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副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

福建省猪源多黏菌素耐药基因mcr-1阳性细菌的耐药特性及分布特征

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：车勇良陈少莺周伦江王隆柏魏宏庄向生福建省农科院畜牧兽医研究所

从福建省某猪场送检的疑似多发浆膜炎的病料中分离到1株细菌,进行了细菌形态学观察、培养特性和生化特性鉴定,根据副猪嗜血杆菌的16SrRNA序列设计一对引物进行PCR扩增,得到了一条大小为821bp的特异条带,经克隆测序和同源性比较,确定为... 详细信息

从福建省某猪场送检的疑似多发浆膜炎的病料中分离到1株细菌,进行了细菌形态学观察、培养特性和生化特性鉴定,根据副猪嗜血杆菌的16SrRNA序列设计一对引物进行PCR扩增,得到了一条大小为821bp的特异条带,经克隆测序和同源性比较,确定为副猪嗜血杆菌。

关键词：副猪嗜血杆菌分离鉴定

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2022年第12期50卷 1-8,17页

作者：车勇良陈秋勇陈如敬吴学敏王隆柏刘玉涛周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

【目的】了解福建省猪源mcr-1基因阳性细菌的流行性、耐药特性及分布特征。【方法】从福建省7个地市的21个猪场采集313份粪便样本,应用PCR方法筛选、分离和鉴定mcr-1基因阳性细菌;采用K-B琼脂扩散试验进行药敏检测,分析mcr-1基因阳性细... 详细信息

【目的】了解福建省猪源mcr-1基因阳性细菌的流行性、耐药特性及分布特征。【方法】从福建省7个地市的21个猪场采集313份粪便样本,应用PCR方法筛选、分离和鉴定mcr-1基因阳性细菌;采用K-B琼脂扩散试验进行药敏检测,分析mcr-1基因阳性细菌的耐药性,并使用PCR方法分析其耐药表型;进一步采用多位点序列分型(MLST)方法鉴定mcr-1基因阳性大肠杆菌的类型,使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析方法对mcr-1阳性大肠杆菌进行聚类分析,探明其分布特征和亲缘关系。【结果】从313份猪粪便中共分离获得43株mcr-1基因阳性细菌,其中大肠杆菌39株。耐药性结果显示,分离菌株对磺胺甲基异恶唑、氟苯尼考、链霉素、强力霉素、恩诺沙星、新霉素、阿莫西林、头孢噻肟、林可-壮观、亚胺培南、呋喃妥因、利奈唑胺和替加环素的耐药率分别为90.1%,83.7%,74.4%,67.4%,67.4%,58.1%,53.5%,39.5%,34.9%,11.6%,4.6%,0和0。磺胺类耐药基因中的sul1、sul2和sul3基因检出率较高,分别达到81.4%,90.7%和74.4%;喹诺酮类耐药基因中仅有qnrS和aac(6′)-Ib-cr被检出,其检出率分别为51.2%和30.2%;氯霉素类耐药基因中Cat2和cmlA基因的检出率较高,分别达到86.0%和74.4%;氟苯尼考耐药基因(floR)的检出率为83.7%;金属β-内酰胺酶耐药基因(NDM-1)的检出率为23.2%;多药耐药基因(cfr)的检出率为7.0%;而替加环素耐药基因(tet(X))未被检出。39株mcr-1基因阳性大肠杆菌除了4株不能分型外,其他35株共分为19个ST型,具有高度多样性,其中ST10为优势型,共有9株菌株。PFGE图谱显示,39株mcr-1基因阳性大肠杆菌共获得30种PFGE谱型,具有多态性特征,分为6组克隆群。【结论】福建猪源mcr-1基因阳性细菌主要为大肠杆菌,少部分为肠杆菌科其他菌株,且分离菌株具有明显的多重耐药性;mcr-1基因阳性大肠杆菌在地域分布上具有多态性和高度多样性特点。

关键词：多黏菌素耐药性耐药基因猪源mcr-1基因阳性菌福建省

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猪流行性腹泻病毒荧光RT-RAA检测方法的建立及初步应用

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福建农业学报 2024年第10期39卷 1146-1151页

作者：侯恩慧陈秋勇吴学敏丘镜莉吴仁杰周伦江刘玉涛马玉芳王隆柏福建农林大学动物科学学院/福建省兽医中药与动物保健重点实验室福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

【目的】建立一种快捷、灵敏、简便检测猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）的RT-RAA检测方法，以提高猪流行性腹泻病毒临床检测效率。【方法】针对PEDV S基因片段保守区设计引物和探针，构建标准质粒PEDV-S，通... 详细信息

【目的】建立一种快捷、灵敏、简便检测猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）的RT-RAA检测方法，以提高猪流行性腹泻病毒临床检测效率。【方法】针对PEDV S基因片段保守区设计引物和探针，构建标准质粒PEDV-S，通过特异性、敏感性、重复性测定及条件优化，建立检测PEDV重组酶介导链置换核酸扩增荧光法（RT-RAA）。【结果】在42℃恒温作用20 min的条件下，建立的检测方法对检测猪传染性胃肠炎病毒（porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV）、猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）、伪狂犬病病毒（porcine pseudorabies virus,PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）和猪轮状病毒（porcine rotavirus,PoRV）等猪源病毒均为阴性，猪流行性腹泻病毒（PEDV）为阳性；最低检出限为4.43×10～2拷贝·μL-1的标准质粒；重复性结果显示，相同浓度标准质粒的差异性很小；利用建立的RT-RAA方法检测40份猪病毒样本，阳性率为7.5%（3/40），与实时荧光定量PCR检测结果相同。【结论】本研究建立的PEDV RT-RAA检测方法具有快速简便、耗时短、特异性高、灵敏度强和重复性好等特点，适用于对PEDV的快速诊断。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白 RT-RAA

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猪伪狂犬病毒分离和鉴定

中国畜牧兽医 2005年第5期32卷 62-63页

作者：魏宏林锋强张德明周伦江王隆柏庄向生福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013

从病猪肾脏分离到1株病毒。该病毒接种Balb/c小鼠出现神经症状,死亡率为5 0 % ,接种Vero出现拉网病变;伪狂犬病毒( pseudorabies virus,PRV)阳性血清能特异中和该分离毒;根据基因库( genebank)的PRV g D基因( AY16 96 94 )设计的引物能... 详细信息

从病猪肾脏分离到1株病毒。该病毒接种Balb/c小鼠出现神经症状,死亡率为5 0 % ,接种Vero出现拉网病变;伪狂犬病毒( pseudorabies virus,PRV)阳性血清能特异中和该分离毒;根据基因库( genebank)的PRV g D基因( AY16 96 94 )设计的引物能扩增出特异性片段。以上结果证实该病毒为伪狂犬病毒。

关键词：猪伪狂犬病毒分离鉴定接种试验微量中和试验 PCR

变异猪流行性腹泻病毒M和N双基因融合真核表达及其活性鉴定

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南方农业学报 2020年第12期51卷 3083-3089页

作者：王隆柏陈秋勇吴学敏陈如敬车勇良周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013

【目的】体外表达变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M-N双基因融合蛋白并明确其生物活性,为开展PEDV新型疫苗及其诊断技术研究提供更多的候选蛋白。【方法】将变异PEDV的M基因克隆至pEASY-Blunt M2(pM2)真核表达载体构建pM2-M真核质粒,通过... 详细信息

【目的】体外表达变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M-N双基因融合蛋白并明确其生物活性,为开展PEDV新型疫苗及其诊断技术研究提供更多的候选蛋白。【方法】将变异PEDV的M基因克隆至pEASY-Blunt M2(pM2)真核表达载体构建pM2-M真核质粒,通过同源重组将N基因克隆至M2-M基因片段构建pM2-M-N双基因融合重组质粒,然后转染293T细胞表达出M-N双基因融合蛋白。通过Western blotting、ELISA及免疫BLAB/c小鼠试验鉴定表达融合蛋白的生物学活性。【结果】扩增获得的M基因、N基因片段大小分别为678和1359 bp,且与原序列的相似性均达100.0%。将M基因和N基因并连接至pM2真核表达载体成功构建获得pM2-M-N双基因融合重组质粒,M-N双基因片段大小为2004 bp,且与原序列的相似性为99.3%。以pM2-M-N双基因融合重组质粒转染239T细胞,表达出大小约75 kD且具有免疫活性的M-N双基因融合蛋白,纯化的M-N双基因融合蛋白能与PEDV阳性血清反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒均无交叉反应;以其免疫BLAB/c小鼠能诱导产生特异性抗体。【结论】通过pM2真核表达载体能构建获得变异PEDV毒株的pM2-M-N融合双基因重组质粒,转染293T细胞后可表达出具有良好免疫活性的M-N双基因融合蛋白,为后期开展变异PEDV基因工程疫苗及其诊断技术研究提供更多的候选蛋白。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) M基因 N基因双基因融合蛋白

伪狂犬病病毒变异株gC抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

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畜牧兽医学报 2022年第6期53卷 2029-2034页

作者：吴学敏陈如敬陈秋勇车勇良严山刘玉涛周伦江王隆柏福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

本研究旨在建立变异伪狂犬病病毒FJ-2012株gC蛋白抗体间接ELISA检测方法,掌握不同猪场猪群的gC抗体水平情况。将FJ-2012株gC基因连接至pCzn1载体,转染至Arctic express(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blot验证,... 详细信息

本研究旨在建立变异伪狂犬病病毒FJ-2012株gC蛋白抗体间接ELISA检测方法,掌握不同猪场猪群的gC抗体水平情况。将FJ-2012株gC基因连接至pCzn1载体,转染至Arctic express(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blot验证,通过矩阵法试验、临界值的确定、特异性试验、重复性和敏感性试验,建立PRV-gC抗体间接ELISA检测方法,并对源于不同猪场的280份血清进行PRV-gC抗体检测。结果表明,成功表达获得FJ-2012株pCzn1-gC重组蛋白;建立的间接ELISA方法的最佳抗原包被浓度为10μg·mL^(-1)和最佳样品血清稀释比例为1∶50,阴性和阳性判定的OD_(650 nm)临界值为0.406~0.438,介于之间的判定为可疑;临床检测结果显示,120份盲样猪血清PRV-gC抗体阳性率为91.67%、PRV-gB抗体阳性率为95.00%,两种抗体检测结果的整体符合率为95.83%;PR不稳定的猪场血样PRV-gC抗体阳性率为96.25%(77/80),而PRV已净化的种猪场血样PRV-gC抗体阳性率为78.75%(63/80)。因此,建立的PRV变异株gC抗体间接ELISA检测方法为临床猪血清抗体检测提供了特异、灵敏和稳定的技术,也为开展变异PRV血清学调查奠定基础。

关键词：伪狂犬病病毒 gC蛋白酶联免疫吸附试验

变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立与初步应用

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中国兽医学报 2010年第8期30卷 1023-1027页

作者：周伦江王隆柏方桂友魏宏车勇良陈如敬庄向生福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

参照GenBank的变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与普通PRRSV的Nsp2段基因序列,设计并合成1对引物和TaqMan探针。通过对反应条件优化,标准质粒构建,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR诊断变异型PRRSV方法。结果表明,该方法具有特异性强,敏... 详细信息

参照GenBank的变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与普通PRRSV的Nsp2段基因序列,设计并合成1对引物和TaqMan探针。通过对反应条件优化,标准质粒构建,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR诊断变异型PRRSV方法。结果表明,该方法具有特异性强,敏感性高等特点,能够检测出264个拷贝数的标准质粒品,0.562 3TICD50的病毒量,比RT-PCR敏感10倍。对22份病料样品进行检测,结果有8份为阳性,阳性率为36.4%。由于该方法具有定量、快速、准确、敏感等优点,适用于对猪群感染变异型猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)早、中、晚期的诊断,对有效诊断及防治高致病性PRRS的发生起到重要作用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 TaqMan 荧光定量PCR

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福建省猪流感流行病学调查与分析

养猪 2006年第5期 47-48页

作者：王隆柏魏宏陈少莺车勇良周伦江庄向生金颜辉福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福建省畜牧兽医总站福州350003

猪流感(Swine Influenza,SI)是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起猪的一种急性、高度接触传染性呼吸道疾病.该病自1918年首次在美国报道以来,世界各地均有发生,20世纪70年代后传到我国大陆,并在亚洲广泛流行.由于猪是'人-猪-禽'流... 详细信息

猪流感(Swine Influenza,SI)是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起猪的一种急性、高度接触传染性呼吸道疾病.该病自1918年首次在美国报道以来,世界各地均有发生,20世纪70年代后传到我国大陆,并在亚洲广泛流行.由于猪是'人-猪-禽'流感病毒重组产生新亚型的'混合器',使得猪在流感的发生和传播中具有重要的公共卫生学意义.

关键词：猪流感流行病学调查福建省 A型流感病毒传染性呼吸道疾病 20世纪70年代正粘病毒科公共卫生学

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福州某猪场猪弓形虫病的诊治

福建畜牧兽医 2004年第Z1期26卷 20-21页

作者：王隆柏熊杰伟黎贵祥张步伍魏宏庄向生福建省农科院畜牧兽医研究所 350013 福建省军区后勤部 350001

2003年11月份,福州某猪场发生27％的妊娠母猪流产,40％的小猪出现高热稽留,弓背不吃,呼吸困难,甚至死亡等症状(死亡率为7％),通过流行病学,临床症状,病理剖检,实验室检验等综合诊断,确诊为弓形虫病。经治疗,控制了疫情。

关键词：猪弓形虫病诊治