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水牛α-乳清蛋白基因的克隆及序列分析

西北农业学报 2009年第5期18卷 31-34页

作者：刘建忠田为宇敖敬周卫陈俊鲁礼林武汉科技大学化学工程与技术学院武汉430081

根据报道的奶牛α-乳清蛋白基因核苷酸序列设计和合成4对引物,采用PCR扩增的方法克隆并测定了水牛α-乳清蛋白全基因的核苷酸序列。结果表明,克隆的水牛α-乳清蛋白基因全长3 038 bp,包括5′侧翼区,3′侧翼区,3个内含子和4个外显子(该... 详细信息

根据报道的奶牛α-乳清蛋白基因核苷酸序列设计和合成4对引物,采用PCR扩增的方法克隆并测定了水牛α-乳清蛋白全基因的核苷酸序列。结果表明,克隆的水牛α-乳清蛋白基因全长3 038 bp,包括5′侧翼区,3′侧翼区,3个内含子和4个外显子(该序列已被成功提交到GenBank,序列接收号为EU422984)。核苷酸序列比对结果表明,水牛α-乳清蛋白基因与报道的奶牛该基因的核苷酸序列同源性为97.53%。水牛α-乳清蛋白成熟肽的氨基酸序列与奶牛相比有两个氨基酸的差异。与奶牛相比,水牛α-乳清蛋白基因5′调控区发生了多处插入突变和碱基替换突变,这些插入和替换突变可能与水牛乳汁中α-乳清蛋白的高水平表达有关。

关键词：中国水牛 α-乳清蛋白基因 PCR扩增同源性分析

人肥胖基因大肠杆菌表达载体的构建及其诱导表达

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华中农业大学学报 2008年第6期27卷 705-708页

作者：刘建忠敖敬田为宇周卫鲁礼林张晓龙武汉科技大学化学工程与技术学院武汉430081 武汉科技大学计算机学院武汉430081

通过设计1对PCR引物(上游引物,5-′GCCATATGGTGCCGATCCAAAAAG-3′,下游引物,5-′GAGAATTCCCTTCAAGGCCTCAG-3′),采用PCR方法扩增出人肥胖基因编码成熟肽的核苷酸序列,将扩增产物从琼脂糖凝胶上回收后插入测序载体pMD-18-T后进行了核苷... 详细信息

通过设计1对PCR引物(上游引物,5-′GCCATATGGTGCCGATCCAAAAAG-3′,下游引物,5-′GAGAATTCCCTTCAAGGCCTCAG-3′),采用PCR方法扩增出人肥胖基因编码成熟肽的核苷酸序列,将扩增产物从琼脂糖凝胶上回收后插入测序载体pMD-18-T后进行了核苷酸序列测定。将经EcoRⅠ和NdeⅠ双酶切后的扩增产物插入经EcoRⅠ和NdeⅠ双酶切后的大肠杆菌表达载体pET-28a(+),构建了可在大肠杆菌中高效表达人瘦蛋白的表达载体。将表达载体转化入大肠杆菌菌株BL21,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测,结果表明构建的人肥胖基因表达载体得到高效表达,重组蛋白占到菌体总蛋白的31.2%。

关键词：人肥胖基因原核表达载体诱导表达

我国不同地域牦牛BLG基因部分核苷酸序列同源性分析

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武汉科技大学学报 2006年第5期29卷 469-472页

作者：刘建忠田为宇周丽芳敖敬武汉科技大学化学工程与技术学院

设计一对PCR引物,寡聚核苷酸序列的上游引物为5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3,′下游引物为5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后,分别克隆了来自我国甘肃、青海和云南地区牦牛β乳球蛋白... 详细信息

设计一对PCR引物,寡聚核苷酸序列的上游引物为5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3,′下游引物为5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后,分别克隆了来自我国甘肃、青海和云南地区牦牛β乳球蛋白基因的5′调控区1 447 bp的DNA片段。将该片段从琼脂糖凝胶中回收,克隆在pMD18-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明,甘肃牦牛与青海牦牛该序列的核苷酸同源性为98.13%,与云南牦牛该序列的核苷酸同源性为97.65%,青海牦牛与云南牦牛该基因片段的核苷酸序列同源性为99.45%。

关键词：牦牛 BLG基因同源性分析

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基因敲除技术研究进展

化学与生物工程 2006年第2期23卷 4-6页

作者：刘建忠敖敬田为宇马季骅武汉科技大学化工与资源环境学院湖北武汉430081 武汉科技大学医学院湖北武汉430081

基因敲除技术是研究功能基因作用的重要方法,是后基因组时代的重要研究内容。从基因敲除的细胞基础、基因敲除载体的构建及发生同源重组干细胞的筛选、基因敲除动物模型的建立、基因敲除与基因拯救、国内基因敲除技术的研究现状等方面... 详细信息

基因敲除技术是研究功能基因作用的重要方法,是后基因组时代的重要研究内容。从基因敲除的细胞基础、基因敲除载体的构建及发生同源重组干细胞的筛选、基因敲除动物模型的建立、基因敲除与基因拯救、国内基因敲除技术的研究现状等方面概括了基因敲除技术的研究进展和该技术目前存在的主要问题。

关键词：基因敲除功能基因动物模型

青海牦牛与云南牦牛乳球蛋白基因5′调控区核苷酸序列同源性比较

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武汉科技大学学报 2006年第4期29卷 419-421页

作者：刘建忠周丽芳朱艳君田为宇敖敬马季骅武汉科技大学化学工程与技术学院湖北武汉430081 武汉科技大学医学院湖北武汉430081

利用一对PCR引物,寡聚核苷酸序列的上游引物为5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3;′下游引物为5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后,分别克隆来自我国青海和云南地区牦牛的乳球蛋白基因的5′... 详细信息

利用一对PCR引物,寡聚核苷酸序列的上游引物为5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3;′下游引物为5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后,分别克隆来自我国青海和云南地区牦牛的乳球蛋白基因的5′调控区1 447 bp的DNA片段。将该片段从琼脂糖凝胶中回收,克隆在pMD18-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明,青海牦牛该序列的核苷酸序列与文献报道的奶牛该基因的同源性为97.65%,云南牦牛该序列的核苷酸序列与奶牛该基因的同源性为96.8%,青海牦牛与云南牦牛该基因片段的核苷酸序列同源性为99.4%。

关键词：牦牛乳球蛋白基因 5’调控区同源性

连续11年不同秸秆还田量下稻田甲烷增排效应变化研究

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土壤学报 2024年

作者：杨正宇李宗明李言言沈健林吴金水中国科学院亚热带农业生态研究所亚热带农业生态过程重点实验室中国科学院亚热带农业生态研究所长沙农业环境观测研究站中国科学院大学资源与环境学院

探究长期秸秆还田下稻田甲烷(CH4)增排效应变化及影响机制，可为长期秸秆还田模式下CH4排放准确评估提供依据。以亚热带地区典型双季稻田为对象，设置仅施化肥处理（CON）、低量秸秆还田处理(3.0 t·hm-2，LS)和高量秸秆还田处理(6.0 t... 详细信息

探究长期秸秆还田下稻田甲烷(CH4)增排效应变化及影响机制，可为长期秸秆还田模式下CH4排放准确评估提供依据。以亚热带地区典型双季稻田为对象，设置仅施化肥处理（CON）、低量秸秆还田处理(3.0 t·hm-2，LS)和高量秸秆还田处理(6.0 t·hm-2，HS)，进行为期11年（2012—2022）的定位试验，观测了秸秆还田初期和后期CH4排放及相关土壤环境因子变化。结果表明：LS和HS的CH4排放显著大于CON（HS＞LS＞CON）(P＜0.05)，但在第11年增幅相比第1年分别减弱了75.1%和83.5%。在第11年，LS和HS相对CON的土壤有机碳（SOC）、铵态氮(NH4+-N)和溶解性有机碳（DOC）整体分别显著提升7.90%和20.8%（LS和HS，下同）、15.0%和25.7%、19.5%和31.3%（P＜0.05）；氧化还原电位（Eh）和土壤容重（BD）分别显著降低14.1%和21.7%、10.3%和11.2%（P＜0.05）；LS和HS处理的mcrA、pmoA基因丰度和mcrA/pmoA丰度比值相对CON分别显著增加96.0%和152%、12.7%和34.8%、73.9%和85.8%（P＜0.05）。通过分析发现在秸秆还田第11年，稻田CH4排放与土壤中微生物mcrA丰度和mcrA/pmoA显著正相关（P＜0.05），其中SOC含量增加导致的BD降低和Eh的上升促进了pmoA丰度的上升，可能是导致秸秆还田11年后CH4排放增幅降低的主要原因。综上，与CON相比，在亚热带地区长期秸秆还田相较短期所产生的CH4增排幅度，会受SOC、BD和Eh改变的影响而显著减弱80%左右（P＜0.05），因此，针对秸秆还田模式下稻田CH4排放的评估需要根据还田持续时间进行动态调整。

关键词：秸秆还田稻田甲烷长期效应土壤环境因子

山水林田湖草视角下贵州传统村落的地方性特征研究

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贵州师范大学学报（自然科学版） 2024年第5期42卷 117-126页

作者：王华飞赵宇鸾周鸾宇施超杨小飘贵州师范大学地理与环境科学学院贵州贵阳550025 贵州省喀斯特山地生态环境国家重点实验室培育基地贵州贵阳550025

新型城镇化背景下,传统村落人居环境多样性面临丧失的威胁,合理利用保护传统村落地方性景观有利于促进其人居环境多样性的永续发展。基于“山水林田湖草生命共同体”理念,以贵州省757个传统村落为例,综合运用图示表达以及核密度估计法... 详细信息

新型城镇化背景下,传统村落人居环境多样性面临丧失的威胁,合理利用保护传统村落地方性景观有利于促进其人居环境多样性的永续发展。基于“山水林田湖草生命共同体”理念,以贵州省757个传统村落为例,综合运用图示表达以及核密度估计法等空间分析方法,探究传统村落空间分布结构及其与山、水、林、田等自然景观要素的关联特征。研究发现:1)贵州传统村落数量多、密度大,在空间结构上呈聚集不均衡分布,主要以团块状分布于东南部区域;在西南部、东北部区域分别呈斑块状、散点状分布;西北部传统村落分布数量则相对较少。2)在村落与自然景观要素关联特征上,从其与山区类型关系看,以山地丘陵型村落分布数量最多,达491个,占64.8%;与水域类型关系看,以河谷型、水库型村落分布较多,分别占51.5%和44.2%;植被类型以栽培植物面域中传统村落分布数量最多,占50.9%;农田类型以稻作梯田为主,占58.8%。3)在地方性格局上,贵州传统村落依据自然条件选址可划分为村-山、村-水、村-林、村-田4个格局。最后,基于传统村落空间分布和地方性特征,提出贵州传统村落分区分类开发利用保护策略。

关键词：山区传统村落地方性特征多样性景观格局

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我国油菜秸秆肥料化利用研究进展

中国油料作物学报 2024年

作者：孙元丰孙仁华教子旭胡潇方李晓阳代碌碌陈旭蕾薛颖昊徐志宇农业农村部农业生态与资源保护总站中国农业大学资源与环境学院中国农业生态环境保护协会

油菜秸秆含有丰富的营养元素，具有重要的肥料化利用价值。目前，关于我国油菜秸秆肥料化利用现状及研究进展缺乏系统梳理。本文基于农业农村部秸秆资源台账数据及文献资料，对我国油菜秸秆肥料化利用养分基础、利用现状、研究进展及存... 详细信息

油菜秸秆含有丰富的营养元素，具有重要的肥料化利用价值。目前，关于我国油菜秸秆肥料化利用现状及研究进展缺乏系统梳理。本文基于农业农村部秸秆资源台账数据及文献资料，对我国油菜秸秆肥料化利用养分基础、利用现状、研究进展及存在的问题进行系统分析，并提出对策建议。研究表明，油菜秸秆中磷、钾等元素含量较高，2022年全国油菜秸秆肥料化利用量达1591.1万吨（未统计港澳台），以直接还田为主，油菜秸秆制有机肥及与饲料化、基料化联用也是重要的发展方向。油菜秸秆肥料化利用在土壤养分补充、土壤质地改善、重金属吸附、作物产量提高等方面都能起到促进作用。未来，需要加强油菜秸秆快速腐解技术研究、还田技术模式集成及轻简高效装备研发。

关键词：油菜秸秆肥料化利用养分补充土壤质地改善重金属吸附作物增产

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智能农机“乘风破浪”

智能农机“乘风破浪”