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小鼠卵黄囊间充质干细胞培养及诱导成血管内皮细胞

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第33期11卷 6600-6605页

作者：韩小强瓦龙美首都医科大学组织学与胚胎学教研室北京市100069

目的:成体间充质干细胞发育分化接近终末状态后经过一段时间的体外培养,易衰老凋亡,而来自于早期胚胎的卵黄囊间充质干细胞具有更大的增殖潜能和可塑性。那么体外分离培养的小鼠卵黄囊间充质干细胞能否定向诱导分化为血管内皮细胞呢?方... 详细信息

目的:成体间充质干细胞发育分化接近终末状态后经过一段时间的体外培养,易衰老凋亡,而来自于早期胚胎的卵黄囊间充质干细胞具有更大的增殖潜能和可塑性。那么体外分离培养的小鼠卵黄囊间充质干细胞能否定向诱导分化为血管内皮细胞呢?方法:实验于2006-03/2007-01在首都医科大学组织学与胚胎学实验室完成。①实验方法:显微分离妊娠10d的ICR小鼠胚胎卵黄囊,经Ⅰ型胶原酶消化得到卵黄囊细胞,取贴壁细胞培养,于接近90%融合时按1∶2进行传代。②实验评估:取生长状态良好的第1代细胞,透射电镜观察细胞器超微结构,流式细胞仪检测其表面标志的表达;以血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子进行体外诱导,观察诱导后细胞形态及超微结构变化,免疫荧光法鉴定诱导后内皮细胞标志物的表达。结果:①体外分离培养可获得小鼠卵黄囊间充质干细胞,大多数呈梭形。透射电镜下卵黄囊间充质干细胞表面有微绒毛,胞浆中细胞器丰富,核大,形态不规则。流式细胞仪检测第1代卵黄囊间充质干细胞CD44、CD105均呈阳性,CD34亦有少量表达。②诱导后的细胞形态明显改变,透射电镜下可见内皮细胞特征性Weible-Palade小体,胞质中有大量吞饮小泡,同时内皮细胞标志物FLK1染色呈阳性。结论:体外可分离培养出小鼠卵黄囊间充质干细胞,并能够成功定向诱导分化为血管内皮细胞。

关键词：卵黄囊间充质干细胞超微结构内皮细胞

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肺泡Ⅱ型细胞的分离与纯化

解剖学杂志 1998年第2期21卷 150-153页

作者：瓦龙美华北煤炭医学院组织胚胎学教研室唐山063000

分离与纯化肺泡Ⅱ型细胞，可广泛用于肺的病理生理，生物化学和分子生物学的深入研究。本文介绍了经肺循环灌洗和支气管灌洗后，再用弹性蛋白酶消化ＩｇＧ纯化肺泡Ⅱ型细胞的方法，采用这种方法，可从一只体重，１００～１２０ｇ的健康... 详细信息

分离与纯化肺泡Ⅱ型细胞，可广泛用于肺的病理生理，生物化学和分子生物学的深入研究。本文介绍了经肺循环灌洗和支气管灌洗后，再用弹性蛋白酶消化ＩｇＧ纯化肺泡Ⅱ型细胞的方法，采用这种方法，可从一只体重，１００～１２０ｇ的健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠获得肺泡Ⅱ型细胞２０×１０＾６个，存活率为９０～９５％。

关键词：肺泡肺泡Ⅱ型细胞弹性蛋白酶分离纯化

小鼠胚胎卵黄囊与成体间充质干细胞的比较:生物学特性相似吗?

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第40期13卷 7817-7824页

作者：韩小强瓦龙美北京航天中心医院科研教育处北京市100049 首都医科大学组织学与胚胎学教研室北京市100069

背景:与成体间充质干细胞相比,来源于早期胚胎的卵黄囊间充质干细胞有更强的自我更新能力和可塑性,且在胚胎发育过程中可分化为成血管细胞和造血干细胞,启动胚胎血管发生和造血组织发育。目的:探讨小鼠卵黄囊间充质干细胞的生物学特征... 详细信息

背景:与成体间充质干细胞相比,来源于早期胚胎的卵黄囊间充质干细胞有更强的自我更新能力和可塑性,且在胚胎发育过程中可分化为成血管细胞和造血干细胞,启动胚胎血管发生和造血组织发育。目的:探讨小鼠卵黄囊间充质干细胞的生物学特征。设计、时间及地点:重复测量设计,细胞学体外观察,于2006-03/2007-01在首都医科大学组织学与胚胎学实验室完成。材料:妊娠10d的ICR小鼠80只,由首都医科大学动物部提供。方法:显微分离ICR小鼠胚胎卵黄囊,经Ⅰ型胶原酶消化得到卵黄囊细胞,取贴壁细胞培养,于接近90%融合时按1∶2进行传代。取生长状态良好的第1代细胞,以地塞米松、胰岛素定向诱导卵黄囊间充质干细胞向脂肪细胞方向分化;以血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子体外诱导其向血管内皮细胞方向分化。主要观察指标:相差显微镜下观察卵黄囊间充质干细胞形态;流式细胞仪检测卵黄囊间充质干细胞表面标志和细胞周期;钙钴法测定卵黄囊间充质干细胞碱性磷酸酶活性;细胞组织化学检测卵黄囊间充质干细胞化学变化;油红O检测诱导成脂能力;免疫荧光法鉴定诱导成血管内皮细胞能力。结果:体外培养获得的小鼠卵黄囊间充质干细胞大多数呈梭形;原代和第1代细胞均为CD44,CD105阳性,CD34也有少量表达;67.4%细胞处于G0/G1期,13.9%细胞处于S期;P1代细胞碱性磷酸酶染色及苏丹黑B反应呈阴性,PAS染色呈阳性;成脂诱导1周后,胞浆中有脂滴形成,经油红O染色脂滴为鲜红色;成血管内皮细胞诱导后,细胞由原来梭形或多角形渐变为圆形或椭圆形,且内皮细胞标志物FLK1染色呈阳性。结论:小鼠卵黄囊间充质干细胞的生物学特征与成体间充质干细胞相似。

关键词：卵黄囊间充质干细胞流式细胞术细胞组织化学分化小鼠

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小鼠卵黄囊间充质干细胞的培养及鉴别

解剖学报 2008年第1期39卷 111-116页

作者：韩小强瓦龙美首都医科大学组织学与胚胎学教研室北京100069

目的研究小鼠卵黄囊间充质干细胞(YS-MSCs)的分离、培养和鉴定。方法显微分离妊娠10d的小鼠胚胎卵黄囊,经0.1%的Ⅰ型胶原酶消化1h得到卵黄囊细胞,取贴壁细胞培养,并于接近汇合时进行传代培养,透射电镜下观察YS-MSCs的超微结构;流式细胞... 详细信息

目的研究小鼠卵黄囊间充质干细胞(YS-MSCs)的分离、培养和鉴定。方法显微分离妊娠10d的小鼠胚胎卵黄囊,经0.1%的Ⅰ型胶原酶消化1h得到卵黄囊细胞,取贴壁细胞培养,并于接近汇合时进行传代培养,透射电镜下观察YS-MSCs的超微结构;流式细胞仪检测YS-MSCs表面标志;钙钴法测定YS-MSCs碱性磷酸酶(AKP)活性;细胞组织化学检测YS-MSCs化学变化;地塞米松、胰岛素定向诱导YS-MSCs分化为脂肪细胞,油红O检测中性脂肪。结果体外可获得YS-MSCs,细胞大多数呈梭形;透射电镜下YS-MSCs表面有微绒毛,胞浆中有丰富的线粒体、粗面内质网、高尔基复合体;核大,形态不规则;流式细胞术分析YS-MSCs免疫表型显示,原代和第1代YS-MSCs均为CD44、CD105阳性,CD34也有少量表达;细胞化学YS-MSCs PAS-过碘酸雪夫染色阳性,苏丹黑-B(SB)及碱性磷酸酶(AKP)染色阴性;YS-MSCs经成脂诱导后,胞浆中有脂滴形成,经油红O染色脂滴呈鲜红色。结论小鼠YS-MSCs的生物学特性与成体间充质干细胞相似,且更为原始,提示其可作为组织工程的种子细胞来源。

关键词：卵黄囊间充质干细胞超微结构流式细胞术组织化学小鼠

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慢性低氧大鼠肺脂质沉积

中华结核和呼吸杂志 1998年第10期21卷 627-628页

作者：瓦龙美瓦龙德华北煤炭医学院生化教研室贵州财经学院

低氧是指氧对组织的供求比例失调，氧供量减少，不足以维持组织的代谢、功能和结构的需要［１］。由于供氧不足和氧利用障碍，均可引起机体缺氧。人和动物的慢性低氧血症，可见于低压性低氧，如高原性疾病，但更多的是因血液和心肺功能... 详细信息

低氧是指氧对组织的供求比例失调，氧供量减少，不足以维持组织的代谢、功能和结构的需要［１］。由于供氧不足和氧利用障碍，均可引起机体缺氧。人和动物的慢性低氧血症，可见于低压性低氧，如高原性疾病，但更多的是因血液和心肺功能障碍引起的常压低氧。大鼠是研究慢性...

关键词：低氧肺脂质沉积低氧性肺疾病诊断

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肺泡巨噬细胞多孔板盖片培养法

解剖学杂志 1991年第4期14卷 381-383,F003页

作者：瓦龙美遇铭河北华北煤炭医学院组胚教研室唐山063011

本文介绍了用96孔细胞培养板加入楔形小玻片培养肺泡巨噬细脆的新方法.采用这种培养方法,从每只大鼠的肺灌洗液中可获得25～75张肺泡巨噬细胞爬片样本,能广泛用于组化染色及光、电镜观察,可有效地对肺泡巨噬细胞的吞噬、粘附、融合、细... 详细信息

本文介绍了用96孔细胞培养板加入楔形小玻片培养肺泡巨噬细脆的新方法.采用这种培养方法,从每只大鼠的肺灌洗液中可获得25～75张肺泡巨噬细胞爬片样本,能广泛用于组化染色及光、电镜观察,可有效地对肺泡巨噬细胞的吞噬、粘附、融合、细胞毒等作用进行研究。极大地节省人力和物力.

关键词：肺泡巨噬细胞细胞培养

低氧条件下低氧诱导因子-1α及p53的表达

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解剖学报 2004年第3期35卷 311-315页

作者：宋海邦瓦龙美首都医科大学组织学与胚胎学教研室北京100054

目的　研究低氧时小鼠肺组织中低氧诱导因子 1α及凋亡相关基因p5 3蛋白表达的变化 ,探讨两者之间的关系。　方法　实验用雄性昆明小鼠 ,分为低氧组和对照组 ,低氧仓浓度分别为 10 %、7%、5 %。用免疫荧光组织化学技术及激光共聚焦扫描... 详细信息

目的　研究低氧时小鼠肺组织中低氧诱导因子 1α及凋亡相关基因p5 3蛋白表达的变化 ,探讨两者之间的关系。　方法　实验用雄性昆明小鼠 ,分为低氧组和对照组 ,低氧仓浓度分别为 10 %、7%、5 %。用免疫荧光组织化学技术及激光共聚焦扫描显微镜技术 ,检测小鼠在低氧条件下肺组织中HIF 1α及p5 3蛋白表达的变化。　结果　正常组小鼠肺组织HIF 1α无表达 ,p5 3少量表达 ;低氧组HIF 1α及p5 3蛋白表达均增加 ,并且随低氧时间的延长及低氧强度的增加而增强 ,P <0 0 5 ,HIF 1α及p5 3的表达呈显著正相关 (r=0 97)。　结论　低氧可诱导小鼠肺组织中HIF 1α的表达增强 ,同时肺组织p5 3蛋白的表达上调 ,两者呈显著正相关 ,说明HIF 1α有可能参与肺组织p5 3蛋白表达的调节 ,进而调节凋亡的发生。

关键词：低氧诱导因子-1α p53 激光共聚焦扫描显微镜肺组织小鼠

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低氧下小鼠肝细胞的细胞化学变化

解剖学报 2002年第3期33卷 302-305页

作者：瓦龙美高峰曾晓蓓首都医科大学组织学胚胎学教研室北京100054

目的　探讨低氧时小鼠肝细胞的细胞化学变化。　方法　实验用雄性小白鼠 45只 ,低氧组 36只 ,对照组 9只 ,低氧仓氧浓度为 10 %。用组织化学和图象分析方法 ,检测小鼠在低氧条件下肝细胞PAS ,乳酸脱氢酶(LDH) ,细胞色素氧化酶和镁离子... 详细信息

目的　探讨低氧时小鼠肝细胞的细胞化学变化。　方法　实验用雄性小白鼠 45只 ,低氧组 36只 ,对照组 9只 ,低氧仓氧浓度为 10 %。用组织化学和图象分析方法 ,检测小鼠在低氧条件下肝细胞PAS ,乳酸脱氢酶(LDH) ,细胞色素氧化酶和镁离子依赖性ATPase活性。　结果　低氧组乳酸脱氢酶活性随低氧时间延长而升高 ;肝细胞色素氧化酶活性随低氧时间延长而降低。　结论　 10 %低氧浓度可造成小白鼠肝细胞损伤 ,出现明显的细胞化学改变。

关键词：低氧肝细胞细胞化学

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慢性低氧小鼠肺组织糖蛋白的变化

解剖学杂志 2002年第5期25卷 442-446页

作者：瓦龙美翁瑞曾晓蓓首都医科大学组织学与胚胎学教研室北京100054

目的 :研究在慢性常压低氧下的小鼠肺组织多糖、粘蛋白的适应性变化。方法 :低氧 (1 0 % )第 1、3、5、7天分别取左肺中部组织作冰冻切片 ,以高碘酸Schiff反应 (PAS)显示糖原及粘蛋白并进行光镜观察。结果 :与动脉平滑肌比较 ,低氧小鼠... 详细信息

目的 :研究在慢性常压低氧下的小鼠肺组织多糖、粘蛋白的适应性变化。方法 :低氧 (1 0 % )第 1、3、5、7天分别取左肺中部组织作冰冻切片 ,以高碘酸Schiff反应 (PAS)显示糖原及粘蛋白并进行光镜观察。结果 :与动脉平滑肌比较 ,低氧小鼠支气管平滑肌糖原合成一过性增强 ;静脉内皮细胞糖代谢的敏感性显著高于动脉 ;低氧能刺激支气管粘膜分泌细胞分泌粘蛋白 ,反应随低氧作用时间而变化。结论 :小鼠肺组织糖原、粘蛋白代谢在慢性低氧下产生适应性变化。

关键词：慢性低氧小鼠肺组织糖蛋白高磺酸Schiff反应杯状细胞