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作者：甄乾娜重庆医科大学

学位级别：硕士

目的: 1.建立一种高效液相色谱（HPLC）-程序波长紫外检测法同时测定血浆中色氨酸（tryptophan, Trp）及其主要代谢产物犬尿氨酸（kynurenine,Kyn）和5-五羟色胺（5-hydroxytryptamine, 5-HT）的浓度。 2.考察促凝剂﹑抗凝剂以... 详细信息

目的: 1.建立一种高效液相色谱（HPLC）-程序波长紫外检测法同时测定血浆中色氨酸（tryptophan, Trp）及其主要代谢产物犬尿氨酸（kynurenine,Kyn）和5-五羟色胺（5-hydroxytryptamine, 5-HT）的浓度。 2.考察促凝剂﹑抗凝剂以及分离胶对Trp﹑Kyn和5-HT测定的干扰情况,并选择合适的抗凝剂。 3.用所建立的方法测定慢性乙肝患者（CHB）﹑抑郁症患者和维持血液透析（HD）的尿毒症患者HD前后及其各自的正常对照血浆中Trp﹑Kyn和5-HT的浓度,从而了解患者血浆中Trp的代谢状态以及HD对尿毒症患者的治疗效果。方法: 1.以茶碱为内标,采用BDS-Hypersil-C8 （150 mm×4.6 mm, 5μm）柱分离。流动相为醋酸钠缓冲液（10 mmol/L, pH 4.5）:乙腈94:6（v/v）;流速为0.6 mL/min;柱温为25℃;紫外检测波长设定为0~5.5 min, 360 nm,5.6~6.0 min, 220 nm,6.1~7.0 min, 302 nm,7.1~8.0, 360 nm。进样量25μl,检测时间8.0 min。 2.分别采用促凝管,肝素、乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA）和加有分离胶的EDTA抗凝管收集全血样本,分离血清或血浆,用HPLC-程序波长紫外检测法测定并比较Trp﹑Kyn和5-HT的浓度。 3.用含EDTA的抗凝管分别收集15例抑郁症患者﹑20例维持HD的尿毒症患者﹑110例CHB患者以及相应的正常对照标本,1 h内分离血浆,测定血浆中Trp﹑Kyn和5-HT的浓度。结果: 1. Kyn、5-HT、Trp和茶碱的保留时间分别为5.12、5.81、6.63和7.52 min。Kyn、5-HT和Trp的线性范围分别为:0.421μmol/L～20.2μmol/L,4.36 nmol/L～980.5 nmol/L及3.97μmol/L～400.0μmol/L,最低检测限分别为0.016μmol/L,2.03 nmol/L和0.134μmol/L。三种分析物的日内变异系数均小于4%,日间变异系数均小于5%,平均回收率在87%～113%之间。 2.采用肝素和加有分离胶的EDTA抗凝管的血浆标本其Trp﹑Kyn及5-HT含量的测定结果与EDTA抗凝管的血浆标本相比无显著差异。对于Trp,Kyn的测定,采用促凝管的血清标本与其他三种抗凝管的血浆标本均无显著差异,但血清的5-HT浓度显著高于血浆（p＜0.01）。 3. （1）抑郁症患者Kyn、5-HT、Trp的血浆水平均低于正常对照,且两者之间的差异具有统计学意义（p＜0.05）。（2）尿毒症患者HD前血浆中Kyn,5-HT水平及Kyn/Trp比值均显著高于正常对照（p＜0.01）,而Trp浓度显著低于正常对照（p＜0.01）。尿毒症患者HD后Kyn,5-HT及Kyn/Trp比值均有所降低,但5-HT水平及Kyn/Trp比值仍较正常人高,Trp水平仍低于正常人。（3）乙肝患者Trp和5-HT水平均显著低于正常对照（p＜0.01）,Kyn/Trp则明显高于对照组（p＜0.01）。（4）乙肝患者HBV病毒复制数的对数（LogDNA）与Kyn （r=0.547;p=0.000）和Kyn/Trp （r=0.804;p=0.000）成明显的正相关,而与5-HT （r=-0.485;p=0.000）和Trp （r=-0.644;p=0.000）成明显负相关。ALT与Kyn （r=0.265;p=0.000）和Kyn/Trp （r=0.224;p=0.020）均有相关性。（5）据病毒载量将CHB患者分成高（LogDNA＞6.0）﹑中（LogDNA 6.0～4.0）﹑低（LogDNA＜4.0）病毒组。对于Trp和Kyn/Trp,各组之间均具有显著差异（p＜0.01）。对于5-HT和Kyn,低病毒组和高﹑中病毒组之间有显著差异（p＜0.01）,高﹑中病毒组间也有明显差异（p＜0.05）。（6）以酶活性为80 IU/L为界将患者分为高﹑低ALT酶活性组,结果显示:高﹑低ALT酶活性组间Kyn和Kyn/Trp存在显著差异。结论: 1.本研究建立了一种HPLC-程序波长紫外检测法同时测定血浆中Trp及其主要代谢产物Kyn和5-HT。该方法灵敏、快速、简便,适合于实验室研究和临床常规检测。 2.本研究考察了抑郁症﹑CHB及维持HD的尿毒症患者血浆中Trp的代谢,发现三种疾病均存在不同程度的Trp代谢紊乱,

关键词：高效液相色谱色氨酸 5-羟色胺犬尿氨酸

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高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中的色氨酸及其代谢物

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色谱 2011年第5期29卷 435-438页

作者：甄乾娜黄小兰张晓清班艳娜丁敏重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心医学心理学教研室重庆400016

建立了一种高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中色氨酸(Trp)及其主要代谢产物犬尿氨酸(Kyn)和5-羟色胺(5-HT)。以茶碱为内标(IS),采用BDS-Hypersil-C8柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离。流动相为10 mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.5)-... 详细信息

建立了一种高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中色氨酸(Trp)及其主要代谢产物犬尿氨酸(Kyn)和5-羟色胺(5-HT)。以茶碱为内标(IS),采用BDS-Hypersil-C8柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离。流动相为10 mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.5)-乙腈(94∶6,v/v),流速为0.6 mL/min;柱温为25℃;紫外检测波长设定:Kyn和IS为360 nm,5-HT为220 nm,Trp为302 nm。3种物质的平均回收率为87%～113%;线性范围分别为3.97～400μmol/L(Trp),0.421～20.2μmol/L(Kyn),4.36～980 nmol/L(5-HT);检出限分别为0.134μmol/L(Trp),0.016 0μmol/L(Kyn),2.03 nmol/L(5-HT)。利用该方法对15例抑郁症患者和15例健康志愿者的血浆进行测定,结果表明两组间Trp的代谢存在显著的差异。

关键词：高效液相色谱法色氨酸犬尿氨酸 5-羟色胺血浆

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高效液相色谱-荧光法测定多囊卵巢综合征患者血浆中吲哚类物质

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色谱 2019年第12期37卷 1337-1342页

作者：韩润川班艳娜甄乾娜周莹张晓清丁敏重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院生殖健康与不孕症专科重庆400016 重庆医科大学附属第一医院内分泌科重庆400016

建立了一种同时测定血浆吲哚类物质(吲哚丙酸、吲哚乙酸、吲哚与3-甲基吲哚)的高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)。以液-液萃取法进行样本预处理,采用Shim-pack VP-ODS色谱柱(150 mm×4.6 mm, 4.6μm)分离,流动相为15 mmol/L磷酸二氢钠溶液... 详细信息

建立了一种同时测定血浆吲哚类物质(吲哚丙酸、吲哚乙酸、吲哚与3-甲基吲哚)的高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)。以液-液萃取法进行样本预处理,采用Shim-pack VP-ODS色谱柱(150 mm×4.6 mm, 4.6μm)分离,流动相为15 mmol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇(42∶58, v/v),柱温为30℃,流速为0.8 mL/min。吲哚丙酸、吲哚乙酸、吲哚与3-甲基吲哚在各自范围内线性关系良好。该方法的日内与日间相对标准偏差均小于6.31%,平均回收率为97.5%~107.0%。利用该方法对多囊卵巢综合征(PCOS)患者(n=61)与作为对照的正常育龄期女性(n=25)的血浆样本进行测定,结果发现PCOS患者血浆吲哚类物质显著高于对照组,其中吲哚是PCOS的危险因子和潜在的诊断标志物。该方法操作简便,灵敏度高,适用于临床检测和实验室研究。

关键词：高效液相色谱-荧光法多囊卵巢综合征吲哚类物质血浆

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柱前衍生高效液相色谱-荧光检测法测定血浆中同型半胱氨酸

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色谱 2012年第6期30卷 613-617页

作者：唐秀芳甄乾娜樊子勉冯成亚丁敏重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院内分泌内科重庆400016

建立了一种柱前衍生高效液相色谱-荧光检测法用于测定血浆中同型半胱氨酸(Hcy)。使用三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)为还原剂,N-(1-芘)马来酰亚胺(NPM)为衍生剂进行样品预处理,Agilent Hypersil C-18柱(250mm×4.0 mm,5μm)进行分离,流动相... 详细信息

建立了一种柱前衍生高效液相色谱-荧光检测法用于测定血浆中同型半胱氨酸(Hcy)。使用三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)为还原剂,N-(1-芘)马来酰亚胺(NPM)为衍生剂进行样品预处理,Agilent Hypersil C-18柱(250mm×4.0 mm,5μm)进行分离,流动相为15 mmo l/L醋酸钠-乙腈-混合酸(300 mL水中含1 mL醋酸和1 mL磷酸)混合溶液,采用梯度洗脱,荧光检测激发波长为330 nm,发射波长为380 nm。Hcy的回收率为(102.08±4.94)%。线性范围为0.500～100μmo l/L,检出限(以信噪比为3计)为0.016μmo l/L。日内与日间相对标准偏差均小于5%。利用该方法对7例高血压患者和7例健康志愿者的血浆进行了测定,结果表明两组间的Hcy含量存在显著的差异(p<0.05)。本方法简单、快速、灵敏、特异,适用于血浆Hcy的临床定量测定。

关键词：高效液相色谱荧光检测同型半胱氨酸血浆

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HPLC-ED检测血浆游离型甲氧基肾上腺素类物质诊断嗜铬细胞瘤及预后观察

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重庆医科大学学报 2014年第4期39卷 537-541页

作者：杨香春甄乾娜李启富丁敏重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院内分泌科重庆400016

目的:探讨高效液相色谱-电化学法(high performance liquid chromatography-electrochemical detection,HPLC-ED)检测血浆游离型甲氧基肾上腺素类物质(metanephrines,MNs)在嗜铬细胞瘤中诊断应用和预后观察。方法:采用HPLC-ED检测分析血浆游离型MNs嗜铬细胞瘤患者21例、健康对照组26例、原发性高血压组23例和非嗜铬细胞瘤性肾上腺占位性疾病组24例。结果:嗜铬细胞瘤患者血浆游离型MNs浓度明显高于其他3组(P<0.05);以甲氧基去甲肾上腺素(normetanephrine,NMN)150 ng/L和(或)甲氧基肾上腺素(metanephrine,MN)120 ng/L为切点,诊断敏感度、特异性分别为100%、89%。NMN、MN浓度与肿瘤体积密切相关(NMN:r=0.952,P=0.000;MN:r=0.510,P=0.018)。嗜铬细胞瘤患者在肿瘤切除后血MNs浓度迅速降低。结论:血浆游离型MNs是诊断嗜铬细胞瘤和预后观察的良好标志物。

关键词：高效液相色谱-电化学法甲氧基肾上腺素类物质嗜铬细胞瘤

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高效液相色谱法同时测定妊娠合并乙型肝炎患者血浆中的吲哚与3-甲基吲哚

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色谱 2017年第7期35卷 735-740页

作者：邓琳琳甄乾娜高洁莹金明超丁敏胥飚重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院内分泌科重庆400016 重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016

建立了一种高效液相色谱-荧光检测法用于同时测定血浆中的吲哚与3-甲基吲哚。样本经液液萃取法提取,采用Shim-Pack VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm,4.6μm),以15 mmol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇(40∶60,v/v)为流动相,甲奈酚为内标,荧光激发和发射... 详细信息

建立了一种高效液相色谱-荧光检测法用于同时测定血浆中的吲哚与3-甲基吲哚。样本经液液萃取法提取,采用Shim-Pack VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm,4.6μm),以15 mmol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇(40∶60,v/v)为流动相,甲奈酚为内标,荧光激发和发射波长分别为274 nm和340 nm。吲哚和3-甲基吲哚的线性范围分别为2.22~88.89μg/L和1.11~44.44μg/L;检出限分别为0.11μg/L(吲哚)和0.06μg/L(3-甲基吲哚);平均回收率为95.5%~112.3%,日内与日间相对标准偏差均小于6.8%。利用该方法对妊娠合并乙肝患者(n=29)和正常孕妇(n=46)的血浆进行了测定,结果表明妊娠合并乙肝患者血浆中吲哚和3-甲基吲哚水平均显著高于正常对照组,且与肝损伤指标转氨酶水平呈正相关。

关键词：高效液相色谱法吲哚 3-甲基吲哚妊娠合并乙肝肝功能

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HPLC—UV检测法同时测定血浆色氨酸和犬尿氨酸的方法学研究

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中华检验医学杂志 2011年第12期34卷 1057-1061页

作者：马莉张名均甄乾娜田刚丁敏重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室 400016 重庆市九龙坡区第一人民医院检验科

目的建立一种同时测定血浆中Trp和Kyn浓度的HPLC-UV检测法.方法以3-硝基酪氨酸（3-N-Tyr）为内标,采用Agilent Hypersil ODS色谱柱进行分离.流动相中醋酸缓冲液（ 15 mmol/L,pH 5.5）：乙腈为94∶ 6（v/v）；流速为0.8 ml/min；柱温... 详细信息

目的建立一种同时测定血浆中Trp和Kyn浓度的HPLC-UV检测法.方法以3-硝基酪氨酸（3-N-Tyr）为内标,采用Agilent Hypersil ODS色谱柱进行分离.流动相中醋酸缓冲液（ 15 mmol/L,pH 5.5）：乙腈为94∶ 6（v/v）；流速为0.8 ml/min；柱温：25℃；紫外程序化检测波长：0～4 min,360 nm；4～5 min,302 nm.选取2010年9-12月重庆市九龙坡区第一人民医院15例慢性乙型肝炎患者、8例慢性肾炎患者、10例血小板减少性紫癜患者以及15名健康体检者,用该方法检测其血浆Trp、Kyn水平并计算Kyn/Tp比值；各指标在上述4组间的比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK法.结果 Kyn与Trp的保留时间分别为2.9 min和4.4 min,线性范围分别为0.44～18.30μmol/L和3.67～470.00 μmol/L,检测限分别为0.014 μmol/L和0.122 μmol/***与Trp的日内变异均小于3％,日间变异均小于4％.平均回收率均在92.29％～104.40％之间.用该方法测定临床标本,健康对照组、慢性肾炎组、血小板减少性紫癜组以及慢性乙型肝炎组血浆中Kyn浓度分别为（1.59±0.28）、（2.73±0.56）、（2.69±0.44）和（1.54±0.48） μmol/L,Trp浓度分别为（59.8±10.0）、（46.1±11.7）、（58.5±8.0）和（41.4±13.1）μmol/L,Kyn/Trp比值分别为（0.027 4±0.007 5）、（0.061 6±0.0165）、（0.0467±0.0091）和（0.038 3±0.007 5）,差异均有统计学意义（F值分别为23.734,8.463和20.921,P均＜0.01）.结论所建立HPLC-UV检测法可同时测定血浆中Kyn和Trp浓度,适合于临床检测.

关键词：色氨酸犬尿氨酸色谱法,高压液相

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预测原发性醛固酮增多症术后血压的转归：Fisher判别模型

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中华医学杂志 2016年第42期96卷 3379-3383页

作者：何小群杨珊吴珏莅王德林任伟程庆丰甄乾娜曹友德李启富周波重庆医科大学附属第一医院内分泌科 400016 重庆医科大学附属第一医院泌尿外科 400016 重庆医科大学附属第一医院病理科 400016

目的探讨原发性醛固酮增多症（原醛）患者术后血压转归的预测因素并建立Fisher判别模型。方法2010年1月至2015年9月于重庆医科大学附属第一医院手术治疗的原醛患者83例，根据术后血压分为治愈组和未愈组。用Fisher逐步判别分析建模：并... 详细信息

目的探讨原发性醛固酮增多症（原醛）患者术后血压转归的预测因素并建立Fisher判别模型。方法2010年1月至2015年9月于重庆医科大学附属第一医院手术治疗的原醛患者83例，根据术后血压分为治愈组和未愈组。用Fisher逐步判别分析建模：并与醛固酮瘤缓解评分（ARS）、列线图模型进行比较。结果治愈组52例，未愈组31例。与治愈组相比，未愈组年龄、体质指数（BMI）更大，术前高血压病程更长，服用降压药种数更多，血清三酰甘油（TG）、糖尿病患病率、吸烟饮酒率更高，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。而未愈组估计肾小球滤过率（eGFR）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）明显低于治愈组，CT表现为典型结节的更少，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。以BMI、高血压药物种数、典型CT结节、eGFR、TG建立Fisher判别模型，受试者工作特征曲线下面积（AUC）为0．857（95％CI：0．764～0．951），最佳切点值0．1959，灵敏度和特异度分别为86．5％和83．9％。Fisher判别模型AUC较ARS和列线图模型高，后两者分别为0．733（95％CI：0．619—0．847）、0．735（95％CI：0．619～0．851）。结论Fisher判别模型可以较准确地预测原醛患者术后血压转归。

关键词：醛固酮增多症肾上腺切除术血压 Fisher判别分析预后

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血清胆汁酸代谢轮廓分析在妊娠肝内胆汁淤积症诊断中的应用

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重庆医科大学学报 2011年第5期36卷 586-588页

作者：田刚甄乾娜班艳娜唐秀芳丁敏重庆医科大学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的:探讨血清胆汁酸代谢轮廓分析在妊娠肝内胆汁淤积症(Intrahepaticcholestasisofpregnancy,ICP)诊断中的作用。方法:应用柱前衍生HPLC-荧光检测法测定ICP患者,乙肝孕妇和正常孕妇(各11例)血清胆汁酸谱(5种游离型和4种甘氨结合型),结... 详细信息

目的:探讨血清胆汁酸代谢轮廓分析在妊娠肝内胆汁淤积症(Intrahepaticcholestasisofpregnancy,ICP)诊断中的作用。方法:应用柱前衍生HPLC-荧光检测法测定ICP患者,乙肝孕妇和正常孕妇(各11例)血清胆汁酸谱(5种游离型和4种甘氨结合型),结合主成分分析法(Principal component analysis,PCA)和偏最小二乘判别分析法(Partial least-squares discriminantanalysis,PLS-DA)对血清胆汁酸谱进行分析。结果:血清胆汁酸代谢轮廓分析可区分ICP患者,乙肝孕妇和正常孕妇,其模型的正确诊断率和预测能力分别为97.0%和75.3%。结论:血清胆汁酸代谢轮廓分析有助于ICP的诊断和鉴别诊断。

关键词：胆汁酸代谢轮廓分析血清妊娠肝内胆汁淤积症乙型肝炎

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维持性血液透析患者血浆色氨酸及其代谢产物的分析

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激光杂志 2013年第1期34卷 92-93页

作者：甄乾娜丁敏张磊李正荣重庆医科大学附属第一医院内分泌内科重庆400016 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学检验科重庆400016 重庆医科大学肾内科重庆400016

目的:探讨维持血液透析的尿毒症患者血浆色氨酸(tryptophan,TRP)代谢状态,并评价血液透析对尿毒症患者TRP代谢的纠正效果。方法:用高效液相色谱法测定28例维持血液透析的尿毒症患者透析前后和35例正常对照血浆中TRP、犬尿氨酸(kynurenin... 详细信息

目的:探讨维持血液透析的尿毒症患者血浆色氨酸(tryptophan,TRP)代谢状态,并评价血液透析对尿毒症患者TRP代谢的纠正效果。方法:用高效液相色谱法测定28例维持血液透析的尿毒症患者透析前后和35例正常对照血浆中TRP、犬尿氨酸(kynurenine,KYN)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的浓度,并比较尿毒症患者透析前后及其与正常对照之间的差异。结果:尿毒症患者透析前血浆中KYN、5-HT的浓度和KYN/TRP比值均较正常升高,TRP较正常降低,且差异均具有统计学意义(P<0.01),透析后KYN、5-HT的水平以及KYN/TRP比值均有明显下降,但TRP水平仍较正常对照明显降低,5-HT的浓度以及KYN/TRP比值仍较正常对照明显增高(P<0.01)。结论:尿毒症患者存在明显的TRP代谢紊乱,透析对其有一定的纠正效果。

关键词：尿毒症血液透析色氨酸 5-羟色胺犬尿氨酸

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