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一例兔巴氏杆菌病的诊断

中国畜牧兽医 2010年第7期37卷 205-206页

作者：郭慧霞徐蕙王永锋琚春梅华南农业大学兽医学院广州510642

2009年11月,华南农业大学兽医学院某教研室饲养的用于制备高免血清的试验兔发生死亡,通过对病死兔进行病理解剖、组织涂片检查、细菌分离培养、生化试验和动物回归试验,确诊为兔巴氏杆菌病。

关键词：兔巴氏杆菌病诊断

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猪Ⅱ型圆环病毒全基因组的克隆及感染性鉴定

微生物学报 2004年第2期44卷 172-176页

作者：郗鑫陈焕春陈华平曹胜波琚春梅华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070

设计合成一对扩增猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )全基因组的特异性引物 ,从 3份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征 (PMWS)的死亡仔猪病料中 ,PCR扩增和克隆了 3株PCV 2全基因组序列。将所测序列与已公布的PCV毒株序列进行同源性比较 ,并绘制系统... 详细信息

设计合成一对扩增猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )全基因组的特异性引物 ,从 3份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征 (PMWS)的死亡仔猪病料中 ,PCR扩增和克隆了 3株PCV 2全基因组序列。将所测序列与已公布的PCV毒株序列进行同源性比较 ,并绘制系统发育进化树。结果显示 ,所测毒株间的核苷酸同源性为 95 7%～ 99 4 % ,与其它毒株的同源性较高 ,达 95 1%以上 ;ORF1的核苷酸同源性高达 97 8%以上 ,氨基酸同源性大于 98% ;ORF2的核苷酸同源性较低 ,为 90 %～ 98%不等 ,推导的氨基酸序列同源性介于 87%～ 99 1%。进化树分析表明各分离毒株在进化上存在地域上的相关性。将克隆到的PCV 2基因组环化后 ,脂质体介导转染PK 15细胞 ,盲传 3代。间接免疫荧光检测表明 ,克隆到的基因组具有感染性。

关键词：猪Ⅱ型圆环病毒基因组克隆感染性鉴定 PCV-2 断奶后仔猪多系统衰弱综合征 PMWS

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猪圆环病毒复制与转录模式研究进展

动物医学进展 2007年第4期28卷 68-72页

作者：琚春梅华南农业大学兽医学院广东广州510642

猪圆环病毒(PCV)是一种单股、环状DNA病毒,有两种血清型,其中PCV-2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的重要病原,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。文章主要从PCV-1和PCV-2的基因组结构、复制起始区的结构与功能、复制相关蛋白的结构与... 详细信息

猪圆环病毒(PCV)是一种单股、环状DNA病毒,有两种血清型,其中PCV-2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的重要病原,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。文章主要从PCV-1和PCV-2的基因组结构、复制起始区的结构与功能、复制相关蛋白的结构与功能、转录图谱、各转录物的剪接方式及主要转录物的转录效率等方面进行了综述,同时也对二者的复制与转录模式的异同点进行了比较。这些结果对PCV-1和PCV-2毒力差异的分子机制研究具有一定的借鉴意义,同时可为抗PCV药物的研发提供一定的理论依据。

关键词：猪圆环病毒基因组结构复制模式转录模式

应用在大肠杆菌中表达的猪2型圆环病毒ORF2蛋白建立一种ELISA诊断方法

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畜牧兽医学报 2004年第6期35卷 689-693页

作者：琚春梅陈焕春刘正飞曹胜波何启盖华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070

根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820),设计1对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板,扩增出含ORF2全基因的片段(709bp),回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定。重组质粒经... 详细信息

根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820),设计1对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板,扩增出含ORF2全基因的片段(709bp),回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定。重组质粒经Bal 和Sal 双酶切,回收ORF2基因,将其插入pGEX-KG的Sma 和Sal 位点间,构建原核表达质粒pGEXORF2,阳性重组质粒转化***21(DE3),进行原核表达。用此表达产物包被酶标板,建立ELISA诊断方法,并对临床676份送检血清进行了检测,结果表明其总阳性率为62.7%(424/676),仔猪阳性率为38.9%(74/190),肥猪阳性率为63.2%(84/133),母猪阳性率为74.6%(249/334),公猪阳性率为89.5%(17/19)。

关键词：阳性率重组质粒诊断方法 ELISA 表达蛋白基因 ORF2 圆环病毒 PCV2

苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红竞争ELISA检测方法的初步建立

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食品科学 2008年第8期29卷 523-525页

作者：唐勇琚春梅魏钟杰向军俭暨南大学抗体工程研究中心广东广州510632 华南农业大学动物医学院广东广州510642 广州市江森生物科技有限公司广东广州510632

以4-氨基苯甲酸重氮化后与2-萘酚反应,合成苏丹红Ⅰ号的衍生物(CSD Ⅰ),以活性脂法将CSD Ⅰ与蛋白载体偶联,制备CSD Ⅰ-BSA免疫抗原与CSD Ⅰ-OVA检测抗原。以CSD Ⅰ-BSA免疫Balb/c小鼠,适当免疫后取脾细胞与SP2/0融合,筛得抗CSD Ⅰ的单... 详细信息

以4-氨基苯甲酸重氮化后与2-萘酚反应,合成苏丹红Ⅰ号的衍生物(CSD Ⅰ),以活性脂法将CSD Ⅰ与蛋白载体偶联,制备CSD Ⅰ-BSA免疫抗原与CSD Ⅰ-OVA检测抗原。以CSD Ⅰ-BSA免疫Balb/c小鼠,适当免疫后取脾细胞与SP2/0融合,筛得抗CSD Ⅰ的单克隆抗体细胞株5H3。以该细胞株生产抗体与CSD Ⅰ-OVA建立CSD Ⅰ的间接竞争ELISA检测方法,该方法对苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红的灵敏度约为0.1ng/ml,IC50分别为1.03、1.13、0.89ng/ml,与其他染料交叉反应率低。该ELISA检测方法灵敏、特异,可用于苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红的快速检测。

关键词：苏丹红抗体检测方法

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《动物传染病学》教学改革的必要性及设想

家畜生态学报 2014年第7期35卷 91-93页

作者：樊惠英郭惠霞琚春梅华南农业大学兽医学院广东广州510642

《动物传染病学》是研究动物传染病发生、发展规律,以及如何预防和治疗传染病的科学,是动物医学本科专业教学中的一门核心课程。课程的教学质量将与我国兽医人才队伍建设和未来动物传染病防控的水平直接相关。作为高等教育学院,其本职... 详细信息

《动物传染病学》是研究动物传染病发生、发展规律,以及如何预防和治疗传染病的科学,是动物医学本科专业教学中的一门核心课程。课程的教学质量将与我国兽医人才队伍建设和未来动物传染病防控的水平直接相关。作为高等教育学院,其本职工作就是在了解当前形势的基础上,培养适应社会需要的人才。论文根据当前动物传染病出现的新特点,提出在新形势下进行传染病教学改革的必要性,并就动物传染病学教学中存在的问题、动物传染病学教学改革的创新以及探索等方面进行了阐述。

关键词：动物传染病学教学改革探索

猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI缺失突变株的构建及生物学特性研究

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华南农业大学学报 2018年第2期39卷 9-15页

作者：潘慧李艳华向柯宇唐栋程珍珠罗永文琚春梅华南农业大学兽医学院/广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广东广州510642

【目的】为研制针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的疫苗提供候选毒株。【方法】构建针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的gE/gI缺失重组转移质粒pMD-LA-RA及携带EGFP标记基因的重组转移质粒pMD-LA-EGFP-RA,将pMDLA-EGFP-RA与伪狂犬病病毒流行毒株PRV... 详细信息

【目的】为研制针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的疫苗提供候选毒株。【方法】构建针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的gE/gI缺失重组转移质粒pMD-LA-RA及携带EGFP标记基因的重组转移质粒pMD-LA-EGFP-RA,将pMDLA-EGFP-RA与伪狂犬病病毒流行毒株PRV AH进行同源重组,利用EGFP为筛选标记,获得携带EGFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV AH gE~–/gI~–/EGFP^+,以此毒株与pMD-LA-RA进行第2次同源重组,筛选去除EGFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV AH gE~–/gI~–,并通过生长曲线、易感细胞连续传代和动物免疫评价其增殖能力、遗传稳定性及免疫原性。【结果】通过2次同源重组,结合荧光观察、空斑纯化和PCR检测,成功获得了PRV AH gE~–/gI~–,经PCR鉴定、荧光观察及测序鉴定,证实该毒株g E和g I基因被成功缺失,且不携带EGFP标记基因。生物学特性研究结果表明,该毒株增殖能力与亲本毒株相当,遗传稳定性及免疫原性良好。【结论】采用同源重组技术成功构建了免疫原性良好的猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI基因缺失突变株,为研制针对流行毒株的基因缺失疫苗奠定了一定的基础。

关键词：猪伪狂犬病病毒流行毒株基因缺失同源重组生物学特性

油茶废弃物脱脂茶粕中皂苷和黄酮纳米囊的制备与应用研究

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中国动物保健 2017年第11期19卷 70-72页

作者：戴述诚叶勇琚春梅广东省天宝生物制药有限公司研发中心广州510650 华南理工大学化学与化工学院制药工程系广州510641 华南农业大学兽医学院广州510642

本文以油茶加工废弃物脱脂茶粕为原料,用复合酶(纤维素酶/果胶酶)分解,提取皂苷和黄酮,经碱溶液沉淀法获得纯化的皂苷和黄酮,再通过微囊包被、高速制乳(6,000~10,000r/min乳化法)和微孔(0.10~0.20μm)滤膜法,进一步制备稳定性更好的皂... 详细信息

本文以油茶加工废弃物脱脂茶粕为原料,用复合酶(纤维素酶/果胶酶)分解,提取皂苷和黄酮,经碱溶液沉淀法获得纯化的皂苷和黄酮,再通过微囊包被、高速制乳(6,000~10,000r/min乳化法)和微孔(0.10~0.20μm)滤膜法,进一步制备稳定性更好的皂苷和黄酮纳米囊,并对其进行了表征。产品制备过程不使用有机溶剂,改善了动物适口性,将其用作饲料添加剂替代抗生素具有广阔的应用前景。

关键词：油茶脱脂茶粕皂苷黄酮复合酶微囊包被添加剂

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油茶废弃物中纳米脂肪酸钙的制备与应用研究

中国动物保健 2017年第9期19卷 86-88页

作者：戴述诚叶勇琚春梅广东省天宝生物制药有限公司研发中心广东广州510650 华南理工大学化学与化工学院制药工程系广东广州510641 华南农业大学兽医学院广东广州510642

本文以油茶加工废弃物油脚、皂脚为原料,经酶法提取和分子蒸馏分离脂肪酸,进而制成脂肪酸钙,再结合沉淀法、高速制乳(6,000-10,000r/min乳化法)和微孔(0.20~0.25μm)滤膜法,制备稳定性更好的脂肪酸钙纳米粒,并对其进行了表征,也简述了... 详细信息

本文以油茶加工废弃物油脚、皂脚为原料,经酶法提取和分子蒸馏分离脂肪酸,进而制成脂肪酸钙,再结合沉淀法、高速制乳(6,000-10,000r/min乳化法)和微孔(0.20~0.25μm)滤膜法,制备稳定性更好的脂肪酸钙纳米粒,并对其进行了表征,也简述了其用途与作饲料添加剂的应用前景。

关键词：油茶油脚皂脚脂肪酸(钙) 纳米粒添加剂脂肪酶