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基于mTOR/STAT3信号轴探讨桑色素诱导肺癌细胞自噬的机制研究

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中药新药与临床药理 2023年

作者：赵新月田颖颖刘闯李依林吕英楠于尚玥田时秋裴海鸾左泽平王志斌北京中医药大学中药学院北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂

目的探究桑色素(morin)通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/信号传导与转录活化因子(STAT3)信号轴诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的影响及其机制。方法使用浓度(0、30、60、90、120、150 μg·mL-1)桑色素刺激A549细胞，采用细胞活性及... 详细信息

目的探究桑色素(morin)通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/信号传导与转录活化因子(STAT3)信号轴诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的影响及其机制。方法使用浓度(0、30、60、90、120、150 μg·mL-1)桑色素刺激A549细胞，采用细胞活性及增殖检测(CCK-8)法检细胞活力；经流式细胞术及BeyoClick?EdU-488细胞增殖检测探究桑色素对A549细胞增殖及凋亡的影响；通过吖啶橙染色、自噬抑制剂及透射电镜探究桑色素处理后的细胞自噬水平；利用蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测细胞凋亡和自噬相关蛋白及mTOR/STAT3信号轴蛋白表达水平情况。结果与空白组比较，桑色素组A549细胞抑制率明显上升(P<0.001)，cleaved-PARP蛋白表达上调(P<0.001)，p-P38/P38MAPK蛋白表达上调(P<0.001)；LC3-Ⅱ、Atg16L1-Ⅱ蛋白表达上调(P<0.05，P<0.001)；p-mTOR/mTOR、p-STAT3/STAT3蛋白水平下调(P<0.01)。结论桑色素可促进A549细胞凋亡，诱导A549自噬，其作用机制可能与mTOR/STAT3通路有关。

关键词：桑色素非小细胞肺癌增殖凋亡自噬 mTOR/STAT3信号轴

桑色素通过Akt/mTOR/STAT3通路诱导肝癌细胞自噬和凋亡

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中国中药杂志 2023年第16期48卷 4475-4482页

作者：赵新月田颖颖刘闯李依林吕英楠于尚玥田时秋裴海鸾左泽平王志斌北京中医药大学中药学院北京102488 北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂北京100079

研究桑色素(morin)通过蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/信号传导与转录活化因子(STAT3)通路诱导肝癌细胞自噬和凋亡的影响及其机制。分别用0、50、100、125、200、250μmol·L-1桑色素刺激人肝癌SK-HEP-1细胞,通过细胞活... 详细信息

研究桑色素(morin)通过蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/信号传导与转录活化因子(STAT3)通路诱导肝癌细胞自噬和凋亡的影响及其机制。分别用0、50、100、125、200、250μmol·L-1桑色素刺激人肝癌SK-HEP-1细胞,通过细胞活性及增殖检测(CCK-8)法,检测桑色素对SK-HEP-1细胞活力的影响;使用浓度0、125、250μmol·L-1桑色素处理SK-HEP-1细胞,通过克隆形成实验、流式细胞术及BeyoClickTMEdU-488检测探究桑色素对SK-HEP-1细胞增殖及凋亡的影响;通过透射电镜、联用自噬抑制剂探究桑色素处理后的细胞自噬水平的变化;运用蛋白免疫印迹法(Western blot),验证桑色素对Akt/mTOR/STAT3通路蛋白表达水平的影响情况。与对照组比较,桑色素组SK-HEP-1细胞存活率明显降低,呈时间-浓度依赖性;凋亡细胞数目增多且凋亡标志物PARP表达水平上升,凋亡调控组蛋白H2AX的磷酸化表达水平上调;桑色素组阳性细胞数及克隆形成集落数明显减少;自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Atg5、Atg7表达呈上升趋势;Akt、mTOR、STAT3的磷酸化水平下降。该研究揭示桑色素可促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,并诱导自噬,其作用机制可能与Akt/mTOR/STAT3通路有关。

关键词：桑色素肝细胞癌增殖凋亡自噬 Akt/mTOR/STAT3通路

青藤碱对人肝癌HepG2和SK-HEP-1细胞的抑制作用及分子机制研究

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中国中药杂志 2023年第17期48卷 4702-4710页

作者：田颖颖马贝贝赵新月刘闯李依林于尚玥田时秋裴海鸾吕英楠左泽平王志斌北京中医药大学中药学院北京100029 北京同仁堂股份有限公司科学研究所北京100079

研究青藤碱(sinomenine)对人肝癌HepG2细胞和SK-HEP-1细胞的增殖、凋亡、转移以及与抑制剂联用的影响及分子机制研究。通过细胞增殖与活性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验、克隆形成实验、BeyoClick^(TM)EdU-488染色法探究青藤碱... 详细信息

研究青藤碱(sinomenine)对人肝癌HepG2细胞和SK-HEP-1细胞的增殖、凋亡、转移以及与抑制剂联用的影响及分子机制研究。通过细胞增殖与活性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验、克隆形成实验、BeyoClick^(TM)EdU-488染色法探究青藤碱对人肝癌HepG2和SK-HEP-1细胞生长能力的影响。利用免疫荧光实验检测青藤碱对DNA损伤的影响,采用Hoechst 33258染色法、CellEvent^(TM)半胱天冬酶-3/7Green ReadyProbes^(TM)试剂法明确青藤碱对人肝癌细胞凋亡的影响。通过细胞侵袭实验和3D肿瘤细胞球体侵袭实验研究青藤碱对人肝癌细胞体外侵袭能力的影响。借助Western blot检测青藤碱对人肝癌HepG2和SK-HEP-1细胞中蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路相关蛋白表达水平的调控作用。运用分子对接的方法评判青藤碱与靶点含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)和STAT3亲和力的强弱,并结合CCK-8法检测青藤碱与STAT3抑制剂JSI-124联用后细胞活力的变化。结果表明,青藤碱能够明显降低人肝癌细胞的细胞活力,且呈现浓度和时间依赖性;能够显著抑制人肝癌细胞的克隆形成能力,还能削弱人肝癌细胞的体外侵袭能力。此外,青藤碱能够上调人肝癌细胞中凋亡标志物多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的剪切水平并下调p-Akt、p-mTOR和p-STAT3的蛋白水平。分子对接结果显示,青藤碱对靶点caspase-3和STAT3具有良好的亲和力,且STAT3被抑制后,青藤碱对肝癌细胞的敏感性被削弱。因此,青藤碱能够抑制人肝癌细胞的增殖和侵袭并诱导其发生凋亡,其作用机制可能与激活caspase-3信号和抑制Akt/mTOR/STAT3通路有关。该研究能够为青藤碱的深入研究和临床应用提供新的参考,对进一步推动青藤碱的科学开发利用具有重要意义。

关键词：青藤碱肝细胞肝癌分子对接凋亡 caspase-3 侵袭 Akt/mTOR/STAT3信号通路

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两种大鼠高脂血症模型的特点及性别差异研究

中国比较医学杂志 2023年第3期33卷 37-44页

作者：田时秋左泽平李依林田颖颖裴海鸾于尚玥赵新月刘闯王志斌北京中医药大学中药学院北京102488 北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂北京100071

目的考察两种大鼠高脂血症模型体重、摄食量、血脂变化趋势及肝组织病理变化,比较不同性别高脂血症模型的差异。方法大鼠采用两种高脂饲料喂养7~8周,建立混合型高脂血症模型和高胆固醇血症模型。造模期间记录动物体重、摄食量和一般状态... 详细信息

目的考察两种大鼠高脂血症模型体重、摄食量、血脂变化趋势及肝组织病理变化,比较不同性别高脂血症模型的差异。方法大鼠采用两种高脂饲料喂养7~8周,建立混合型高脂血症模型和高胆固醇血症模型。造模期间记录动物体重、摄食量和一般状态,分别于第0、1~2、7~8周检测分析血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)含量变化;造模后取动物的肝进行组织病理学观察。结果两模型高脂饲料喂养组比较,混合型高脂血症体重显著高于空白对照组,摄食量显著降低,总食物利用度升高,而高胆固醇血症摄食量升高,体重及总食物利用率与空白对照组无显著差异;造模结束时混合型高脂血症TC、TG水平升高,高胆固醇血症TC升高,TG不变,混合型高脂血症肝脂肪变性程度更强。同模型下雄性总体血脂变化、肝脂肪变性程度均重于雌性。结论两模型高脂饲料喂养组在体重、摄食量、血脂水平及肝病理观察均有差异,同模型雄性程度强于雌性。

关键词：高脂血症性别差异高脂饮食动物模型

基于mTOR/STAT3信号轴探讨桑色素诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制

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中药新药与临床药理 2024年第3期35卷 317-324页

目的基于mTOR/STAT3信号轴探讨桑色素诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制。方法将A549细胞分为空白组及30、60、90、120、150μg·m L^(-1)桑色素组,培养24、48、72 h后采用CCK-8法检测细胞增殖活性,计算细胞抑制率。将A549细胞分为空... 详细信息

目的基于mTOR/STAT3信号轴探讨桑色素诱导非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制。方法将A549细胞分为空白组及30、60、90、120、150μg·m L^(-1)桑色素组,培养24、48、72 h后采用CCK-8法检测细胞增殖活性,计算细胞抑制率。将A549细胞分为空白组及30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组,培养细胞14 d后通过克隆形成实验检测细胞增殖情况;培养细胞24 h后,采用Beyo ClickTMEd U-488检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;吖啶橙染色检测细胞自噬情况;透射电镜观察细胞自噬体形成情况;Western Blot法检测细胞中凋亡、自噬及m TOR/STAT3信号轴相关蛋白的表达水平。将A549细胞分为空白组、空白+氯喹(10μg·m L^(-1))组、桑色素(30、150μg·m L^(-1))组、桑色素(30、150μg·m L^(-1))+氯喹(10μg·m L^(-1))组,干预48 h后采用CCK-8法检测细胞活性,计算细胞存活率。结果与空白组比较,干预24 h后60、90、120、150μg·m L^(-1)桑色素组的A549细胞抑制率显著升高(P<0.05,P<0.001);干预48、72 h后桑色素30、60、90、120、150μg·m L^(-1)组的A549细胞抑制率显著升高(P<0.001);30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组的A549细胞集落数及绿色荧光的增殖阳性细胞数均显著减少(P<0.01,P<0.001),细胞凋亡率均显著升高(P<0.01,P<0.001),cleaved-PARP蛋白表达水平显著升高(P<0.001);90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的p-P38/P38MAPK蛋白表达水平显著升高(P<0.01,P<0.001);30、90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞中出现不同程度的橙黄色荧光,以90、150μg·m L^(-1)桑色素组的橙黄色荧光显著;150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞胞浆中分别出现了自噬体和自噬溶酶体;150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的LC3-Ⅱ蛋白表达明显上调(P<0.05),90、150μg·m L^(-1)桑色素组A549细胞的Atg16L1-Ⅱ蛋白表达显著上调(P<0.001),p-m TOR/m TOR及p-STAT3/STAT3蛋白表达显著下调(P<0.001)。与桑色素(150μg·m L^(-1))组比较,桑色素(150μg·m L^(-1))+氯喹(10μg·m L^(-1))组的A549细胞存活率明显升高(P<0.05)。结论桑色素能够抑制肺癌A549细胞的增殖,促进其凋亡,并诱导自噬,其作用机制可能与m TOR/STAT3信号轴有关。

关键词：桑色素非小细胞肺癌 A549细胞增殖凋亡自噬 mTOR/STAT3信号轴

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雄黄抗肿瘤作用及分子机制研究进展

中国中医药信息杂志 2023年第4期30卷 169-175页

作者：赵新月田颖颖左泽平刘闯于尚玥李依林田时秋裴海鸾王志斌北京中医药大学中药学院北京100029 北京同仁堂科技发展股份有限公司北京100079

雄黄为硫化物类矿物雄黄族雄黄,在现代临床研究中应用颇为广泛,对白血病、肺癌、宫颈癌、胃癌等多种癌症表现出较强的抗肿瘤特性。本文整理近年雄黄及其纳米制剂、微生物转化液等抗肿瘤相关文献,重点综述雄黄诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿... 详细信息

雄黄为硫化物类矿物雄黄族雄黄,在现代临床研究中应用颇为广泛,对白血病、肺癌、宫颈癌、胃癌等多种癌症表现出较强的抗肿瘤特性。本文整理近年雄黄及其纳米制剂、微生物转化液等抗肿瘤相关文献,重点综述雄黄诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤干细胞分化和血管生成,以及协同其他药物抗肿瘤的作用及分子机制,以期为雄黄的深入研究及合理开发利用提供依据和理论参考。

关键词：雄黄四硫化四砷抗肿瘤凋亡分子机制综述

Hydrothermal synthesis of mixed rare earth-alkali metal or ammonium fluorides

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Journal of Rare Earths 2010年第5期28卷 676-679页

作者：由芳田黄世华时秋峰 Key Laboratory of Luminescence and Optical Information Ministry of Education Institute of Optoelectronic Technology Beijing Jiaotong University

The recent results on hydrothermal synthesis of mixed rare earth-alkali or ammonium fluorides were presented. The initial ratios of the starting materials, pH value and reaction temperature were the critical factors for obtaining the single-phase product. Four main types of complex rare earth fluorides, AREF4, A2REF5, ARE2F7 and ARE3F10 (A=Na+, K+, Rb+, NH4+), appeared in the primary hydrothermal reactions. The correlation between cation sizes and the formation of mixed rare earth fluorides under mild hydro...

关键词： hydrothermal synthesis rare earth fluorides alkali metals ammonium cation size

开心散对双侧海马CA1区注射Aβ致AD大鼠的治疗作用及机制研究

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中国比较医学杂志 2022年

作者：裴海鸾马贝贝王婷婷李瑞吉刘金辉于尚玥娄天宇左泽平田时秋李依林王晨晓田颖颖田骄赵新月刘闯郭玉东王晶王志斌北京中医药大学中药学院北京市药品检验研究院北京中研同仁堂医药研发有限公司

目的考察开心散对双侧海马CA1区注射Aβ致AD大鼠的治疗效果，初步明晰其作用机制。方法以“β-淀粉样蛋白毒性学说”为依据，使用脑立体定位仪在SD大鼠双侧海马CA1区注射Aβ寡聚肽段，从而复制AD大鼠模型。将痴呆大鼠随机分为模型组、...

目的考察开心散对双侧海马CA1区注射Aβ致AD大鼠的治疗效果，初步明晰其作用机制。方法以“β-淀粉样蛋白毒性学说”为依据，使用脑立体定位仪在SD大鼠双侧海马CA1区注射Aβ寡聚肽段，从而复制AD大鼠模型。将痴呆大鼠随机分为模型组、石杉碱甲组、开心散低剂量组、中剂量组与高剂量组，每组10只。另取10只大鼠颅内注射等量的生理盐水作为假手术组，正常大鼠10只作为空白对照组。连续灌胃给药30d。通过Morris水迷宫行为学测试观测大鼠学习记忆成绩的变化；HE染色及Nissl染色观察脑组织病理形态；ELISA法检测脑组织中胆碱能神经递质(ACh、AChE、ChAT)、炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)及β-淀粉样蛋白(APP、Aβ、Aβ)的含量；IHC法解析皮层、海马组织中tau蛋白及GSK-3β的表达水平；Westernblot法察看脑组织中BAX与BCL-2的表达程度。结果与模型组相比，开心散干预组大鼠逃避潜伏期明显缩短，穿越平台次数增多，在目标象限的停留时间及游泳路程所占百分比均有增加(P0.05)。结论开心散对AD损伤大鼠的痴呆症状与脑组织损伤有较好的治疗效果，其作用机制涉及到胆碱能系统的修复、炎症因子释放的抑制、β-淀粉样蛋白的清除及tau蛋白磷酸化水平的调控。

关键词：

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高脂血症发病机制及药物治疗

生命的化学 2022年第12期42卷 2237-2247页

作者：田时秋李依林裴海鸾田颖颖左泽平赵新月刘闯王志斌北京中医药大学中药学院北京102488 北京同仁堂股份有限公司科学研究所北京100071

高脂血症是一种脂质代谢异常引起的慢性疾病,与心血管疾病的发生紧密相关。随着经济快速增长、人们生活水平的提高,高脂血症发病率逐年增加。本文对高脂血症的相关研究进行总结,阐述了高脂血症的发病情况,遗传因素、营养因素、全身性疾... 详细信息

高脂血症是一种脂质代谢异常引起的慢性疾病,与心血管疾病的发生紧密相关。随着经济快速增长、人们生活水平的提高,高脂血症发病率逐年增加。本文对高脂血症的相关研究进行总结,阐述了高脂血症的发病情况,遗传因素、营养因素、全身性疾病及肠道菌群对高脂血症的影响机制,西药的治疗特点、机制以及中医药对高脂血症的干预治疗作用,以期为相关研究提供参考。

关键词：高脂血症发病机制治疗手段