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朊病毒病实验室检测质量控制特点分析

疾病预防控制通报 2014年第2期29卷 91-93,94页

作者：周伟张瑾陈操高晨石琦田婵张保云韩俊中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的分析朊病毒病重要实验室检测技术的质量控制环节,提高朊病毒病实验室诊断质量水平。方法从朊病毒常见检测方法,如脑组织的PrPSc免疫组化、脑组织的PrPSc的Western blot检测、脑脊液中14-3-3蛋白的Western blot检测以及血液样本中PRN... 详细信息

目的分析朊病毒病重要实验室检测技术的质量控制环节,提高朊病毒病实验室诊断质量水平。方法从朊病毒常见检测方法,如脑组织的PrPSc免疫组化、脑组织的PrPSc的Western blot检测、脑脊液中14-3-3蛋白的Western blot检测以及血液样本中PRNP的基因检测技术等方面分析朊病毒病实验室诊断的质量控制要求。结果实验室检测过程质量控制是朊病毒检测结果准确与否的关键,有效蛋白酶K消化的时间和浓度是脑组织PrPSc的Western blot检测结果的保证,脑组织PrPSc的有效暴露和PrPC的去除是朊病毒病脑组织IHC检测的核心环节,脑脊液的质量是14-3-3Western blot检测的质量控制点,防止核酸污染是血液的PRNP序列测定的质量检测控制的关键。结论通过分析实验室检测的质量控制关键环节和控制措施,可有效加强朊病毒病实验室质量管理,提高朊病毒病实验室检测能力。

关键词：朊病毒实验室质量控制

朊病毒病实验动物脑组织PrP^Sc样本库的建立

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中华实验和临床病毒学杂志 2008年第5期22卷 321-323页

作者：张宝云田婵韩俊高晨石琦姜慧英周伟董小平中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京100052

目的建立朊病毒病实验动物脑组织检测样本库，检测其在特定保存条件下的稳定性，以用于动物和人朊病毒病诊断技术的评估和考核。方法选用30只经颅内注射感染羊瘙痒因子263K的仓鼠和30只正常仓鼠，每只分别制备10％、1％和0．5％3种浓度... 详细信息

目的建立朊病毒病实验动物脑组织检测样本库，检测其在特定保存条件下的稳定性，以用于动物和人朊病毒病诊断技术的评估和考核。方法选用30只经颅内注射感染羊瘙痒因子263K的仓鼠和30只正常仓鼠，每只分别制备10％、1％和0．5％3种浓度的脑组织匀浆，分装冷冻保存。以Western Blot方法确定脑组织匀浆中PrP^Sc的存在情况，并分别在建库半年和3年检测PrP^Sc的稳定性。结果30只感染仓鼠10％脑组织匀浆全部可检出PrP^Sc，1％脑组织匀浆有26份为PrP^Sc阳性，0．5％脑组织匀浆有19份为PrP^Sc阳性。半年及3年后复检，PrP^Sc阳性检出率基本不变。所有正常仓鼠脑匀浆均为PrP^Sc阴性。结论建立了稳定性良好的含有90份PrP^Sc阳性标本和90份PrP^Sc阴性样本的朊病毒病实验动物脑组织榆测样本库。

关键词：朊病毒羊瘙痒病 PrP^Sc蛋白质类

高通量测序技术临床检测规范化应用北京专家共识(第一版通用部分)

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中华医学杂志 2019年第43期99卷 3393-3397页

作者：无王清涛李金明樊高威刘文彬孟雪红田婵王威魏星张瑞张秀艳北京市临床检验中心北京医学会检验医学分会都医科大学临床检验诊断学系北京市医学检验质量控制和改进中心北京市临床检验中心首都医科大学附属北京朝阳医院检验科北京100020 国家卫生健康委临床检验中心北京100730 Illumina中国赛默飞世尔科技(中国)有限公司北京大学第三医院生殖医学中心深圳华大智造科技有限公司北京华诺奥美医学检验实验室有限公司国家卫生健康委临床检验中心南京世和基因生物技术有限公司

一、前言高通量测序(high-throughput sequencing,HTS)即下一代测序(next generation sequencing,NGS),又称为大规模平行测序(massively parallel sequencing,MPS).相较于传统测序技术,高通量测序单碱基检测成本较低、速度较快、一次可检测大量靶基因,因而广泛应用于染色体非整倍体无创产前筛查、肿瘤靶向治疗基因突变检测、遗传性肿瘤检测、遗传病及罕见病检测、病原微生物及宏基因组检测、胚胎植入前遗传学筛查和胚胎植入前遗传学诊断等领域[1].

关键词：染色体非整倍体罕见病高通量测序技术病原微生物下一代测序宏基因组临床检测

人A组和B组鼻病毒3C蛋白表达、纯化及酶切活性验证

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中国生物制品学杂志 2017年第5期30卷 485-487,493页

作者：王莹庞立丽王慧敏袁越田婵新燕段招军内蒙古医科大学基础医学院免疫学实验室内蒙古呼和浩特010110 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 北京大学第三医院北京100191

目的在大肠埃希菌中表达人A组和B组鼻病毒(rhinovirus,RV)3C蛋白,纯化后检测其酶切活性。方法分别将A组鼻病毒RV1B和B组鼻病毒RV6的3C蛋白编码基因克隆至原核表达载体p ET-30a中,构建重组原核表达质粒p ET-30a-1B-3C和p ET-30a-6-3C,转... 详细信息

目的在大肠埃希菌中表达人A组和B组鼻病毒(rhinovirus,RV)3C蛋白,纯化后检测其酶切活性。方法分别将A组鼻病毒RV1B和B组鼻病毒RV6的3C蛋白编码基因克隆至原核表达载体p ET-30a中,构建重组原核表达质粒p ET-30a-1B-3C和p ET-30a-6-3C,转化至*** BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达产物经镍柱纯化。利用具有3C蛋白酶切位点的15VP1-6P蛋白,分析不同温度(4和37℃)下3C蛋白的酶切活性。结果原核表达的目的蛋白为带His标签的可溶性蛋白,RV1B-3C蛋白相对分子质量约25 000,RV6-3C蛋白相对分子质量约23 000,纯度可达约70%。RV1B-3C和RV6-3C蛋白对15VP1-6P蛋白均具有酶切作用,而且在4和37℃均有酶切活性。结论在大肠埃希菌中成功表达了具有酶切活性的A组和B组鼻病毒3C蛋白,为进一步研究鼻病毒的致病机制奠定了基础。

关键词：鼻病毒 3C蛋白表达纯化酶切 RV1B RV6

母体外周血游离DNA检测失败的影响因素及其妊娠结局

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中华围产医学杂志 2020年第9期23卷 585-593页

作者：李佳欣原鹏波王学举田婵常亮宫晓丽任珂魏瑗赵扬玉北京大学第三医院妇产科 100191

目的探讨母体外周血游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)检测失败的影响因素及其妊娠结局。方法回顾性选取2017年4月至2019年4月在北京大学第三医院接受cfDNA检测的5195例孕妇,按照cfDNA首次检测是否得到有效结果分为cfDNA检测成功组(5107例)... 详细信息

目的探讨母体外周血游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)检测失败的影响因素及其妊娠结局。方法回顾性选取2017年4月至2019年4月在北京大学第三医院接受cfDNA检测的5195例孕妇,按照cfDNA首次检测是否得到有效结果分为cfDNA检测成功组(5107例)及cfDNA检测失败组(88例)。采用Mann-Whitney U检验及χ2检验对比cfDNA检测成功与失败孕妇的临床特征,通过多因素logistic回归分析cfDNA检测失败的危险因素及体重指数(body mass index,BMI)对检测成功率的影响,评估重采血检测的可行性及重采血检测失败的影响因素。结果首次检测失败率为1.7%(88/5195),失败者中85例选择重采血检测,74例(87.1%,74/85)获得了有效的cfDNA检测结果,11例(12.9%,11/85)仍无有效结果,cfDNA检测最终失败率为0.2%(11/5195)。多因素回归分析显示孕妇年龄增加(OR=1.086,95%CI:1.023~1.152,P=0.006)、BMI增加(OR=1.083,95%CI:1.021~1.149,P=0.008)及双胎妊娠(OR=3.093,95%CI:1.715~5.577,P<0.001)是cfDNA检测失败的危险因素,而胎儿游离DNA(cell-free fetal DNA,cffDNA)浓度高(OR=0.758,95%CI:0.720~0.761,P<0.001)是检测失败的保护因素。进一步按孕妇采血检测cfDNA时的BMI分组,发现超重组(BMI 25~29.9 kg/m2)和肥胖组(BMI≥30 kg/m2)孕妇发生cfDNA检测失败的风险分别为正常体重组(BMI 18.5~24.9 kg/m2)的3.626倍(OR=3.626,95%CI:2.298~5.724,P<0.001)和4.064倍(OR=4.064,95%CI:1.779~9.284,P=0.001)。重采血检测的成功率随母体BMI的增加而降低,但与2次采血的时间间隔无关(OR=0.840,95%CI:0.699~1.245,P=0.065)。74例重采血检测获得有效结果的孕妇中,检测结果高风险7例,经羊水细胞染色体核型分析证实1例45,X和1例47,XXY。11例重采血检测失败的孕妇中有8例进行了产前诊断,胎儿染色体核型均正常;其余3例未行产前诊断,但均分娩了表型正常的新生儿。cfDNA检测失败组与成功组间妊娠丢失率差异无统计学意义[9.1%(8/88)与2.5%(128/5107),P=0.090]。结论孕妇年龄增加、BMI增加、cffDNA浓度低、双胎妊娠更容易发生cfDNA检测失败。肥胖孕妇可以适当推迟采血孕周以降低cfDNA检测的失败率。对于初次检测失败的孕妇,推荐重采血进行cfDNA检测,重采血检测失败或高风险者进行产前诊断。

关键词：游离核酸母体血清学筛查妊娠结局

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蛋白质错误折叠循环扩增技术及其应用

医学分子生物学杂志 2008年第6期5卷 550-553页

作者：周瑞敏田婵董小平中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京市100052

可传播性海绵状脑病是一类由朊病毒侵袭中枢神经系统而引起的致死性神经退行性疾病。在朊病毒病的病理过程中,细胞正常朊蛋白PrPC(cellular PrP)转化为异常构象的PrPSc(scrapie PrP)是至关重要的。目前,PrPSc转化增殖及致病机理仍不清... 详细信息

可传播性海绵状脑病是一类由朊病毒侵袭中枢神经系统而引起的致死性神经退行性疾病。在朊病毒病的病理过程中,细胞正常朊蛋白PrPC(cellular PrP)转化为异常构象的PrPSc(scrapie PrP)是至关重要的。目前,PrPSc转化增殖及致病机理仍不清楚。蛋白质错误折叠循环扩增(protein misfolding cyclic amplification,PMCA)技术的出现和应用,为研究朊病毒病的发病机制和发展敏感性高、特异性强的检测方法提供了很好的技术平台。

关键词：可传播性海绵状脑病朊病毒蛋白错误折叠循环扩增

中国10例家族型致死性失眠症患者的临床及家族特征分析

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中国病毒病杂志 2012年第3期2卷 197-201页

作者：石琦陈操高晨田婵周伟张宝云韩俊董小平中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的对2006年以来克雅病监测网络监测到的10例家族型致死性失眠症(fatal familial insomnia,FFI)确诊病例进行临床特征分析。方法应用世界卫生组织(WHO)推荐的《克雅病诊断标准》对报告病例进行诊断,对其主要临床症状、家族史及病理特... 详细信息

目的对2006年以来克雅病监测网络监测到的10例家族型致死性失眠症(fatal familial insomnia,FFI)确诊病例进行临床特征分析。方法应用世界卫生组织(WHO)推荐的《克雅病诊断标准》对报告病例进行诊断,对其主要临床症状、家族史及病理特征进行分析。结果 FFI主要临床症状为失眠、自主神经功能异常及肌阵挛。自2006年克雅病监测网络开始监测,迄今已确诊10例家族型致死性失眠症患者。患者平均发病年龄38岁(19～55岁),首发症状多种多样,包括睡眠节律的改变、视觉改变、头晕以及厌食。睡眠节律的改变出现在所有的病例中并且持续整个病程。患者也出现交感神经兴奋、记忆力丧失、运动障碍、肌阵挛及高血压症状。平均病程9.5个月。脑电图及磁共振成像(MRI)没有显示特殊的异常,脑脊液14-3-3蛋白在8个检测病例中有5例阳性。8例病例出现与疾病相关的家族史。病理检测发现丘脑部位出现明显的神经元损伤。结论中国的FFI病例与高加索人具有相似的临床特征,与其他遗传型克雅病比较,D178N突变的FFI病例在中国具有相对较高的出现频率。

关键词：家族型致死性失眠症 D178N PRNP基因克雅病

tau蛋白异常翻译后修饰在阿尔茨海默病中的作用

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医学分子生物学杂志 2009年第1期6卷 56-59页

作者：陈操田婵赵玉军董小平沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳市110161 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京市100052

在阿尔茨海默病（A1zheimer’s disease，AD）中微管相关蛋白tau能够产生许多异常翻译后修饰并聚集形成配对螺旋丝（paired helical filament，PHF）。这些tau的修饰包括过磷酸化、异常糖基化、截断等，其中，过磷酸化和异常糖基化是阿... 详细信息

在阿尔茨海默病（A1zheimer’s disease，AD）中微管相关蛋白tau能够产生许多异常翻译后修饰并聚集形成配对螺旋丝（paired helical filament，PHF）。这些tau的修饰包括过磷酸化、异常糖基化、截断等，其中，过磷酸化和异常糖基化是阿尔茨海默氏病等神经退行性疾病神经元纤维化的主要分子发病机制。

关键词：微管相关蛋白tau 微管过磷酸化阿尔茨海默氏病

噻托溴铵替代ICS/LABA治疗极重度频繁发作COPD疗效的回顾性分析

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中华肺部疾病杂志（电子版） 2016年第5期9卷 528-532页

作者：陈丽珺王倩赵明栋田婵婵宜昌市第二人民医院呼吸内科宜昌443000

目的探讨噻托溴铵策略性替代ICS/LABA治疗极重度慢性阻塞性肺疾病(COPD表型为C型或D型)的临床疗效。方法根据入组标准和排除标准选取2010年1月至2014年1月在我院进行治疗的COPD患者88例,38例患者选择停用ICS/LABA,换用噻托溴铵治疗(噻... 详细信息

目的探讨噻托溴铵策略性替代ICS/LABA治疗极重度慢性阻塞性肺疾病(COPD表型为C型或D型)的临床疗效。方法根据入组标准和排除标准选取2010年1月至2014年1月在我院进行治疗的COPD患者88例,38例患者选择停用ICS/LABA,换用噻托溴铵治疗(噻托溴铵组);50例患者选择继续使用ICS/LABA治疗(ICS/LABA组),观察并比较两组患者治疗前后1年的COPD年急性加重次数、年住院次数、肺功能下降速率(FEV_1的下降速率)。结果两组患者入组时在性别、年龄、COPD患病时间(年)、吸烟时间(年)、是否戒烟、肺功能(FEV_1、FEV_1/预计值%、FVC、FEV_1/FVC%)、过去1年急性加重次数及住院次数方面差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。与1年前相比,噻托溴铵组年急性加重次数及年住院次数明显减少(P<0.05),肺功能下降速率明显下降(P<0.05)。1年后噻托溴铵组患者年急性加重次数、年住院次数及肺功能下降速率均明显低于ICS/LABA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对于极重度COPD(慢性阻塞性肺疾病表型为C型或D型)患者,噻托溴铵的疗效优于ICS/LABA,可以降低肺功能下降速率、减少急性加重及住院次数。

关键词：噻托溴铵肺疾病慢性阻塞性吸入性糖皮质激素/长效β2受体激动剂 FEV1