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猪圆环病毒Ⅱ型单克隆抗体的制备及应用

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第3期38卷 12-16,22页

作者：车勇良周伦江王隆柏魏宏陈少莺陈如敬庄向生福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

【目的】制备猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体,并对其进行鉴定和应用。【方法】以超离纯化的猪圆环病毒Ⅱ型作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经间接ELISA筛选获得了2株分泌PCV2-Cap蛋白... 详细信息

【目的】制备猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体,并对其进行鉴定和应用。【方法】以超离纯化的猪圆环病毒Ⅱ型作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经间接ELISA筛选获得了2株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为8-60和10-48,对其生物学特性进行鉴定,并将其作为一抗,建立了间接免疫荧光诊断方法。【结果】8-60和10-48的染色体数平均为98～105对,间接ELISA检测其细胞培养上清液效价分别为1∶16和1∶32,小鼠腹水效价分别为1∶3×212和1∶3×213,抗体的免疫球蛋白亚型均为IgM。间接免疫荧光结果显示,8-60和10-48能与PCV2发生反应;利用这种特性,建立了能诊断PCV2病原的间接免疫荧光诊断方法,实际应用结果表明,其诊断结果与PCR方法诊断结果基本一致,阳性和阴性的符合率分别为93.75%和100%。【结论】以制备的猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体为一抗,建立了间接免疫荧光诊断方法。

关键词：猪圆环病毒Ⅱ型单克隆抗体 Cap蛋白 ELISA方法间接免疫荧光

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规模化猪场伪狂犬病病原净化的几点建议

畜牧与兽医 2013年第12期45卷 119-120页

作者：吴学敏陈如敬林裕胜车勇良王隆柏严山刘玉涛周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病毒（pseudorabiesvirus，PRV）引起的一种高度接触性传染病，可感染多种家畜和野生动物，以发热、奇痒（猪除外）、脑脊髓炎、繁殖障碍为主要症状。猪是PRV的天然宿主，该病毒具有高度隐性感... 详细信息

伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病毒（pseudorabiesvirus，PRV）引起的一种高度接触性传染病，可感染多种家畜和野生动物，以发热、奇痒（猪除外）、脑脊髓炎、繁殖障碍为主要症状。猪是PRV的天然宿主，该病毒具有高度隐性感染的特点，可引起持续性感染，特别是耐过的母猪常呈潜伏感染，长期带毒，对猪危害性大。本文主要从疫苗免疫、病原和抗体监测方面，阐述了规模化猪场净化猪伪狂犬疾病应注意的关键细节。

关键词：规模化猪场伪狂犬病毒猪场净化病原接触性传染病隐性感染持续性感染野生动物

猪繁殖与呼吸综合征病毒福州株ORF2-7基因结构分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒福州株ORF2-7基因结构分析

变异猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR检测方法的建立

第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：魏宏林锋强庄向生周伦江王隆柏福建省农业科学院畜牧兽医研究所

用RT-PCR方法分段扩增出PRRSV FZ株的5条cDNA片段,分别克隆到pMD-18T载体并进行测序按顺序将这些序列进行拼接得到Fz株ORF2-7编码框序列,测序结果该序列长度为3272bp,与BJ-4株、VR-2332株、CH-1a株和HB-1株核苷酸同源性分别为99.1%、98... 详细信息

用RT-PCR方法分段扩增出PRRSV FZ株的5条cDNA片段,分别克隆到pMD-18T载体并进行测序按顺序将这些序列进行拼接得到Fz株ORF2-7编码框序列,测序结果该序列长度为3272bp,与BJ-4株、VR-2332株、CH-1a株和HB-1株核苷酸同源性分别为99.1%、98.9%、93.2%和93.2%。

关键词： PRRSV ORF2-7基因克隆序列分析

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国农学通报 2010年第5期26卷 1-4页

作者：王隆柏庄向生车勇良魏宏陈如敬周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

根据GenBank已发表及笔者所在研究室分离鉴定的变异猪繁殖与呼吸综合征病毒的NSP2基因序列,设计并合成了一对引物,建立了一种鉴别PRRSV的RT-PCR检测方法。结果表明:该方法扩增变异PRRSV基因组时可获得217bp的片段,扩增普通PRRSV时则获得... 详细信息

根据GenBank已发表及笔者所在研究室分离鉴定的变异猪繁殖与呼吸综合征病毒的NSP2基因序列,设计并合成了一对引物,建立了一种鉴别PRRSV的RT-PCR检测方法。结果表明:该方法扩增变异PRRSV基因组时可获得217bp的片段,扩增普通PRRSV时则获得307bp的片段,同条件扩增猪瘟病毒(CSFV)、圆环病毒Ⅱ型(PCV2)、伪狂犬病病毒(PRV)均为阴性;该体系可检测到2.6pg的PRRS病毒核酸,具有较高敏感性。对2007—2008年送检的40份临床样品进行检测,结果检出12份为变异PRRSV,其阳性率为30.0%。研究结果表明,建立的RT-PCR鉴别变异PRRSV方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等特点,适用于对猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴别诊断。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 RT-PCR 建立

福建省部分规模猪场猪伪狂犬病野毒抗体检测及后备母猪的初步净化

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福建畜牧兽医 2011年第3期33卷 74-77页

作者：曾新斌王隆柏陈小权陈如敬修金生福建农林大学动物科学学院福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013

对福建省从9个不同规模猪场(A-I)收集的1083份血样,应用Herdchek IDEXXPRV gE-ELISA抗体检测试剂盒进行伪狂犬病野毒抗体检测,结果9个规模猪场感染伪狂犬病野毒的平均阳性率为19.39%,其中A、G、I猪场的PRV野毒感染率最低。对A、G、I猪... 详细信息

对福建省从9个不同规模猪场(A-I)收集的1083份血样,应用Herdchek IDEXXPRV gE-ELISA抗体检测试剂盒进行伪狂犬病野毒抗体检测,结果9个规模猪场感染伪狂犬病野毒的平均阳性率为19.39%,其中A、G、I猪场的PRV野毒感染率最低。对A、G、I猪场所有的后备种猪进行PRVgE抗体检测,其PRV野毒抗体阴性率分别为98.79%、95.88%、98.56%,淘汰阳性猪群;间隔4个月后,再从该3个猪场共抽检178份后备母猪测定其gE抗体,结果伪狂犬病野毒抗体阴性率均为100.00%。由此表明:通过PRV野毒抗体检测净化规模化猪场A、G、I的后备种猪已经取得初步成效,供规模化猪场开展伪狂犬净化作参考。

关键词：猪伪狂犬病 gE 阴性场净化

猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及oppA基因遗传进化分析

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中国畜牧兽医 2022年第12期49卷 1686-1694页

作者：李红婕董紫凡车勇良周伦江王隆柏白丁平福建农林大学动物科学学院(蜂学学院) 福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

【目的】了解福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的流行及oppA基因遗传进化情况。【方法】本研究采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR扩增测序、PCR荚膜分型、oppA基因克隆及相似性分析、动物回归试验等方法... 详细信息

【目的】了解福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的流行及oppA基因遗传进化情况。【方法】本研究采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR扩增测序、PCR荚膜分型、oppA基因克隆及相似性分析、动物回归试验等方法对分离菌株进行鉴定和分析。【结果】本研究共分离到10株菌,分离菌在血平板上形成淡灰白色、湿润光滑、奶油露珠状菌落;分离菌株能酵解蔗糖、果糖、麦芽糖和甘露醇,不能分解葡萄糖、枸橼酸盐、乳糖、硫化氢等,与多杀性巴氏杆菌生化特性基本一致;分离菌株16S rRNA序列与GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌相似性达99.9%以上,10株分离菌均为多杀性巴氏杆菌;PCR荚膜分型显示,6株分离菌为荚膜A型,4株为荚膜D型;基于oppA基因的遗传进化树显示,10株分离菌均位于同一分支内;动物回归试验结果显示,在24 h内攻毒小鼠死亡率较高(21/30),分离菌有较强的致病力。【结论】福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌流行菌株的荚膜血清型主要是A和D型,且大部分菌株都来源于共同的祖先,本研究结果丰富了猪多杀性巴氏杆菌的流行病学资料,并为该病的防控奠定基础。

关键词：猪多杀性巴氏杆菌荚膜分型分离鉴定 oppA基因遗传进化

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猪场沼气综合利用的研究与应用

福建畜牧兽医 2010年第6期32卷 74-77页

作者：修金生周伦江吴顺意王隆柏福建农林大学动物科学院福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013 福建省动物疫病预防控制中心福州350003

猪场沼气综合利用是指将猪粪便、粪尿等猪场污物经沼气池厌氧发酵后,所产生的沼气、沼渣、沼液作为其他生产活动的能源、肥料等系列化的再生利用,真正实现系统内农业资源多层次利用和高效益良性循环。针对猪场沼气综合利用的目的与意义... 详细信息

猪场沼气综合利用是指将猪粪便、粪尿等猪场污物经沼气池厌氧发酵后,所产生的沼气、沼渣、沼液作为其他生产活动的能源、肥料等系列化的再生利用,真正实现系统内农业资源多层次利用和高效益良性循环。针对猪场沼气综合利用的目的与意义、猪场沼气池构建、沼气产生过程、沼气脱硫技术、沼液利用、示范猪场沼气综合利用效果等进行较系统阐述,为今后进一步开展猪场沼气综合利用的推广与应用研究奠定基础。

关键词：沼气综合利用应用

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福建省猪流感H1和H3抗体的血清学调查

中国兽医科学 2011年第9期41卷 968-971页

作者：王隆柏俞玉鸿吴顺意修金生魏宏车勇良陈如敬吴学敏庄向生周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 福建农林大学动物科学学院福建福州350002 福建省动物疫病预防控制中心福建福州350003

为了掌握福建省猪群猪流感H1亚型和H3亚型的感染情况,采用ELISA方法,对2009年与2010年采集的1 323份血清进行了猪流感H1和H3抗体测定。结果显示,2009年全省猪群感染猪流感H1和H3的抗体阳性率分别为50.5%和21.0%,其中规模猪场的阳性率分... 详细信息

为了掌握福建省猪群猪流感H1亚型和H3亚型的感染情况,采用ELISA方法,对2009年与2010年采集的1 323份血清进行了猪流感H1和H3抗体测定。结果显示,2009年全省猪群感染猪流感H1和H3的抗体阳性率分别为50.5%和21.0%,其中规模猪场的阳性率分别为53.2%和23.0%,散养户的阳性率分别为21.0%和7.8%,屠宰场的阳性率分别为33.3%和9.1%;2010年全省规模猪群感染猪流感H1和H3的抗体阳性率分别为49.4%和18.4%,其中种猪的阳性率分别为56.1%和20.1%,商品猪的阳性率分别为39.2%和15.8%。结果表明,福建省猪群不论饲养规模大小还是不同猪群均在不同程度上感染了猪流感,且感染猪流感H1的抗体阳性率比H3的高。

关键词：福建猪流感血清学调查

猪伪狂犬病病毒FZ-2012株的分离鉴定及其gE基因的遗传演化分析

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畜牧与兽医 2015年第7期47卷 17-20页

作者：陈秋勇吴学敏周伦江陈如敬王隆柏车勇良严山修金生福建农林大学动物科学学院福建福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

从福建省某猪场采集疑似猪伪狂犬病的病料接种PK-15细胞,通过PCR法、动物试验证实所分离的病毒为猪伪狂犬病毒（PRV）,命名为FZ-2012,经测定该病毒株TCID50为10^-9.40/0.1mL。根据Gen Bank已公布的PRV gE基因序列设计了1对特异性引物,将... 详细信息

从福建省某猪场采集疑似猪伪狂犬病的病料接种PK-15细胞,通过PCR法、动物试验证实所分离的病毒为猪伪狂犬病毒（PRV）,命名为FZ-2012,经测定该病毒株TCID50为10^-9.40/0.1mL。根据Gen Bank已公布的PRV gE基因序列设计了1对特异性引物,将PCR扩增片段进行克隆测序,与国内外已发表的2012年以来15个新分离毒株、11个经典毒株进行同源性比对分析,并构建遗传进化树。结果表明：FZ-2012株gE基因序列全长1740 bp,编码579个氨基酸,与新分离毒株gE基因氨基酸序列的同源性为97.6%~99.3%,与经典毒株的氨基酸序列同源性为95.0%~98.6%;遗传进化关系表明,FZ-2012毒株与新分离毒株同属一分支,而与经典毒株分属2个不同分支。本研究首次报道福建省存在PRV新流行毒株,为丰富福建省猪伪狂犬病的分子流行病学和开发猪伪狂犬病新型疫苗奠定基础。

关键词：猪伪狂犬病病毒 gE基因序列分析