EDSV特异性抗体,且这2种抗体具有中和EDSV感染活性,可应用于EDSV的临床检测。

关键词：减蛋综合征病毒纤维蛋白中和性单克隆抗体抗体中和效价双抗体夹心ELISA

猪戊型肝炎病毒血清抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

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猪戊型肝炎病毒血清抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

作者：白怡霖西北农林科技大学

学位级别：硕士

戊型病毒性肝炎(Hepatitis E)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)引起的一种人畜共患病,猪是其自然储存宿主。因此猪群中HEV感染的监控对该病的防控和公共卫生都具有重要的意义。目前对猪HEV感染的检测技术主要包括免疫电镜、巢式... 详细信息

戊型病毒性肝炎(Hepatitis E)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)引起的一种人畜共患病,猪是其自然储存宿主。因此猪群中HEV感染的监控对该病的防控和公共卫生都具有重要的意义。目前对猪HEV感染的检测技术主要包括免疫电镜、巢式RT-PCR和ELISA方法。其中ELISA因其快速且方便的优点,得到了广泛应用。目前,我国市场上猪HEV抗体检测的商品化试剂盒多数是以基因1型HEV ORF2或ORF3蛋白为包被抗原建立的ELISA方法。然而,一方面,我国猪群中HEV主要以基因4型为主;另一方面,有研究表明不同基因型ORF2蛋白检测猪血清中HEV抗体差异显著,从而导致不同试剂盒相互之间检测结果符合率低。因此,急需建立一种准确性、敏感性高和特异性好的ELISA方法,为猪群中HEV感染的监控提供技术支撑。本课题利用我国猪群中流行的基因4型猪HEV ORF2蛋白为包被抗原,从而提高建立的ELISA方法对我国猪群中猪HEV抗体检测的特异性和敏感性。通过优化反应条件,建立了猪HEV抗体间接ELISA检测方法,并分析了该方法的敏感性、特异性、重复性以及与商品化试剂盒的符合率,评价其临床应用。SDS-PAGE结果表明目的蛋白在大肠杆菌中成功表达,大小约为40 ku,且以包涵体形式存在,通过蛋白复性和分子筛纯化后,获得纯度较高的目的蛋白,用猪HEV阳性血清作为一抗,Western blot结果证明纯化的sHEV-ORF2-C蛋白抗原性较好,可作为建立ELISA方法的包被抗原。优化ELISA条件,最终确定,抗原最佳包被量为200 ng/孔,血清最佳稀释度为1:200,包被缓冲液为碳酸盐缓冲液(pH 9.6),最佳封闭条件为2.5%的脱脂奶粉37℃封闭2 h,酶标二抗5000倍稀释后作用1 h,TMB显色液作用10min。用该方法对91份HEV阴性血清进行检测,确定临界值为0.296。其它重要猪疫病的阳性血清及猪HEV阴性血清的OD小于0.296,表明该间接ELISA方法的特异性良好。对阳性血清做倍比稀释,当1:12,800稀释时,OD值小于0.296,表明该方法敏感性良好。板内重复试验和板间重复试验变异系数为5%和10%,表明建立的间接ELISA方法具有很好的重复性和稳定性。用本研究建立的ELISA方法和北京万泰商品化试剂盒同时检测182份临床猪血清,其中建立的ELISA方法检测阳性93份,阴性89份;北京万泰商品化试剂盒检测阳性77份,阴性105份,与北京万泰商品化试剂盒符合率为91.2%。对来自各地市猪场送检的477份临床猪血清进行检测,检出抗体阳性样品210份,阳性率为44.03%(210/477),表明该方法可用于临床猪血清中猪HEV抗体的检测。因此,本研究建立的猪HEV抗体间接ELISA检测方法,敏感性、特异性良好,准确率较高,适用于临床样品的检测和血清流行病学调查。

关键词：猪戊型肝炎病毒猪HEV 间接ELISA 抗体 ORF2蛋白

计及生物质能源化的微能源网多尺度调度优化模型

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电力建设 2024年第8期45卷 24-35页

作者：喻沁怡白西平张欧婷鞠立伟华北电力大学经济与管理学院北京市102206

在“双碳”目标推动下,我国正致力于构建高效低碳的能源体系。然而,风、光等可再生能源的间歇性和波动性给微能源网稳定运行带来挑战,同时大量秸秆、垃圾、生物污水等生物质废物资源未被充分开发和利用。因此,提出基于农村生物质废弃物... 详细信息

在“双碳”目标推动下,我国正致力于构建高效低碳的能源体系。然而,风、光等可再生能源的间歇性和波动性给微能源网稳定运行带来挑战,同时大量秸秆、垃圾、生物污水等生物质废物资源未被充分开发和利用。因此,提出基于农村生物质废弃物能量转换系统的微能源网架构,设计两阶段调度优化框架:在日前阶段,以运行成本最低和生态环境效益最大为目标建立多目标调度优化模型;在日内阶段,引入鲁棒优化描述风光不确定性,构造以偏差调整成本最小为目标的日内滚动调度优化模型。最后,以中国北方某微能源网开展实例分析,结果表明:1)多时间尺度调度模型可发挥各单元的调节能力,衔接日前调度计划与日内调度策略,制定最优调度策略;2)日前多目标调度优化考虑不可能三角,以适度的经济成本增加5.02%为代价,成功实现生态效益提升14.82%。总的来说,所提优化模型能促进农村生物质废物资源能源化利用,有利于实现能源结构的清洁低碳转型。

关键词：生物质能源化微能源网多时间尺度两阶段调度优化

新冠疫情常态化防控期间大学生自我控制及领悟社会支持与其心理健康的关系探析

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西安交通大学学报(医学版) 2024年

作者：王跃霖刘毅帆杨姝怡王思瑶杨昭西安交通大学第一附属医院消化内科西安市第五医院控制院内感染办公室西安交通大学第一附属医院保卫部西安交通大学第一附属医院妇产科

目的探索突发新冠疫情背景下，历经防控隔离措施后的西安高校大学生情绪调节方式与心理健康状况的相关性。方法基于问卷星平台对西安大学生人群进行抽样调查，采用自我控制量表（SCS）、领悟社会支持量表（PSSS）、抑郁-焦虑-压力量... 详细信息

目的探索突发新冠疫情背景下，历经防控隔离措施后的西安高校大学生情绪调节方式与心理健康状况的相关性。方法基于问卷星平台对西安大学生人群进行抽样调查，采用自我控制量表（SCS）、领悟社会支持量表（PSSS）、抑郁-焦虑-压力量表精简版（DASS-21）和睡眠状况自评量表（SRSS），记录其人口学特征和本次疫情相关经历，评估不同年龄、性别、学科和生源地大学生的自我控制和社会支持方式差异，计算相关系数，分析其与大学生心理健康状况的相关性。结果共收集512份有效大学生调查问卷。在突发新冠疫情封控后，在校大学生自我控制和领悟社会支持存在性别和学科差异，即相比于男生，女生更容易获得社会支持（P=0.031）、朋友支持（P=0.008）和其他支持（P=0.029）；相比于文科，理工科大学生更容易进行自我控制，尤其是健康习惯（P=0.001）、节制娱乐（P=0.002）和冲动控制（P=0.001）。而学生的年龄和生源地对自我控制和领悟社会支持能力的影响无统计学差异。大学生的年龄与压力程度和睡眠情况相关，自我控制能力以及领悟社会支持能力与疫情封控期间的心理健康状态及睡眠情况也存在相关性。结论大学生人群在突发疫情封控期间且正常学习生活受到影响的情况下，自我控制和领悟社会支持能力存在性别和学科差异，且更容易发生负性情绪和睡眠障碍，这些情况多见于高年级、男性且文科学专业。疫情期间积极地自我控制和寻求社会支持能够缓和负性情绪和睡眠障碍。

关键词：新冠疫情封控心理健康社会支持自我控制

ESG表现对体育企业价值的影响:企业创新能力的中介效应

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体育学刊 2024年第3期31卷 72-78页

作者：白怡珺陈刚朱冀白震武汉体育学院体育战略与政策研究中心湖北武汉430076 河南大学体育与健康研究所河南开封475001

采用79家A股体育上市公司2018—2022年的面板数据,实证检验ESG表现对体育企业价值的影响,并探究体育企业创新能力在两者间的中介作用。研究发现:良好的ESG表现可以显著提升体育企业价值,且体育企业创新能力在二者间起到中介作用,即良好... 详细信息

采用79家A股体育上市公司2018—2022年的面板数据,实证检验ESG表现对体育企业价值的影响,并探究体育企业创新能力在两者间的中介作用。研究发现:良好的ESG表现可以显著提升体育企业价值,且体育企业创新能力在二者间起到中介作用,即良好的ESG表现在增强体育企业技术创新能力的同时对体育企业价值提升作用会更加显著。异质性检验发现,ESG表现对体育用品和体育服务两类公司的企业价值依然都有显著的正向促进作用。研究认为,体育企业应积极践行ESG发展理念,这有利于体育企业完成“双碳”目标,实现可持续发展与高质量发展;有利于体育企业提升综合实力,实现企业价值;更有利于推动体育产业发展,形成经济发展的良性循环。

关键词：体育企业价值环境、社会、公司治理企业创新能力中介效应

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新冠疫情常态化防控期间大学生自我控制及领悟社会支持与心理健康的关系

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西安交通大学学报（医学版） 2024年第4期45卷 680-685页

作者：王跃霖刘毅帆杨姝怡王思瑶杨昭西安交通大学第一附属医院保卫部陕西西安710061 西安市第五医院控制院内感染办公室陕西西安710082 西安交通大学第一附属医院消化内科陕西西安710061 西安交通大学第一附属医院妇产科陕西西安710061

目的探索突发新冠疫情背景下,西安高校大学生情绪调节方式与心理健康状况的相关性。方法基于问卷星平台对西安大学生人群进行抽样调查,采用自我控制量表(SCS)、领悟社会支持量表(PSSS)、抑郁-焦虑-压力量表精简版(DASS-21)和睡眠状况... 详细信息

目的探索突发新冠疫情背景下,西安高校大学生情绪调节方式与心理健康状况的相关性。方法基于问卷星平台对西安大学生人群进行抽样调查,采用自我控制量表(SCS)、领悟社会支持量表(PSSS)、抑郁-焦虑-压力量表精简版(DASS-21)和睡眠状况自评量表(SRSS),记录其人口学特征和本次疫情相关经历,评估不同年龄、性别、学科和生源地大学生的自我控制和社会支持方式差异,计算相关系数,分析其与大学生心理健康状况的相关性。结果共收集512份有效大学生调查问卷。在突发新冠疫情封控后,在校大学生自我控制和领悟社会支持存在性别和学科差异,即相比于男生,女生更容易获得社会支持(P=0.031)、朋友支持(P=0.008)和其他支持(P=0.029);相比于文科,理工科大学生更容易进行自我控制,尤其是健康习惯(P=0.001)、节制娱乐(P=0.002)和冲动控制(P=0.001)。而学生的年龄和生源地对自我控制和领悟社会支持能力的影响无统计学差异。大学生的年龄与压力程度和睡眠情况相关,自我控制能力以及领悟社会支持能力与疫情封控期间的心理健康状态及睡眠情况也存在相关性。结论大学生人群在突发疫情封控期间且正常学习生活受到影响的下,自我控制和领悟社会支持能力存在性别和学科差异,且更容易发生负性情绪和睡眠障碍,这些情况多见于高年级、男性和文科学专业。疫情期间积极地自我控制和寻求社会支持能够缓和负性情绪和睡眠障碍。

关键词：新冠疫情封控心理健康社会支持自我控制

瑞香素调节STING/TBK1/IRF3信号通路对脓毒症大鼠免疫炎症反应的影响

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西安交通大学学报(医学版) 2024年

作者：温亚李燕白思怡陈凯林成丽英李亚冬山西医科大学第二医院急诊医学科

目的探究瑞香素调节STING/TBK1/IRF3信号通路对脓毒症大鼠免疫炎症反应的影响。方法本研究选用80只雄性SpragueDawley（SD）大鼠，将大鼠随机分为4组，每组20只：假手术组，余60只按照盲肠结扎穿刺法（CLP）构建脓毒症小鼠模型，腹腔... 详细信息

目的探究瑞香素调节STING/TBK1/IRF3信号通路对脓毒症大鼠免疫炎症反应的影响。方法本研究选用80只雄性SpragueDawley（SD）大鼠，将大鼠随机分为4组，每组20只：假手术组，余60只按照盲肠结扎穿刺法（CLP）构建脓毒症小鼠模型，腹腔注射不同剂量瑞香素，分为无瑞香素模型组（0mg/kg）、低剂量组（2.5mg/kg），高剂量组（5mg/kg），每组20只，模型组及假手术组腹腔注射等量0.1%DMSO。观察CLP建模后的各组大鼠存活率。收集肺、肾、肝和脾组织进行病理组织学分析。ELISA检测大鼠血清炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β），流式细胞术检测外周血中的T淋巴细胞亚群，Westernblotting检测STING/TBK1/IRF3信号通路蛋白表达变化。结果与假手术组相比，模型组大鼠生存率降低（P白表达均下调（P白表达升高（P<0.05）。结论瑞香素可通过调节STING/TBK1/IRF3信号通路，改善脓毒症大鼠免疫炎症反应。

关键词：瑞香素脓毒症盲肠结扎穿刺 STING/TBK1/IRF3信号通路免疫调节炎症

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解放军医学杂志 2024年

作者：周鑫范昊王安秦嘉沛白怡冰马志强胡毅解放军总医院第二医学中心解放军总医院第五医学中心肿瘤医学部肿瘤内科解放军医学院空军军医大学第二附属医院胸外科

目的　研究DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)表达与肺鳞癌预后的相关性及其介导肺鳞癌进展的潜在分子机制。方法　回顾性纳入2009年5月－2014年1月于空军军医大学第二附属医院胸外科接受过手术的47例肺鳞癌患者。采用免疫组织化学染色检测DNMT3... 详细信息

目的　研究DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)表达与肺鳞癌预后的相关性及其介导肺鳞癌进展的潜在分子机制。方法　回顾性纳入2009年5月－2014年1月于空军军医大学第二附属医院胸外科接受过手术的47例肺鳞癌患者。采用免疫组织化学染色检测DNMT3a在肺鳞癌组织与配对癌旁组织中的表达，根据肺鳞癌中DNMT3a免疫组化评分中位数分为DNMT3a高表达组(n=25)与DNMT3a低表达组(n=22)，结合临床病理信息与公共生物学信息数据库进行预后相关性分析。为探索DNMT3a介导肺鳞癌进展的分子机制，采用慢病毒感染法构建DNMT3a过表达的肺鳞癌H1703细胞系，设置DNMT3a过表达组与对照组，采用功能表型实验检测两组细胞增殖、迁移的差异。构建DNMT3a过表达的裸鼠皮下肿瘤异种移植模型，设置DNMT3a过表达组与对照组(n=3)，观察两组皮下移植瘤的生长。Westernblotting检测两组细胞与两组皮下移植瘤中相关蛋白的表达。功能回复实验先采用c-Myc抑制剂(10058-F4)处理DNMT3a过表达细胞，EdU增殖染色实验检测细胞增殖；后采用RNAi-锌指E盒结合同源框1(ZEB1)慢病毒感染DNMT3a过表达细胞敲低ZEB1表达，Transwell迁移实验检测细胞迁移。最后，采用DNMT特异性抑制剂(SGI-1027)处理DNMT3a过表达组与对照组细胞，观察抑制DNMT3a后细胞的增殖与迁移。结果免疫组化染色结果显示，肺鳞癌中DNMT3a免疫组化评分明显高于癌旁组织(P白表达量明显高于对照组(P白的表达则无明显变化(P>0.05)。此外，SGI-1027抑制DNMT3a表达后，DNMT3a过表达组与对照组克隆形成数与细胞迁移率均明显减少或降低(P<0.05)。结论　DNMT3a高表达是肺鳞癌患者预后不良的独立危险因素，DNMT3a可能通过上调c-Myc表达促进肺鳞癌的增殖能力，上调ZEB1表达促进肺鳞癌的迁移能力。

关键词： DNA甲基转移酶3a 肺鳞癌预后增殖迁移

子宫内膜异位症经阴道超声粘连评分系统的研究进展

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中华超声影像学杂志 2024年第5期33卷 441-445页

作者：朱熠罗欣怡蒋卓霖李晏杰石川光也四川省肿瘤临床医学研究中心四川省肿瘤医院·研究所四川省癌症防治中心电子科技大学附属肿瘤医院超声医学中心成都610041 日本国立癌症中心中央病院妇科东京104-0045

子宫内膜异位症性粘连是一种致使女性遭受腹痛、性交痛和不孕等病症的病理状态,严重影响女性的生活品质。为此,精准地诊断其发病部位及播散程度,为患者提供有针对性的治疗方案显得尤为重要。然而,过去缺乏一种简便有效的手段以全面评估... 详细信息

子宫内膜异位症性粘连是一种致使女性遭受腹痛、性交痛和不孕等病症的病理状态,严重影响女性的生活品质。为此,精准地诊断其发病部位及播散程度,为患者提供有针对性的治疗方案显得尤为重要。然而,过去缺乏一种简便有效的手段以全面评估子宫内膜异位症性粘连。最近,日本医学专家们开发了一套经阴道超声粘连评分系统,旨在对子宫内膜异位症性粘连进行术前诊断和治疗监测。笔者将详细介绍这一评分系统及其优势和应用前景,以便为广大医学界同仁提供参考。

关键词：子宫内膜异位症经阴道超声粘连评分术前诊断道格拉斯窝闭塞