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核蛋白成分参与胚胎肝细胞AFP基因的活化

生物工程学报 1995年第3期11卷 272-275页

作者：刘海湖申庆祥中国科学院上海细胞生物学研究所上海200031

利用体外转录分析方法,在大鼠胚胎肝细胞核蛋白中,检测到促进AFP基因转录的蛋白因子,用同样的方法在成年大鼠肝细胞核蛋白中没有检测到促进AFP基因转录的任何成分。DNA结合分析找到了可能为蛋白因子的核蛋白成分,它们的大小分别为89、50... 详细信息

利用体外转录分析方法,在大鼠胚胎肝细胞核蛋白中,检测到促进AFP基因转录的蛋白因子,用同样的方法在成年大鼠肝细胞核蛋白中没有检测到促进AFP基因转录的任何成分。DNA结合分析找到了可能为蛋白因子的核蛋白成分,它们的大小分别为89、50、46和36kDa。

关键词： AFP基因蛋白因子体外转录核蛋白甲胎蛋白

人受精蛋白β整联蛋白配体区cDNA的克隆、表达及抗体制备

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第3期33卷 303-308页

作者：丁蓓蓓沈卫英蒋俶王健高尔生申庆祥上海市计划生育科学研究所国家计划生育药具重点实验室!上海200032

从人睾丸中抽提mRNA ,合成双链cDNA ,利用合成的PCR引物扩增受精蛋白 β(fertilinβ)的整联蛋白配体区cDNA(hf2 79)。序列分析表明 ,该区编码 93个氨基酸 ,与文献报道完全相同。将hf2 79插入质粒 pGEX 4T 2 ,构建 pGEX hf2 79表达质粒 ... 详细信息

从人睾丸中抽提mRNA ,合成双链cDNA ,利用合成的PCR引物扩增受精蛋白 β(fertilinβ)的整联蛋白配体区cDNA(hf2 79)。序列分析表明 ,该区编码 93个氨基酸 ,与文献报道完全相同。将hf2 79插入质粒 pGEX 4T 2 ,构建 pGEX hf2 79表达质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,表达菌株经IPTG诱导 ,可产生大量可溶性的表达蛋白GST HF93。SDS PAGE分析表明融合蛋白表观分子量为 38kD ,其含量占菌体可溶性蛋白的 5 0 %以上。表达产物经谷胱甘肽转硫酶 (GST)亲和层析柱纯化 ,得到 90 %以上纯度的融合蛋白。融合蛋白经凝血酶酶切 2h可得HF93肽。再经GST亲和层析柱去除GST ,得到纯度大于 80 %的HF93肽。将其和SDS PAGE凝胶上切下的HF93多肽条带一起用于免疫BALB/c小鼠 ,经ELISA检测 ,证明获得了较高滴度的抗体

关键词：人受精蛋白β整联蛋白配体区基因克隆基因表达大肠杆菌抗体

多巴胺D1受体在Sf9昆虫细胞中的表达及左旋氯代斯阔任对重组D1受体的激动作用(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第3期24卷 35-39页

作者：和友金文桥申庆祥陈新建金国章上海 200032 中国上海市计划生育研究所上海市计划生育研究所上海 200031 中国科学院上海生命科学研究院药物研究所

目的:在Sf9昆虫细胞中表达D1受体,并研究左旋氯代斯阔任对重组D1受体的激动作用。方法:构建含D1受体cDNA的重组杆状病毒,以其感染Sf9昆虫细胞得到D1受体表达。[~3H]SCH23390受体结合检测重组D1受体的药理特性。[~3H]SCH23390受体结合和c... 详细信息

目的:在Sf9昆虫细胞中表达D1受体,并研究左旋氯代斯阔任对重组D1受体的激动作用。方法:构建含D1受体cDNA的重组杆状病毒,以其感染Sf9昆虫细胞得到D1受体表达。[~3H]SCH23390受体结合检测重组D1受体的药理特性。[~3H]SCH23390受体结合和cAMP测定实验检测左旋氯代斯阔任对重组D1受体的激动作用。结果:在Sf9昆虫细胞中成功表达D1受体,[~3H]SCH23390与重组D1受体最大结合量(Bmax)为(0.94±0.06)nmol/g蛋白,[~3H]SCH23390与重组D1受体的结合解离常数(Kd)为(1.9±0.3)nmol/L,其药理特性与小牛纹状体脑匀浆所得结果一致。左旋氯代斯阔任对重组D1受体有高亲和力,解离常数Ki为(6.3±1.4)nmol/L;并剂量依赖地引起胞内cAMP增加,EC50为0.72μmol/L(95％可信限为0.67-0.77μmol/L),表现出D1激动作用。结论:在杆状病毒/昆虫细胞Sf9中,成功建立了D1受体异源表达系统。在细胞分子水平,直接证实了左旋氯代斯阔任对D1受体的激动作用。

关键词：重组蛋白质类多巴胺D1受体昆虫杆状病毒科左旋氯代斯阔任环腺苷一磷酸

单克隆非特异性抑制因子-β(MNSFβ)在大肠杆菌中的表达、抗体的制备及在小鼠子宫内膜上的组织定位

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实验生物学报 2002年第2期35卷 89-97页

作者：黄哲平柯碧霞王健申庆祥计划生育药具国家重点实验室上海市计划生育科学研究所上海200032

为了获得足够量的单克隆非特异性抑制因子-β蛋白(monoclonal nonspecific supressor factor β,MNSFβ)及其抗体用于探讨MNSFβ在着床中的作用机理,本研究构建了表达质粒pBV220/MNSFβ-hCGβ,在大肠杆菌中表达了融合蛋白MNSFβ-hCGβ,... 详细信息

为了获得足够量的单克隆非特异性抑制因子-β蛋白(monoclonal nonspecific supressor factor β,MNSFβ)及其抗体用于探讨MNSFβ在着床中的作用机理,本研究构建了表达质粒pBV220/MNSFβ-hCGβ,在大肠杆菌中表达了融合蛋白MNSFβ-hCGβ,用抗hCGβ抗体对表达产物进行鉴定,结果表明融合蛋白MNSFβ-hCGβ得到了正确表达,且分子量和理论值相近。表达产物MNSFβ-hCGβ经初步纯化后用于免疫Balb/C小鼠,制备抗体。同时,我们还构建了表达质粒pGEX-4T-2/MNSFβ,在大肠杆菌中表达了融合蛋白GST-MNSFβ。用融合蛋白GST-MNSFβ对融合前的免疫小鼠回忆刺激并进行检测,制备了抗MNSFβ多克隆抗体和单克隆抗体。应用所制备的多克隆抗体进行免疫组化研究,对MNSFβ在小鼠子宫内膜上进行了组织定位,结果显示,MNSFβ在着床日(受精后第4.5天)小鼠子宫非着床位点的表达和着床位点相比明显提高。

关键词：单克隆非特异性抑制因子-β MNSFβ 大肠杆菌表达抗体制备小鼠子宫内膜组织定位

大鼠睾丸黄体生成素受体剪切变异体cDNA在昆虫细胞中的高效表达

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生物工程学报 1996年第S1期12卷 27-32页

作者：申庆祥沈惠李昌麟刘海湖中国科学院上海细胞生物学研究所

研究了大鼠睾丸黄体生成素受体剪切变异体ｃＤＮＡ在昆虫细胞中的表达，并对其产物性质作了初步鉴定。ＳＤＳＰＡＧＥ银染和免疫印迹结果显示，表达产物呈两条带，分子量为３８５ｋＤａ的主带和分子量为４０ｋＤａ的次带。１２５Ｉ... 详细信息

研究了大鼠睾丸黄体生成素受体剪切变异体ｃＤＮＡ在昆虫细胞中的表达，并对其产物性质作了初步鉴定。ＳＤＳＰＡＧＥ银染和免疫印迹结果显示，表达产物呈两条带，分子量为３８５ｋＤａ的主带和分子量为４０ｋＤａ的次带。１２５ＩｈＣＧ结合印迹分析表明，表达产物Ｒ３１６具有与配基专一性结合的生物活力。竞争性配基结合曲线和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析结果显示，重组受体Ｒ３１６和配基ｈＣＧ有较高的亲和力，平衡解离常数Ｋｄ为８１５×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ。表达产物为与膜结合的蛋白。

关键词： LH/hCG受体核型多角体病毒表达载体剪切变异体表达昆虫细胞

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重组人血小板第4因子生物学活性的分析

中华血液学杂志 1997年第3期18卷 123-125页

作者：韩芝燕申庆祥韩忠朝上海贝特生物技术有限公司中国科学院上海细胞生物学研究所法国巴黎血管与血液研究所

目的：分析重组人血小板第４因子（ｒｈＰＦ４）的生物学活性。方法：采用小鼠骨髓巨核细胞以及人巨核细胞白血病细胞株，从体内和体外多方面比较天然ＰＦ４和ｒｈＰＦ４的生物学活性。结果：此ｒｈＰＦ４具有与天然ＰＦ４相同的抑制小... 详细信息

目的：分析重组人血小板第４因子（ｒｈＰＦ４）的生物学活性。方法：采用小鼠骨髓巨核细胞以及人巨核细胞白血病细胞株，从体内和体外多方面比较天然ＰＦ４和ｒｈＰＦ４的生物学活性。结果：此ｒｈＰＦ４具有与天然ＰＦ４相同的抑制小鼠骨髓巨核细胞祖细胞生长、减少集落形成的能力，这种抑制作用能被肝素中和；ｒｈＰＦ４对人巨核细胞白血病细胞株Ｍｅｇ－０１生长也有抑制作用。结论：ｒｈＰＦ４可取代天然ＰＦ４应用于临床及科研。

关键词：血小板第4因子生物学活性

在昆虫细胞中表达的人阿片受体与内源性G蛋白功能偶联

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第5期31卷 598-600页

作者：魏强王铁琳陈洁周德和池志强申庆祥中国科学院上海药物研究所!上海200031 上海市计划生育研究所!上海200032 中国科学院上海药物研究所!上海200031

通过放射性配体受体竞争性结合实验，细胞内ｃＡＭＰ水平分析，［３５Ｓ］ＧＴＰγ Ｓ结合分析，发现：Ｎａ＋和ＧＴＰ能降低激动剂与受体的亲和力；激动剂Ｄ２丙氨酸脑啡肽（ＤＡＧＯ）和羟甲芬太尼（ ... 详细信息

通过放射性配体受体竞争性结合实验，细胞内ｃＡＭＰ水平分析，［３５Ｓ］ＧＴＰγ Ｓ结合分析，发现：Ｎａ＋和ＧＴＰ能降低激动剂与受体的亲和力；激动剂Ｄ２丙氨酸脑啡肽（ＤＡＧＯ）和羟甲芬太尼（Ｏｈｍ）可以抑制毛喉素刺激引起的细胞内ｃＡＭＰ升高；ＤＡＧＯ和Ｏｈｍ还能有效地刺激［３５Ｓ］ＧＴＰγ Ｓ与昆虫细胞膜的结合，而纳洛酮和百日咳毒素（ＰＴＸ）的预处理能使激动剂的这种作用降低。表明在昆虫细胞中表达的人μ阿片受体与昆虫细胞内源性Ｇｉ／ｏ蛋白发生功能偶联。

关键词：人μ阿片受体内源性G蛋白昆虫细胞Sf9

几种阿片类药物在表达人μ阿片受体Sf9昆虫细胞中的受体亲和力及依赖性(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第9期24卷 21-25+110页

作者：刘忠华和友金文桥陈新建张鸿萍申庆祥池志强上海 200032 中国上海市计划生育研究所中国科学院上海生命利学研究院上海药物研究所上海 201203 中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所

目的:用表达人μ受体的Sf9昆虫细胞(Sf9-μ细胞)研究二氢埃托啡、芬太尼、海洛因和哌替啶对μ受体亲和力与依赖性。方法:竞争结合实验检测受体亲和力;放免法删定cAMP;热板法测痛;纳洛酮催促跳跃评价身体依赖性。结果:Sf9-μ细胞经上述... 详细信息

目的:用表达人μ受体的Sf9昆虫细胞(Sf9-μ细胞)研究二氢埃托啡、芬太尼、海洛因和哌替啶对μ受体亲和力与依赖性。方法:竞争结合实验检测受体亲和力;放免法删定cAMP;热板法测痛;纳洛酮催促跳跃评价身体依赖性。结果:Sf9-μ细胞经上述药物孵育后,纳洛酮引起cAMP超射,以结合实验中Ki值与cAMP超射实验中的EC50值之比作为药物在Sf9-μ细胞的依赖性指数,以镇痛FD50与戒断反应中累积剂量的ED50之比作为小鼠身体依赖性指数,上述药物的两种依赖性指数之间以及受体亲和力与镇痛活性之间有较好的相关性。结论:Sf9-μ细胞可用来评价阿片类约物的受体亲和力及依赖潜能。

关键词：麻醉品 μ阿片受体竞争性结合环腺苷一磷酸镇痛阿片相关的紊乱

重组人绒毛膜促性腺激素β-亚基对C57BL小鼠免疫应答反应及抗血清特征的研究

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生殖与避孕 1997年第5期17卷 266-269页

作者：周清平申庆祥丁训诚上海市计划生育科学研究所上海200032 中国科学院上海细胞生物学研究所上海200031

采用福氏性剂，对C57BL小鼠进行重组hCGβ和天然hCGβ免疫应签反应的比较研究，结果表明：两者引发的抗血清性质相似，与hCG有较高的亲和力（K（γβ）≈5．86×108／mol／L，Kaβ≈8．18×108／mol／L）；抗血清能有效地抑制（125）I－... 详细信息

采用福氏性剂，对C57BL小鼠进行重组hCGβ和天然hCGβ免疫应签反应的比较研究，结果表明：两者引发的抗血清性质相似，与hCG有较高的亲和力（K（γβ）≈5．86×108／mol／L，Kaβ≈8．18×108／mol／L）；抗血清能有效地抑制（125）I－hCG与睾丸受体的结合，结果提示重组hCGβ抗血清与天然hCGβ抗血清相似，具有中和hCG的生物活性能力，重组hCGβ可作为免疫避孕疫苗的抗原。

关键词： hCGβ 免疫反应生物中和能力避孕疫苗