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人卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞中程序性坏死的作用及调控机制研究

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人卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞中程序性坏死的作用及调控机制研究

作者：田文竹北华大学

学位级别：硕士

目的:本课题选用柳氮磺胺吡啶（SAS）作为氧化应激诱导剂,复制氧化应激模型,以人卵巢上皮性癌顺铂敏感细胞（SKOV3、A2780）与耐药细胞（SKOV3/DDP、OVCAR-3）为研究对象,研究卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞（SKOV3/DDP、OVCAR-3）中程序性... 详细信息

目的:本课题选用柳氮磺胺吡啶（SAS）作为氧化应激诱导剂,复制氧化应激模型,以人卵巢上皮性癌顺铂敏感细胞（SKOV3、A2780）与耐药细胞（SKOV3/DDP、OVCAR-3）为研究对象,研究卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞（SKOV3/DDP、OVCAR-3）中程序性坏死途径的作用,以及多功能蛋白p62/SQSTM1（简称p62蛋白）在此途径中的可能调控机制,揭示人卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞中程序性坏死途径的作用及其调控机制,为靶向程序性坏死途径、克服肿瘤耐药提供新思路。方法:（1）利用MTT法检测SAS对人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2780、OVCAR-3细胞生存率的影响。（2）利用MTT法检测SAS和程序性坏死抑制剂Necrostatin-1（Nec-1）联合作用对人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2780、OVCAR-3细胞生存率的影响。（3）RTCA法检测Nec-1与SAS联合作用对人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP细胞生存率的影响。（4）利用Western blotting方法检测SAS对人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2780、OVCAR-3细胞程序性坏死相关蛋白RIP1、RIP3、MLKL及磷酸化蛋白表达水平的变化。（5）免疫共沉淀法检测RIP1、RIP3复合体表达情况。（6）利用Western blotting方法检测SAS对人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2780、OVCAR-3细胞p62蛋白表达的影响。（7）利用Western blotting方法检测人卵巢上皮性癌SKOV3细胞和人卵巢上皮性癌A2780细胞中过表达zz结构域突变的p62蛋白（zz-p62）对程序性坏死相关蛋白的影响。结果:（1）MTT结果显示,由SAS诱导的人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2780、OVCAR-3细胞死亡过程中,与对照组比较,不同浓度SAS作用于人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2780、OVCAR-3细胞,随着SAS浓度的增加细胞生存率均逐渐降低,并呈现剂量依赖性。SAS 0.5 mM作用人卵巢上皮性癌SKOV3细胞,SAS 2 mM作用人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP细胞,细胞生存率分别为（81.9±1.4）%及（80.3±1.5）%,SAS 0.5 mM作用人卵巢上皮性癌A2780细胞,SAS 2 mM作用人卵巢上皮性癌OVCAR-3细胞,细胞生存率分别为（78.0±1.9）%及（77±5.6）%,因此选取SAS 0.5 mM作用人卵巢上皮性癌SKOV3细胞,SAS 2 mM作用人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP细胞,SAS 0.5 mM作用人卵巢上皮性癌A2780细胞,SAS 2 mM作用人卵巢上皮性癌OVCAR-3细胞做后续实验。与人卵巢上皮性癌SKOV3、A2780细胞比较,相同浓度的SAS作用人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP、OVCAR-3细胞,人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP、OVCAR-3细胞生存率降低程度不明显。（2）RTCA生存率曲线表示细胞数,曲线的斜率表示细胞生长速率。首先观察RTCA生存率曲线高低情况,与SAS组比较,Nec-1 10μM与SAS联合作用组人卵巢上皮性癌SKOV3细胞生存率曲线低,而人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP细胞生存率曲线高。继续观察RTCA实时曲线的斜率,结果显示,在SKOV3细胞与对照组control比较,SAS组曲线斜率降低;与SAS组比较,Nec-1 10μM与SAS联合作用组,曲线增长斜率没有差异;在人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP细胞中,与对照组control比较,SAS组曲线斜率降低且呈负性增长,与SAS组比较,Nec-1 10μM与SAS联合作用组曲线斜率增高,有统计学意义。（3）Western blotting结果显示,SAS作用的人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP细胞程序性坏死相关蛋白磷酸化RIP1、RIP3、MLKL表达均在SAS作用12h时增加;在SAS作用人卵巢上皮性癌OVCAR-3细胞12h时,程序性坏死相关蛋白磷酸化RIP1、RIP3表达增加,而程序性坏死相关蛋白磷酸化MLKL表达没有变化;SAS作用的人卵巢上皮性癌SKOV3、A2780细胞程序性坏死相关蛋白磷酸化RIP1、RIP3、MLKL均不表达。（4）免疫共沉淀结果显示,SAS作用的人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP细胞中可见RIP1与RIP3复合体表达。（5）Western blotting结果显示,SAS作用人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP细胞12h时p62蛋白表达量增多;在SAS作用人卵巢上皮性癌OVCAR-3细胞6h时p62蛋白表达量增多;SAS作用的人卵巢上皮性癌SKOV3、A2780

关键词：程序性坏死 SKOV3/DDP细胞 OVCAR-3细胞 p62/SQSTM1

血清肿瘤标记物检测对中医辅助治疗中晚期肺癌疗效评估的价值

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中医临床研究 2018年第35期10卷 36-38页

作者：田文竹徐风亮徐东雪日照市岚山区岚山头街道社区卫生服务中心山东日照276800 日照市人民医院山东日照276826 日照市岚山区人民医院山东日照276800

目的:探讨血清肿瘤标记物鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag)、糖类抗原(CA50)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)联合动态检测对中医辅助治疗中晚期肺癌疗效评估的临床价值。方法:选取80例中晚期肺癌患者为研究对象,随机分为研究组和对照组,对照组... 详细信息

目的:探讨血清肿瘤标记物鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag)、糖类抗原(CA50)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)联合动态检测对中医辅助治疗中晚期肺癌疗效评估的临床价值。方法:选取80例中晚期肺癌患者为研究对象,随机分为研究组和对照组,对照组采用手术、放化疗治疗,研究组在上述治疗基础上辅助中医药综合治疗,比较两组患者中医证候改善情况;比对治疗前后两组患者血清SCC-Ag、CA50、NSE水平变化,评估中医药辅助治疗中晚期肺癌的临床疗效。结果:治疗后研究组患者中医证候改善有效率明显高于对照组(P <0.05);两组治疗后血清SCC-Ag、CA50、NSE水平与治疗前比较明显降低(P <0.01),且治疗后研究组血清SCC-Ag、CA50、NSE水平与对照组比较降低更明显(P <0.05)。结论:中晚期肺癌患者在西医治疗基础上辅助中医药综合治疗临床疗效确切,可显著改善患者临床症状。血清SCC-Ag、CA50、NSE水平变化是评估肺癌疗效的有效客观指标。

关键词：中晚期肺癌中医辅助治疗血清标记物疗效

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涎腺多形性腺瘤细胞学诊断40例分析

工企医刊 1999年第6期12卷 28-29页

作者：徐风亮孔庆玲吴鹏田文竹吴爱民山东日照市人民医院 276800 山东岚山人民医院山东兖州矿务局总医院

多形性腺癌是涎腺肿瘤中最常见疾病之一,本组资料为有完整记录和组织学确诊40例,其中部分有细胞学诊断误诊的教训。报告如下。1 一般资料本组40例多形性腺癌,全部有细胞学和病理组织学2种诊断。年龄18岁～45岁,女性18例,男性22例。腮腺... 详细信息

多形性腺癌是涎腺肿瘤中最常见疾病之一,本组资料为有完整记录和组织学确诊40例,其中部分有细胞学诊断误诊的教训。报告如下。1 一般资料本组40例多形性腺癌,全部有细胞学和病理组织学2种诊断。年龄18岁～45岁,女性18例,男性22例。腮腺区20例,颌下腺区10例,上鄂处5例,舌下腺区4例,颧弓处1例。无疼感。发生于硬颚肿块多不活动,韧感特别明显.

关键词：涎腺多形性腺瘤细胞学诊断诊断

不同血型原发性IgA肾病患者的临床病理特征

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中国医师杂志 2023年第4期25卷 516-520,527页

作者：刘顺瑶鄂静李晶李静李博马丹娜田文竹郑亚莉宁夏医科大学第三临床医学院银川750000 宁夏回族自治区人民医院肾脏内科银川750000 宁夏回族自治区人民医院病理科银川750000

目的探讨不同血型原发性IgA肾病(IgAN)患者的临床资料和病理改变的差异。方法收集2016年5月至2021年5月在宁夏回族自治区人民医院经肾活检确诊为原发性IgAN患者的临床病理资料,按血型分为A、O、B、AB组,分析肾活检时四组患者的临床资料... 详细信息

目的探讨不同血型原发性IgA肾病(IgAN)患者的临床资料和病理改变的差异。方法收集2016年5月至2021年5月在宁夏回族自治区人民医院经肾活检确诊为原发性IgAN患者的临床病理资料,按血型分为A、O、B、AB组,分析肾活检时四组患者的临床资料及病理改变。结果共纳入原发性IgAN患者258例,包括A型87例、O型74例、B型72例、AB型25例,男女比1.34∶1,中位年龄36(29,47)岁。四组患者的年龄、性别、血压、血红蛋白、肾功能等临床资料差异无统计学意义(均P>0.05),A、B型组患者中性粒细胞相关载脂蛋白(NGAL)高于其他血型患者(均P0.05)。按性别进行亚组分析,各血型组男性患者血红蛋白、血尿酸、血肌酐高于女性患者(均P0.05),A、O型组女性镜下血尿较男性重;病理表现上A型血女性M、E、S、C病变较男性重,B型血男性S、T较女性重。四组男性、女性之间一般基线资料、炎症、肾脏指标差异无统计学意义(均P>0.05),病理上B型血男性M病变较其他血型患者重,B型血女性患者S、T病变较其他血型患者轻。结论A型血女性临床和病理表现较重,B型血女性病理表现较轻,但B型血男性病理较重。

关键词：肾小球肾炎,IGA ABO血型系统性别

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浅谈实验室的科学管理

中国国境卫生检疫杂志 1999年第1期22卷 31-32页

作者：许崇慈杨洪娟黄美凤隋晓燕田文竹岚山卫生检疫局日照市岚山医院

本文就实验室的质量控制、技术管理以及实验人员的培养和使用等管理问题进行了探讨。提示:质量控制是实验室管理的主要内容,技术管理是质量控制的基础,高素质的实验人员是提高检验质量的保证。

关键词：实验室科学管理质量控制技术管理仪器管理

别嘌呤醇治疗慢性肾脏病疗效和安全性的meta分析

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中国医师杂志 2022年第4期24卷 505-511页

作者：刘顺瑶鄂静罗红艳保莉田文竹包喜曹释露郑亚莉宁夏医科大学银川750000 宁夏回族自治区人民医院肾脏内科银川750000

目的系统评价别嘌呤醇治疗慢性肾脏病的疗效和安全性。方法计算机检索Embase、Pubmed和The Cochrane Library数据库,查找别嘌呤醇治疗慢性肾脏病患者的随机对照试验。根据Cochrane系统评价方法,两位评价员独立筛选文献、提取数据,采用Re... 详细信息

目的系统评价别嘌呤醇治疗慢性肾脏病的疗效和安全性。方法计算机检索Embase、Pubmed和The Cochrane Library数据库,查找别嘌呤醇治疗慢性肾脏病患者的随机对照试验。根据Cochrane系统评价方法,两位评价员独立筛选文献、提取数据,采用Revman 5.3软件进行结果分析。结果最终纳入10篇文献,共940例患者(试验组472例,对照组468例)。Meta分析结果显示,别嘌呤醇治疗可以降低慢性肾脏病患者的血尿酸(MD=-2.40,95%CI:-2.74--2.05,P<0.01)、24 h尿蛋白(MD=-0.61,95%CI:-1.17--0.06,P=0.03),升高肾小球滤过率估算值(eGFR)(MD=2.51,95%CI:1.86-3.17,P<0.01)。试验组和对照组发生不良事件的差异无统计学意义(OR=1.40,95%CI:0.61-3.19,P=0.42),但别嘌呤醇治疗可以降低心血管事件的发生风险(OR=0.58,95%CI:0.38-0.89,P=0.01)。结论别嘌呤醇治疗慢性肾脏病会降低尿蛋白、改善eGFR,并且降低心血管事件的发生风险。

关键词：肾功能不全,慢性别嘌呤醇 Meta分析

血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白与肾性贫血的关系

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宁夏医学杂志 2023年第4期45卷 297-302页

作者：田文竹李博刘顺瑶曹释露包喜郑亚莉宁夏医科大学研究生院宁夏银川750002 宁夏回族自治人民医院肾脏内科宁夏银川750002

目的研究血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)与肾性贫血的关系。方法筛选124例慢性肾脏病(CKD)患者,根据是否伴有贫血分为贫血组(n=84)和非贫血组(n=40)。进一步亚组分组将贫血患者根据是否进行维持性血液透析分为透析组(n=72... 详细信息

目的研究血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)与肾性贫血的关系。方法筛选124例慢性肾脏病(CKD)患者,根据是否伴有贫血分为贫血组(n=84)和非贫血组(n=40)。进一步亚组分组将贫血患者根据是否进行维持性血液透析分为透析组(n=72)和非透析组(n=12)。观察贫血组与非贫血组,透析组与非透析组间的血红蛋白、血清肌酐、血尿素氮、β2-微球蛋白、维生素B12、叶酸、血清铁蛋白、血清铁、总铁结合力、转铁蛋白饱和度、超敏C反应蛋白、NGAL等的水平。进一步进行NGAL与各组各指标的相关性分析。结果贫血组患者转铁蛋白饱和度低于非贫血组,血清NGAL、血肌酐、血尿素氮水平高于非贫血患者(P<0.05)。血清NGAL与血红蛋白(r=-0.30)、转铁蛋白饱和度(r=-0.30)、维生素B12(r=-0.28)呈负相关,与血肌酐(r=0.56)、血尿素氮(r=0.26)、总铁结合力(r=0.28)、血清铁蛋白(r=0.27)呈正相关。维持性血液透析的贫血患者血清NGAL与血红蛋白(r=-0.30)、转铁蛋白饱和度(r=-0.31)、维生素B12(r=-0.32)呈负相关,与血肌酐(r=0.35)、总铁结合力(r=0.30)呈正相关。结论血清NGAL是慢性肾脏病患者铁代谢及炎症反应的影响因素,在铁代谢尤其是在铁的转运过程中有负面影响。在维持性血液透析的贫血患者中,NGAL是维生素B12吸收代谢过程中的危险因素。

关键词：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白慢性肾脏病血液透析肾性贫血铁代谢

周期蛋白依赖性激酶-5抑制肽通过上调神经生长因子缓解高糖环境对人肾足细胞凋亡的影响

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中国临床药理学杂志 2023年第12期39卷 1728-1732页

作者：张凤娟李晶王慧刘顺瑶包喜张秀梅田文竹曹释露罗红艳曹丽郑亚莉宁夏医科大学第三临床医学院治区银川750004 宁夏医科大学附属自治区人民医院功能科宁夏回族自治区银川750002 宁夏医科大学附属自治区人民医院病理科宁夏回族自治区银川750002 宁夏医科大学附属自治区人民医院肾内科宁夏回族自治区银川750002

目的探究截短型周期蛋白依赖性激酶5(Cdk5)抑制肽(TFP5)对高糖(HG)条件下人肾足细胞损伤和凋亡的影响,及其作用机制。方法将人肾足细胞分为低糖组(LG,1.0 g·L^(-1))、HG组(4.5 g·L^(-1))、HG+Scramble组(4.5 g·L^(-1)+100.0 nmol·L^... 详细信息

目的探究截短型周期蛋白依赖性激酶5(Cdk5)抑制肽(TFP5)对高糖(HG)条件下人肾足细胞损伤和凋亡的影响,及其作用机制。方法将人肾足细胞分为低糖组(LG,1.0 g·L^(-1))、HG组(4.5 g·L^(-1))、HG+Scramble组(4.5 g·L^(-1)+100.0 nmol·L^(-1))、HG+TFP5组(4.5 g·L^(-1)+100.0 nmol·L^(-1))和HG+联合组(4.5 g·L^(-1)+50.0 ng·mL^(-1)K252a+100.0 nmol·L^(-1)TFP5)。用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞凋亡基因和神经生长因子(NGF)及Cdk5的表达水平,用荧光红染料法和DCFH探针法分别检测H_(2)O_(2)和活性氧(ROS)的水平,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果LG组和HG组的B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA分别为(0.04±0.02)×10^(-2)和(0.09±0.01)×10^(-3),Cdk5 mRNA分别为(0.04±0.01)×10^(-1)和(0.07±0.01)×10^(-1),细胞凋亡比率分别为(1.61±0.25)%和(3.77±0.17)%,H_(2)O_(2)分别为0.56±0.27和2.94±1.15,ROS分别为0.51±0.28和1.04±0.07,Cdk5酶活力分别为0.14±0.06和2.11±0.02,差异均有统计学意义(均P<0.01)。LG组、HG+Scramble组和HG+TFP5组的H_(2)O_(2)分别为1.13±0.20、2.49±0.38和1.08±0.18,ROS分别为0.87±0.18、2.61±0.71和0.83±0.22,Bcl-2 mRNA分别为(0.07±0.02)×10^(-2)、(0.01±0.03)×10^(-2)和(0.04±0.06)×10^(-2),NGF mRNA分别为(0.15±0.53)×10^(-1)、0.04±0.06×10^(-1)和0.22±0.08×10^(-2)。HG+Scramble组的上述指标和HG+TFP5组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。HG+Scramble组、HG+TFP5组和联合组的NGF mRNA分别为0.04±0.01×10^(-1)、0.05±0.01×10^(-1)和0.01±0.03×10^(-1),Bcl-2 mRNA分别为(0.05±0.03)×10^(-2)、(0.01±0.00)×10^(-1)和(0.03±0.02)×10^(-2),NGF蛋白相对表达水平分别为1.14±0.07、1.69±0.44和0.48±0.06,HG+TFP5组的上述指标和联合组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论TFP5可通过Cdk5-NGF调控轴显著降低HG培养条件下人肾足细胞内的氧化应激压力和细胞凋亡。

关键词：截短型周期蛋白依赖性激酶5抑制肽周期性依赖性蛋白激酶神经生长因子氧化应激压力

老年2型糖尿病患者空腹血糖波动与尿白蛋白/肌酐比值之间的相关性分析

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宁夏医学杂志 2022年第3期44卷 197-199,F0002页

作者：卢海霞张凤娟闫学慧包喜田文竹郑亚莉宁夏回族自治区人民医院宁夏银川750002 宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004 西北民族大学第一临床医学院甘肃兰州730000

目的观察老年患者不同年龄段空腹血糖波动与尿白蛋白/肌酐比值之间的关系。方法收集103例年龄≥60岁糖尿病患者,男女人数分别为47和56,年龄60~83岁。依据年龄分为3组,即1组为60~69岁、2组为70~79岁、3组为年龄≥80岁。空腹血糖通过血糖... 详细信息

目的观察老年患者不同年龄段空腹血糖波动与尿白蛋白/肌酐比值之间的关系。方法收集103例年龄≥60岁糖尿病患者,男女人数分别为47和56,年龄60~83岁。依据年龄分为3组,即1组为60~69岁、2组为70~79岁、3组为年龄≥80岁。空腹血糖通过血糖试纸葡萄糖脱氢酶法测定;尿白蛋白/肌酐比值通过干式免疫标记散射定量法检测。结果老年糖尿病患者>70岁但70岁但<80岁的患者较其他组患者尿白蛋白/肌酐比值低(P<0.05)。老年糖尿病患者不同年龄段尿白蛋白/肌酐比值与空腹血糖之间呈正相关。结论空腹血糖达标率较高的老年糖尿病患者尿白蛋白/肌酐比值更低。老年糖尿病患者空腹血糖水平与尿白蛋白/肌酐比值呈正相关,提示空腹血糖的波动对老年糖尿病患者早期糖尿病肾病的进展有很大的相关性,老年糖尿病患者仍需严格控制空腹血糖。

关键词： 2型糖尿病尿白蛋白/肌酐比值空腹血糖老年糖尿病患者