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肝癌抑制基因-1肿瘤靶向性表达及其特异性抗肿瘤作用

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中华肝脏病杂志 2008年第5期16卷 355-359页

作者：张剑甘愉胡晶莹赵新泰上海交通大学医学院、上海市肿瘤研究所细胞与分子免疫实验室 200032

目的建立肝癌抑制基因-1（HCCS1）肿瘤靶向性表达载体，提高肿瘤治疗的安全性。方法活细胞计数试剂盒测定HCCS1高表达对正常细胞和肿瘤细胞的影响，荧光素酶试验检测肿瘤特异性启动子PEG3p在正常肝细胞和肝癌细胞中的相对转录活性，AdEa... 详细信息

目的建立肝癌抑制基因-1（HCCS1）肿瘤靶向性表达载体，提高肿瘤治疗的安全性。方法活细胞计数试剂盒测定HCCS1高表达对正常细胞和肿瘤细胞的影响，荧光素酶试验检测肿瘤特异性启动子PEG3p在正常肝细胞和肝癌细胞中的相对转录活性，AdEasyTM系统包装并利用PCR鉴定重组腺病毒Ad—PEG-3p—HCCS1，Westernblot检测重组腺病毒感染后HCCS1在正常细胞和肿瘤细胞中的表达情况，结晶紫试验和四甲基偶氮唑盐试验观察该重组腺病毒体外抗肿瘤的靶向性。结果HCCS1高表达对肿瘤细胞株BEL7404和SW-620的生长抑制作用明显超过正常细胞株L02和正常人肺成纤维细胞，96h抑制率达60％。荧光素酶试验显示，PEG-3p在BEL-7404、BEL7405、QGY-7703中的相对转录活性分别为L02的3．9、4．7、1．5倍。成功构建了新抑癌基因HCCS1肿瘤靶向性表达的重组腺病毒Ad—PEG3p—HCCS1，Westernblot检测结果显示，在BEL7404和QGY7703中，HCCS1表达高于在L02中的表达。结晶紫试验和四甲基偶氮唑盐试验显示，Ad—PEG-3p—HCCS1与Ad—CMVHCCS1相比，在不降低对肿瘤抑制效果的前提下，明显降低了对正常细胞的杀伤作用。结论肿瘤细胞对HCCS1的生长抑制作用更为敏感，PEG3p在肝癌细胞中也具有肿瘤特异性，AdPEG-3p—HCCS1可特异性地在肿瘤细胞中表达HCCS1，从而提高HCCS1基因治疗的安全性。

关键词：癌,肝细胞基因,抑制,肿瘤腺病毒载体

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如何转化初中英语教学中的后进生

中文科技期刊数据库（文摘版）教育 2016年第7期 196-196,198页

作者：甘愉芳云南省大理白族自治州弥渡县红岩镇初级中学云南大理675601

后进生是广大初中英语教师最头痛的教育对象,也是最应该关注的学生群体。后进生学习欲望低,自信心不足,毅力不强,学习方法不当,甚至放弃学习。后进生的学习方法和教师的教学方法不当也是影响后进生学习状况的关键因素。因此,在教学过程... 详细信息

后进生是广大初中英语教师最头痛的教育对象,也是最应该关注的学生群体。后进生学习欲望低,自信心不足,毅力不强,学习方法不当,甚至放弃学习。后进生的学习方法和教师的教学方法不当也是影响后进生学习状况的关键因素。因此,在教学过程中,对如何激发后进生的学习兴趣以及转化后进生的策略进行研究是十分必要的。

关键词：后进生初中英语教学转化

氨基酸转运蛋白SLC38A2促进NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

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肿瘤 2023年第11期43卷 854-865页

作者：杨含草高见赵丹李倩李进屠红甘愉上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所肿瘤系统医学全国重点实验室上海200032

目的:探讨溶质载体家族38成员2(solute carrier family 38 member 2,SLC38A2)对自然杀伤(natural killer,NK)细胞肿瘤杀伤活性的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法检测谷氨酰胺缺失NK细胞和节食小鼠脾脏中谷氨酰胺相关氨基酸转运蛋白(SL... 详细信息

目的:探讨溶质载体家族38成员2(solute carrier family 38 member 2,SLC38A2)对自然杀伤(natural killer,NK)细胞肿瘤杀伤活性的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法检测谷氨酰胺缺失NK细胞和节食小鼠脾脏中谷氨酰胺相关氨基酸转运蛋白(SLC38A2、SLC1A5、SLC7A5、SLC7A1和SLC1A4)mRNA的表达情况。通过慢病毒感染的方法将携带有SLC38A2基因重组慢病毒载体转入NK-92MI细胞使SLC38A2过表达。在SLC38A2过表达或谷氨酰胺浓度提高后,利用乳酸脱氢酶释放实验检测NK-92MI细胞对胰腺癌细胞PANC-1和肝癌细胞HUH-7的杀伤活性,并通过FCM法(FITC-Annexin V/7-AAD染色)检测NK-92MI细胞对PANC-1和HUH-7细胞凋亡的影响。最后,通过FCM法进一步检测NK-92MI细胞中杀伤效应分子干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平以及脱颗粒标志分子CD107a的表达水平。结果:在缺失谷氨酰胺的培养条件下以及节食小鼠模型中获得的NK细胞中氨基酸转运蛋白SLC38A2 mRNA的表达显著增高(P<0.001和P<0.01)。成功构建SLC38A2过表达的NK-92MI细胞;SLC38A2过表达或谷氨酰胺处理均可以明显提升NK-92MI细胞对胰腺癌PANC-1和肝癌HUH-7细胞的杀伤能力(P均<0.05),同时对肿瘤细胞的凋亡具有明显的促进作用(P均<0.01)。流式细胞分析结果显示,过表达SLC38A2的NK-92MI细胞在杀伤肿瘤细胞的过程中,细胞内IFN-γ和TNF-α的含量均显著增加(P均<0.001),细胞膜表面CD107a的表达水平显著提高(P<0.001)。结论:氨基酸转运蛋白SLC38A2能显著增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。

关键词：自然杀伤细胞氨基酸转运蛋白 SLC38A2 肿瘤细胞

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肺癌干细胞的球体形成与致瘤性分析

肿瘤 2008年第9期28卷 751-754页

作者：耿沁董强刚姚明郑必强胡晶莹周瑾赵仰星闫明霞甘愉上海交通大学上海市肿瘤研究所分子诊断实验室上海200032 上海交通大学上海市肿瘤研究所实验病理室上海200032 上海交通大学上海市肿瘤研究所免疫与分子生物学研究室上海200032

目的：从人肺腺癌细胞株SPC—A1中诱导球体形成，对其中的肺癌干细胞进行鉴定并评估其致瘤能力。方法：无血清条件下培养肺癌细胞，采用表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）、重组人胰岛素样生长因子-1（insulin—like growth... 详细信息

目的：从人肺腺癌细胞株SPC—A1中诱导球体形成，对其中的肺癌干细胞进行鉴定并评估其致瘤能力。方法：无血清条件下培养肺癌细胞，采用表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）、重组人胰岛素样生长因子-1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）和重组人成纤维细胞生长因子-10（fibroblast growth factor—10，FGF-10）等细胞生长因子诱导球体形成，球体细胞采用RT—PCR及免疫荧光技术检测干细胞相关标志的表达，并通过NOD—SCID小鼠移植评估其致瘤性。结果：SPC—A1肺腺癌细胞经培养5—10d后，即可形成悬浮生长的细胞球体（肺球体）。RT—PCR检测显示肺球体细胞表达肺癌干细胞表面标志CD24和CD221．细支气管肺泡干细胞标志Clara细胞分泌蛋白和肺泡活性蛋白C，胚胎干细胞主干基因OCT4、Nanog和Bmi-1，以及肺干细咆主干基因甲状腺转录因子-1。采用免疫荧光检测其中3个标志的蛋白表达，证实80％以上的肺球体细胞呈Clara细胞分泌蛋白、肺泡活性蛋白C和OCT4染色阳性。肺球体细胞具有高致瘤性，在NOD—SCID小鼠中移植5103个细胞即可形成肿瘤。结论：肺球体细胞中肺癌干细胞高度富集并具有致瘤性。

关键词：腺癌,细支气管肺泡细胞培养技术干细胞球体动物实验

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顾健人院士:德技双馨,誉耀杏林

肿瘤 2021年第12期41卷 805-811页

作者：覃文新李宗海屠红甘愉张志刚上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室上海200032

顾健人,上海交通大学教授、中国工程院院士。1932年1月出生于江苏省吴县一个医学世家,1948年毕业于震旦大学附属苏州有原中学,1954年毕业于上海第一医学院。主要从事肿瘤病理、肿瘤生物化学、肿瘤分子生物学科研和教学工作,是我国癌相... 详细信息

顾健人,上海交通大学教授、中国工程院院士。1932年1月出生于江苏省吴县一个医学世家,1948年毕业于震旦大学附属苏州有原中学,1954年毕业于上海第一医学院。主要从事肿瘤病理、肿瘤生物化学、肿瘤分子生物学科研和教学工作,是我国癌相关基因及基因治疗研究的奠基人之一,提出了肿瘤是一种系统性疾病的概念。现任上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所名誉所长。

关键词：系统性疾病仁济医院名誉所长肿瘤病理肿瘤生物中国工程院院士上海交通大学上海第一医学院

多重逆转录聚合酶链反应检测主要上呼吸道病毒

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中国公共卫生 2003年第3期19卷 305-307页

作者：居丽雯蒋露芳甘愉周联娣姜庆五谈兆麟复旦大学公共卫生学院卫生微生物教研室上海200032 香港中文大学医学院

目的　建立用多重逆转录聚合酶链反应 (mRT -PCR)检测甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒以及呼吸道合胞病毒 (RSV)A型、B型等主要上呼吸道病毒的方法 ,以快速检测上呼吸道感染主要病毒及对甲型、甲亚型、乙型流感病毒在上海地区人群感染、... 详细信息

目的　建立用多重逆转录聚合酶链反应 (mRT -PCR)检测甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒以及呼吸道合胞病毒 (RSV)A型、B型等主要上呼吸道病毒的方法 ,以快速检测上呼吸道感染主要病毒及对甲型、甲亚型、乙型流感病毒在上海地区人群感染、流行情况调查。方法　采用经MDCK细胞接种培养的甲 3型、乙型流感病毒和Hep - 2细胞接种培养的RSVA型、B型标准毒株病毒液 ,以及甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒和RSVA型、B型混合毒株病毒液 ,使用 5组引物 ,分别为HA1- 5a1和HAl- 3a1(甲 1型流感病毒 )、HA3 - 5a1和HA3 - 3a1(甲 3型流感病毒 )、NP- 5b1和NP - 3b1(乙型流感病毒 )、RSVAF和RSVAR(RSVA型 )、RSVBF和RSVBR(RSVB型 ) ,经mRT -PCR ,琼脂糖凝胶电泳 ,于紫外灯下观察上述病毒特异核苷酸条带。结果　甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒 ,RSVA型、B型分别在 43 1,2 10 ,3 90 ,3 3 4,183bp处出现清晰的 5条DNA条带。结论　应用 5组引物 ,mRT -PCR可用于快速检测临床上呼吸道感染标本中的流感病毒和RSV ,并可对其进行分型。

关键词：多重逆转录聚合酶链反应流感病毒呼吸道合胞病毒

ABCA8通过激活ERK信号通路促进人胰腺癌细胞的迁移和侵袭

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肿瘤 2020年第2期40卷 92-101页

作者：杨春梅袁慧张伟李进李梦鸽徐登飞屠红甘愉上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032 复旦大学附属肿瘤研究中心胸外科肿瘤研究中心上海200032 河南省人民医院肿瘤内科河南郑州450000

目的:探究ATP结合盒转运蛋白家族A亚家族成员8(ATP-binding cassette transporter subfamily A member 8,ABCA8)对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,以及可能的作用机制。方法:用携带有ABGA8基因的慢病毒GV358或空载体慢病毒(对照组)感... 详细信息

目的:探究ATP结合盒转运蛋白家族A亚家族成员8(ATP-binding cassette transporter subfamily A member 8,ABCA8)对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,以及可能的作用机制。方法:用携带有ABGA8基因的慢病毒GV358或空载体慢病毒(对照组)感染人胰腺癌CFPAC-1细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测ABCA8 mRNA和蛋白的表达水平;细胞划痕愈合实验、Transwell小室迁移和侵袭实验分别检测ABCA8过表达对CFPAC-1细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白质印迹法检测ABCA8过表达对细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及其磷酸化蛋白表达水平的影响。应用ERK抑制剂SCH772984阻断ERK信号通路,再行Transwell小室迁移和侵袭实验以检测ABCA8介导的促CFPAC-1细胞迁移和侵袭能力的变化;采用实时荧光定量PCR法检测ABCA8过表达对CFPAC-1细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)、MMP7、MMP9和金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase1,TIMP1)mRNA表达水平的影响,以及SCH772984阻断ERK信号通路后对MMP7和TIMP1 mRNA表达水平的影响。结果:成功构建获得ABCA8稳定过表达的CFPAC-1细胞。ABCA8过表达能够明显促进CFPAC-1细胞的迁移(P0.05)。同时,ABCA8过表达可以显著上调CFPAC-1细胞中MMP7 mRNA的表达水平(P0.05)。结论:ABCA8能够通过ERK信号通路增强人胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力,ABCA8介导的迁移和侵袭能力增强可能与上调MMP7和下调TIMP1的表达有关。

关键词：胰腺肿瘤 ATP结合盒式转运蛋白,亚家族A 细胞运动 ERK信号通路基质金属蛋白酶7

乙型肝炎病毒反转录酶编码区核苷酸变异与肝癌的相关性研究

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肿瘤 2014年第2期34卷 141-146页

作者：高付敏吴燕赵芝梅金晏钱耕荪陈陶阳张亚玮王金兵甘愉项永兵屠红复旦大学公共卫生学院流行病学教研室上海200032 上海交通大学附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032 启东市人民医院/启东肝癌防治研究所病因室江苏启东226200 上海交通大学附属仁济医院上海市肿瘤研究所流行病室上海200032

目的：探讨乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBy）一多聚酶（polymerase，P）基因反转录酶（reversetranscriptase，RT）区突变与肝癌发生的关系。方法：收集202例肝癌患者及202例年龄、性别匹配的慢性HBV携带者（对照组）的血清，采用... 详细信息

目的：探讨乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBy）一多聚酶（polymerase，P）基因反转录酶（reversetranscriptase，RT）区突变与肝癌发生的关系。方法：收集202例肝癌患者及202例年龄、性别匹配的慢性HBV携带者（对照组）的血清，采用病例一对照的方法进行研究；PCR法扩增HBV-P基因的RT区，对扩增产物直接测序并进行序列分析，探讨该区域基因突变与肝癌发生的关系。结果：HBIT-P基因RT区共有3个位点发生突变T895A、A904T和C955T，它们在肝癌组中的发生率均显著高于对照组，分别为47．5％坩37．1％（P=0．034）、5．4％VS1．0％（P=0．011）和5．4％vs1．5％（P=O．030）。Logistic多因素分析结果显示，T895A是肝癌的独立危险因素[比值比（oddsratio，0R）=2．230，95％可信区间（confidenceinterval，CI）：1．230～4．044，P=0．008]。A904T和C955T虽有增加肝癌风险的趋势（OR=6．523，95％CI：0．838～50．733和OR=2．904，95％C7：0．599～14．093），但差异无统计学意义。然而，A904T和C955T中有一项为阳性的发生率在肝癌组和对照组中分别是9．4％和2．5％（P=0．003），经多因素调整后统计显示，与肝癌具有相关性（OR=4．145，95％CI：1．170～14．681，P=0．028）。结论：邯V-P基因RT区存在着与肝癌发生相关的突变。

关键词：肝肿瘤肝炎病毒乙型 DNA突变分析流行病学方法

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新生期母婴分离对成年小鼠肿瘤生长的影响

肿瘤 2016年第3期36卷 245-253页

作者：王晴蒙姿宏宋艳芳胡晶莹姚明屠红甘愉上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

目的 :探讨新生期母婴分离(maternal separation,MS)作为一种生命早期应激对成年小鼠肿瘤生长的影响。方法 :C57BL/6小鼠在出生后3周内,每天和母鼠分开饲养6 h,建立小鼠MS模型。待小鼠6周龄(出生后第43天)时,用高架十字迷宫(elevated pl... 详细信息

目的 :探讨新生期母婴分离(maternal separation,MS)作为一种生命早期应激对成年小鼠肿瘤生长的影响。方法 :C57BL/6小鼠在出生后3周内,每天和母鼠分开饲养6 h,建立小鼠MS模型。待小鼠6周龄(出生后第43天)时,用高架十字迷宫(elevated plus maze,EPM)行为学实验检测MS对小鼠焦虑水平的影响,并于出生后第45天时皮下接种胰腺癌Panc-02细胞,建立小鼠胰腺癌移植瘤模型,观察小鼠胰腺癌移植瘤的生长状况。结果 :新生期MS能明显降低雄性小鼠成年后在EPM开放臂中的活动时间(P0.05)。结论 :生命早期母婴分离具有促进成年小鼠肿瘤生长的作用,且该作用可能存在性别差异。

关键词：胰腺肿瘤母婴分离应激,心理学动物实验