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黄瓜CC-NBS-LRR家族基因鉴定及在霜霉病和白粉病胁迫下的表达分析

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中国农业科学 2022年第19期55卷 3751-3766页

作者：康忱赵雪芳李亚栋田哲娟王鹏吴志明河北省农林科学院经济作物研究所

【目的】对黄瓜全基因组的CC-NBS-LRR(CNL)基因家族进行生物信息学和表达模式分析，为深入研究CNL基因家族在黄瓜生长、发育和病害胁迫响应中的功能提供参考。【方法】以拟南芥CNL为参考序列，利用本地Perl语言和Pfam等软件检索黄瓜‘9... 详细信息

【目的】对黄瓜全基因组的CC-NBS-LRR(CNL)基因家族进行生物信息学和表达模式分析，为深入研究CNL基因家族在黄瓜生长、发育和病害胁迫响应中的功能提供参考。【方法】以拟南芥CNL为参考序列，利用本地Perl语言和Pfam等软件检索黄瓜‘9930’基因组并确定黄瓜CNL基因家族成员。通过ExPASy、GSDS2.0、MEGA、MEME、Tbtools、Mev等工具对黄瓜CNL家族基因进行生物信息学分析。根据转录组数据库、霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）、白粉病菌（Podosphaera xanthii）接种处理和实时荧光定量PCR技术分析该类基因的表达模式。【结果】从黄瓜全基因组中鉴定得到17个CsCNL，这些基因分布在除1号染色体外的6条染色体上，其编码蛋白与其他植物CNL结构相似，均含有CC、NBS和LRR保守结构域，蛋白质大小介于197—1 148 aa，分子量在22.6—131.3 kD，等电点在5.71—8.38。共线性分析表明其中不存在片段重复和串联重复基因，多物种系统进化关系表明，CsCNL基因家族成员在葫芦科植物之间具有较高的结构和功能相似性。CsCNL启动子中存在多种与抗病相关的顺式作用元件。CsCNL表达具有组织特异性。在接种霜霉病菌2 d和5 d后，Csa3G815400、Csa3G822360和Csa7G420890在抗性品种中均显著上调表达，Csa4G015850在抗性品种中下调表达，在敏感品种中显著性表现不一；在接种白粉病菌2 d和5 d后，Csa2G008000和Csa3G684170在敏感品种中显著上调表达，在抗性品种中显著下调表达；Csa4G016360、Csa7G420890和Csa7G425940在抗性品种中显著上调表达，在敏感品种中表达量无变化或显著下调。【结论】CsCNL家族成员具有组织表达特异性并且多数基因能够响应霜霉病菌和白粉病菌的胁迫。推测Csa3G815400、Csa3G822360和Csa7G420890表达量增加，Csa4G015850表达量减少可诱发抗病黄瓜品种的霜霉病抗病反应；Csa4G016360、Csa7G420890和Csa7G425940表达量增加，Csa2G008000和Csa3G684170表达量减少可诱发抗病黄瓜品种的白粉病抗病反应；而Csa7G420890表达量的增加能同时诱发抗病黄瓜品种的霜霉病和白粉病的抗病反应。

关键词：黄瓜 CC-NBS-LRR(CNL) 霜霉病白粉病基因表达

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点阵激光治疗表皮痣一例

中国美容医学 2014年第12期23卷 997-998页

作者：刘科峰田哲娟河南大学第一附属医院皮肤科河南开封475001 许昌市中心医院皮肤科

点阵激光是基于局灶性光热原理、介于有创和无创之间的一种微创治疗。国内外学者应用其治疗瘢痕、黄褐斑、Civatte皮肤异色症、淡化消除色斑、皱纹、皮肤松弛、皮肤光老化等，疗效明确。笔者采用CO2点阵激光治疗1例表皮痣患者，取得了... 详细信息

点阵激光是基于局灶性光热原理、介于有创和无创之间的一种微创治疗。国内外学者应用其治疗瘢痕、黄褐斑、Civatte皮肤异色症、淡化消除色斑、皱纹、皮肤松弛、皮肤光老化等，疗效明确。笔者采用CO2点阵激光治疗1例表皮痣患者，取得了满意效果，现报道如下。

关键词：激光治疗表皮痣皮肤异色症皮肤光老化微创治疗皮肤松弛局灶性国内外

番茄SlCaM3、SlCaM4和SlCaM5基因的克隆及低温胁迫下的表达分析

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华北农学报 2023年第2期38卷 75-84页

作者：王鹏田哲娟赵雪芳康忱吴志明李亚栋黄冀楠河北省农林科学院经济作物研究所河北石家庄050051 河北省蔬菜工程技术研究中心河北石家庄050051 河北省农林科学院粮油作物研究所河北石家庄050035

钙调蛋白是植物体内一种重要的Ca^(2+)受体蛋白,在钙信号途径及抗逆反应中发挥着重要作用。为研究番茄CaM蛋白在低温胁迫下的作用机制,以番茄品种Heinz1706、LA3969、冀粉2号、冀粉3号和农博粉霸15为材料,克隆得到了番茄钙调蛋白基因SlC... 详细信息

钙调蛋白是植物体内一种重要的Ca^(2+)受体蛋白,在钙信号途径及抗逆反应中发挥着重要作用。为研究番茄CaM蛋白在低温胁迫下的作用机制,以番茄品种Heinz1706、LA3969、冀粉2号、冀粉3号和农博粉霸15为材料,克隆得到了番茄钙调蛋白基因SlCaM3、SlCaM4和SlCaM5,并进行序列分析和启动子区顺式作用元件分析;利用qRT-PCR技术分析SlCaM3、SlCaM4和SlCaM5在不同番茄品种中15,5℃低温胁迫下的表达模式,并结合RNA-seq数据分析组织特异性表达情况。结果显示,SlCaM3、SlCaM4和SlCaM5的CDS序列均为450 bp,三者相似度为93.63%;所编码的氨基酸序列完全相同,属酸性稳定亲水蛋白,具有典型的CaM蛋白保守结构域。启动子顺式作用元件分析表明,3个基因的启动子区除含有必需的核心元件外,还含有多种生物及非生物胁迫响应元件,并呈现互补模式分布。不同程度低温胁迫表达模式分析表明,15℃胁迫下,SlCaM3、SlCaM4和SlCaM5基因在5种番茄材料中的表达模式均呈现出先降低后升高的趋势,其中SlCaM5基因的表达量升高更为显著;5℃胁迫下,SlCaM3、SlCaM4基因的表达水平变化不明显,而SlCaM5基因在处理后期表达量显著升高;表明SlCaM5在低温下维持着CaM蛋白的翻译水平。SlCaM3、SlCaM4和SlCaM5基因在Heinz1706不同组织中的特异性表达情况显示,SlCaM3和SlCaM4在分生组织中具有较高的表达,而SlCaM5基因在不同组织中表达水平差异不明显。

关键词：番茄钙调蛋白低温基因克隆 qRT-PCR 表达分析

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多毛番茄DCL、AGO和RDR基因家族全基因组鉴定及其对番茄褪绿病毒感染和非生物胁迫响应的分析

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华北农学报 2024年第6期39卷 1-17页

作者：康忱田哲娟高亢郝玲玉刘伟李亚栋吴志明河北省农林科学院经济作物研究所河北石家庄050051 河北省蔬菜创新技术中心河北石家庄050051

对多毛番茄全基因组的Dicer-like(DCL)、Argonaute(AGO)和RNA依赖性RNA聚合酶(RDR)基因家族进行生物信息学和表达模式分析,为深入研究DCL、AGO和RDR基因家族在多毛番茄响应非生物胁迫和病毒感染过程中的功能提供参考。以拟南芥DCL、AGO... 详细信息

对多毛番茄全基因组的Dicer-like(DCL)、Argonaute(AGO)和RNA依赖性RNA聚合酶(RDR)基因家族进行生物信息学和表达模式分析,为深入研究DCL、AGO和RDR基因家族在多毛番茄响应非生物胁迫和病毒感染过程中的功能提供参考。以拟南芥DCL、AGO和RDR基因为参考序列,利用本地Perl语言和Pfam、SMART等软件检索多毛番茄LA1777基因组并确定多毛番茄DCL、AGO和RDR基因家族成员。通过ExPASy、GSDS 2.0、MEGA、Tbtools、SWISS-MODEL等工具对多毛番茄DCL、AGO和RDR家族基因进行生物信息学分析。根据非生物胁迫、番茄褪绿病毒(ToCV)处理和实时荧光定量PCR技术分析该类基因的表达模式。从多毛番茄中鉴定得到7个ShDCL、15个ShAGO和6个ShRDR基因,分别分布在第5,7,6条染色体上,其编码的蛋白与其他植物DCL、AGO和RDR结构相似,均含有该家族特有的保守结构域。系统发育分析表明,这些基因被分为4个亚组,与普通番茄之间具有较高的结构和功能相似性。ShDCL2a、ShDCL2c、ShDCL3、ShDCL4、ShAGO1b、ShAGO3、ShAGO4b、ShAGO5、ShAGO7、ShAGO10a、ShAGO10b、ShRDR1、ShRDR2、ShRDR3a、ShRDR6a和ShRDR6b在多种非生物胁迫和ToCV感染后显著上调表达,推测这些基因在非生物胁迫和病毒侵染过程中发挥着重要作用。

关键词：多毛番茄 DCL AGO RDR 非生物胁迫番茄褪绿病毒(ToCV)

点阵激光联合复方丙酸氯倍他索治疗增生性瘢痕疗效评价

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中国麻风皮肤病杂志 2016年第10期32卷 623-625页

作者：李琛刘科峰田哲娟河南大学第一附属医院河南开封475001 许昌市中心医院河南许昌461001

目的:评价CO_2点阵激光联合复方丙酸氯倍他索软膏治疗增生性瘢痕的疗效。方法:69例增生性瘢痕患者随机分为药物组(30例)和联合组(39例)。联合组应用点阵激光,30天1次,共3次,联合复方丙酸氯倍他索软膏外用,每日1次,连用3个月。药物组患... 详细信息

目的:评价CO_2点阵激光联合复方丙酸氯倍他索软膏治疗增生性瘢痕的疗效。方法:69例增生性瘢痕患者随机分为药物组(30例)和联合组(39例)。联合组应用点阵激光,30天1次,共3次,联合复方丙酸氯倍他索软膏外用,每日1次,连用3个月。药物组患者仅外用复方丙酸氯倍他索,每天1次。结果:联合组有效率为100%,明显高于药物组的76.92%(P<0.05)。联合组不良反应发生率为7.69%,明显低于药物组的13.33%(P<0.05)。结论:CO_2点阵激光联合复方丙酸氯倍他索软膏治疗增生性瘢痕明显优于单独应用复方丙酸氯倍他索。

关键词：点阵激光复方丙酸氯倍他索软膏增生性瘢痕

黄瓜纤维素合成酶CESA家族基因鉴定及非生物胁迫响应分析

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中国蔬菜 2022年第3期 29-41页

作者：康忱赵雪芳王鹏李亚栋田哲娟吴志明河北省农林科学院经济作物研究所河北石家庄050051

纤维素合成酶(cellulose synthase,CESA)是纤维素合成过程中重要的酶类,在细胞壁建成和植物生长发育过程中起着非常重要的作用。本试验从黄瓜品系9930全基因组数据中鉴定得到35个CESA基因家族成员,系统进化分析将家族成员分成6个group... 详细信息

纤维素合成酶(cellulose synthase,CESA)是纤维素合成过程中重要的酶类,在细胞壁建成和植物生长发育过程中起着非常重要的作用。本试验从黄瓜品系9930全基因组数据中鉴定得到35个CESA基因家族成员,系统进化分析将家族成员分成6个group。亚细胞结果显示,大部分成员定位于质膜上,少部分定位在高尔基体上。物种间CESA家族基因共线性分析显示,拟南芥和番茄的CESA基因家族与黄瓜CESA基因家族分别有15个和12个同源基因对,西瓜和甜瓜CESA基因家族与黄瓜CESA基因家族分别有19个和20个同源基因对。顺式作用元件分析表明,CsCESA家族基因具有植物激素、非生物胁迫、时空表达和生物进程相关的顺式作用元件。转录组数据和qRT-PCR结果显示,CsCESA家族基因在不同组织中差异表达,并且大部分基因受非生物胁迫和植物激素的诱导表达,其中CsCESA5、CsCESA20和CsCESA28均能响应低温、盐胁迫、ABA和MeJA的诱导,推测这3个基因可能在黄瓜响应非生物胁迫中发挥重要作用。

关键词：黄瓜纤维素合成酶(CESA) 非生物胁迫表达分析

番茄5个抗病基因KASP分型技术体系的建立与应用

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园艺学报 2021年第11期48卷 2211-2226页

作者：王鹏田哲娟康忱李亚栋王洪乐杨超沙邙光伟康亮范庆杰吴志明河北省农林科学院经济作物研究所石家庄050051 河北省承德市农林科学院河北承德067055

竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive allele specific PCR,KASP)是一种基于单核酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)的新型基因分型技术,建立高效、经济的番茄抗病基因的KASP分型技术对促进抗病品种的选育具有重要意义。本... 详细信息

竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive allele specific PCR,KASP)是一种基于单核酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)的新型基因分型技术,建立高效、经济的番茄抗病基因的KASP分型技术对促进抗病品种的选育具有重要意义。本研究中设计了抗番茄黄花曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)病基因Ty-1和抗根结线虫(root-knot nematode,RKN)基因Mi-1的KASP引物,结合已报道的抗番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)病基因Tm-2^(2)、抗番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)病基因Sw-5和抗镰刀菌颈腐根腐(fusarium crown and root rot,FCRR)病基因Frl的KASP引物,进行了番茄抗病基因KASP分型检测技术研究。利用不同基因型的番茄抗病种质,对影响KASP的反应体积、DNA模板浓度、引物浓度及反应循环数等进行了优化,建立了最优番茄抗病基因的KASP分型检测技术体系。研究结果显示,优化的KASP体系与Ty-1、Mi-1、Tm-2^(2)、Sw-5和Frl基因的PCR分子标记检测结果相一致。所用的KASP反应体系不但能节省试剂,且具有高准确性和强稳定性的优点,因此其可以广泛应用于番茄抗病基因的鉴定、遗传多样性和基因定位等研究,为番茄种质资源分子标记辅助的抗病性鉴定、抗原的快速筛选及利用提供技术支持和理论依据。

关键词：番茄种质资源 KASP技术基因分型 Ty-1 Mi-1 Tm-2^(2) Sw-5 Frl

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脉冲CO2激光开窗联合刮除术治疗囊肿性痤疮的临床疗效

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中国实用医刊 2015年第3期42卷 73-75页

作者：孙琦巍刘丛林田哲娟胥华河南省许昌市中心医院皮肤科

目的观察脉冲CO2激光开窗+刮除术治疗囊肿性痤疮的临床疗效。方法将124例囊肿性痤疮患者随机分成三组:A组56例, 采用脉冲CO2激光开窗+刮除术及抽吸冲洗治疗;B组35例, 采用脉冲CO2激光开窗+抽吸冲洗治疗;C组33例, 囊肿性痤疮采用注射器... 详细信息

目的观察脉冲CO2激光开窗+刮除术治疗囊肿性痤疮的临床疗效。方法将124例囊肿性痤疮患者随机分成三组:A组56例, 采用脉冲CO2激光开窗+刮除术及抽吸冲洗治疗;B组35例, 采用脉冲CO2激光开窗+抽吸冲洗治疗;C组33例, 囊肿性痤疮采用注射器穿刺抽吸冲洗。结果 A、B、C三组总有效率分别为100%、62.9%、54.55%, 治愈率分别为67.86%、37.1%、24.24%。A组治愈率及总有效率均高于B组、C组(P0.05)。3个月随访期内, 三组总复发率分别为2%, 7%及19%。结论 CO2激光开窗+刮除术治疗囊肿性痤疮效果显著, 疗程短, 痛苦小, 复发率低, 且无明显副作用。

关键词：囊肿性痤疮脉冲CO2激光刮除术

大麻二酚对脂多糖诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应和凋亡的抑制作用

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中国畜牧兽医 2025年 60-69页

作者：常欣欣黄鑫范港杨佳欣张伟伟杨清竹田哲齐齐哈尔大学生命科学与农林学院齐齐哈尔大学寒区麻及制品教育部工程研究中心黑龙江省农用生物制剂产业化协同创新中心

【目的】研究大麻二酚(CBD)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺上皮细胞(HC11)炎症反应及细胞凋亡的影响。【方法】试验将HC11细胞分为对照组、LPS组和不同浓度CBD+LPS共处理组(CBD浓度分别为2、4、6μmol/L)。对照组细胞仅加入培养液,LPS组加... 详细信息

【目的】研究大麻二酚(CBD)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺上皮细胞(HC11)炎症反应及细胞凋亡的影响。【方法】试验将HC11细胞分为对照组、LPS组和不同浓度CBD+LPS共处理组(CBD浓度分别为2、4、6μmol/L)。对照组细胞仅加入培养液,LPS组加入LPS处理,CBD+LPS共处理组用不同浓度CBD预处理1 h后加入LPS,24 h后收集各组细胞样品。利用ELISA法检测细胞中炎症因子含量;使用实时荧光定量PCR、Western blotting分别检测细胞炎症因子及核因子κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关基因mRNA和蛋白的表达水平;通过AnnexinV-FITC/碘化丙啶(PI)和JC-1染色法分别检测细胞凋亡率和线粒体膜电位水平。【结果】与对照组相比,LPS组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6含量及mRNA表达水平均极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05),NF-κB p65、核因子-κB抑制蛋白α(IκBα)、细胞外信号调节激酶(ERK)、丝裂原活化蛋白激酶(p38)、应激活化蛋白激酶(JNK)的mRNA表达量和蛋白磷酸化水平极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05)。与LPS组相比,不同浓度CBD与LPS共处理后细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6含量及mRNA表达量均极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05),NF-κB p65、IκBα、ERK、p38、JNK的mRNA表达量和蛋白磷酸化水平均极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05)。细胞凋亡率和线粒体膜电位检测结果显示,与对照组相比,LPS组HC11细胞凋亡率显著升高(P<0.05),线粒体膜电位显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,4μmol/L CBD和LPS共处理后,HC11细胞凋亡率显著降低(P<0.05),线粒体膜电位显著升高(P<0.05)。【结论】在LPS诱导的小鼠HC11细胞炎症及凋亡模型中,适宜浓度CBD能抑制NF-κB和MAPK信号通路的激活,从而抑制炎症因子的释放来缓解炎症反应;同时能降低LPS诱导的HC11细胞凋亡率、上调细胞线粒体膜电位,从而抑制细胞凋亡发生。

关键词：大麻二酚脂多糖小鼠乳腺上皮细胞炎症反应细胞凋亡