检索结果-南通市图书馆

小熊猫紫色色杆菌PCR检测方法的建立及应用

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2024年第2期45卷 34-39页

作者：刘蓓罗伟铭王隆柏徐素慧周伦江林琳何晓聪修云芳海峡(福州)大熊猫研究交流中心福建福州350025 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

建立小熊猫紫色色杆菌PCR快速检测方法,根据紫色色杆菌毒力T3SS效应因子OspC家族蛋白的基因编码序列设计特异性引物,通过反应条件优化,引物特异性、灵敏性和重复性试验,建立PCR快速检测方法并应用于小熊猫病料和兽舍环境样品检测。结果... 详细信息

建立小熊猫紫色色杆菌PCR快速检测方法,根据紫色色杆菌毒力T3SS效应因子OspC家族蛋白的基因编码序列设计特异性引物,通过反应条件优化,引物特异性、灵敏性和重复性试验,建立PCR快速检测方法并应用于小熊猫病料和兽舍环境样品检测。结果表明,该PCR方法能特异性检测小熊猫紫色色杆菌,从小熊猫饲养环境和死亡小熊猫体内分离出其他菌株未扩增出条带;最低可检测出0.98 pg/μL的紫色色杆菌DNA,具有较好的重复性;用该检测方法从饲养环境和小熊猫病料中检测到的结果与传统的分离培养和测序比对的结果一致。所建立的PCR方法在实际应用中可快速高效检测出紫色色杆菌,可用于小熊猫紫色色杆菌病病原的检测。

关键词：小熊猫紫色色杆菌聚合酶链反应病原检测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猪源葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

动物医学进展 2024年第5期45卷 8-13页

作者：李燕玲陈渊泉谢明杰周伦江陈秋勇连春红李健王隆柏福建农林大学福建省兽医中药与动物保健重点实验室福建福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 仙游县畜牧兽医局福建莆田351299

为明确从福建某规模猪场分离到的病原菌及其生物学特性、致病性与耐药等特征,为疫病的防治提供参考依据。对分离菌进行纯化,采用革兰氏染色、PCR鉴定、药敏试验、消毒剂消杀试验、耐药基因检测及动物攻毒试验等,对分离菌进行生物学特性... 详细信息

为明确从福建某规模猪场分离到的病原菌及其生物学特性、致病性与耐药等特征,为疫病的防治提供参考依据。对分离菌进行纯化,采用革兰氏染色、PCR鉴定、药敏试验、消毒剂消杀试验、耐药基因检测及动物攻毒试验等,对分离菌进行生物学特性、耐药等相关检测。结果显示,分离菌为猪源葡萄球菌。该菌对30种常用抗菌药物中的苯唑西林、诺氟沙星、头孢类等14种药物高度敏感,对阿米卡星、庆大霉素、四环素、万古霉素、氟苯尼考5种药物中度敏感,对氨苄西林、哌拉西林、卡那霉素等11种药物不敏感,检测cfr、tetM、floR、mcr-1、bla NDM-1、optrA 6种耐药基因均为阴性;该菌对26种中药中的单宁酸高度敏感,对五味子、五信子多酚中度敏感,对叶下珠、厚朴、虎杖低度敏感,对半边莲、铁苋菜、艾叶、重楼等20种中药不敏感;在8种消毒剂中,84消毒液对该分离菌的消杀效果差,新洁尔灭、月苄三甲氯铵、复合酚3种消毒剂对该分离菌消杀效果好;动物攻毒试验表明,该菌对25日龄健康断奶仔猪具有强致病性,能导致猪出现典型的葡萄球菌病临床症状和病理特征,攻菌猪组织病理可见脾脏红髓淤血、肺泡腔内见红细胞渗出及少量粉染的渗出物。研究结果可为在养殖饲料端禁止添加抗生素的背景下,为猪葡萄球菌病的防治提供理论参考和技术支撑。

关键词：猪葡萄球菌分离鉴定致病性耐药性

常见酵母表达系统的菌株及其在猪用疫苗研制中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

福建畜牧兽医 2024年第3期46卷 28-32页

作者：侯恩慧陈秋勇邱镜莉连春红吴学敏马玉芳周伦江王隆柏福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013 福建农林大学动物科学学院福州350002

近年来,猪类疫病病毒不断发生变异,给全球生猪养殖业造成了巨大的经济损失,疫苗作为最有效的防控手段,其基因工程疫苗研究工作备受关注。本文总结常见酿酒酵母、汉逊酵母和毕赤酵母表达系统菌株的优势及其在猪用疫苗研制中的应用,为今... 详细信息

近年来,猪类疫病病毒不断发生变异,给全球生猪养殖业造成了巨大的经济损失,疫苗作为最有效的防控手段,其基因工程疫苗研究工作备受关注。本文总结常见酿酒酵母、汉逊酵母和毕赤酵母表达系统菌株的优势及其在猪用疫苗研制中的应用,为今后酵母表达系统在研制猪用疫苗方面提供理论参考。

关键词：酵母菌酵母载体系统猪用疫苗

维普期刊数据库博看期刊

PRRSV灭活疫苗安全性与免疫原性的测定及其RT-PCR鉴别检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

PRRSV灭活疫苗安全性与免疫原性的测定及其RT-PCR鉴别检测方法的...

作者：王隆柏福建农林大学

学位级别：硕士

根据GenBank已发表及本研究室分离鉴定的变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的NSP2基因序列,设计并合成了一对引物,建立了一种鉴别PRRSV的RT-PCR检测方法。结果表明：该方法扩增变异型PRRSV基因组时可获得217bp的片段,扩增普通PRRSV... 详细信息

根据GenBank已发表及本研究室分离鉴定的变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的NSP2基因序列,设计并合成了一对引物,建立了一种鉴别PRRSV的RT-PCR检测方法。结果表明：该方法扩增变异型PRRSV基因组时可获得217bp的片段,扩增普通PRRSV时则获得307bp的片段,同条件扩增猪瘟病毒(CSFV)、圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)、伪狂犬病病毒(PRV)均为阴性;该体系可检测到2.6pg的PRRSV核酸,具有较高敏感性。对2007-2008年送检的40份临床样品进行检测,结果检出12份为变异PRRSV,其阳性率为30.0%。研究结果表明,建立的RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等特点,适用于对猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴别诊断。选用猪繁殖与呼吸综合征病毒福建分离株(PRRSV-FuZhou-01株)为制苗种毒。病毒经Marc-145细胞增殖、超速离心、浓缩、甲醛灭活后,分别制成新型佐剂IMS1312灭活疫苗和油乳剂灭活疫苗,两种疫苗病毒含量约为108.0TCID50ml-1。30头25日龄的PRRSV抗体阴性的断奶猪被随机分成5组,每组6头,用于检测疫苗的安全性和免疫原性。结果表明两种疫苗首次免疫断奶仔猪后14d可以检测到抗体,二免14d抗体水平达到高峰,一免180d后抗体水平可以维持在1：320。两种佐剂苗在4℃放置12个月均不分层,并对断奶仔猪具有良好的安全性和免疫原性。

关键词： PRRSV RT-PCR 建立灭活疫苗安全性免疫原性

笋头纤维对海兰褐蛋鸡育成期内脏器官指数、血浆激素含量和盲肠微生物区系的影响

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

动物营养学报 2022年第12期34卷 7758-7769页

作者：张世忠陈秀琴陈盛星蓝豪杰江斌高炳辉黄兴樑王隆柏刘景福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013 中鲨动物保健品(厦门)有限公司厦门361028 福建明良食品有限公司南平353100

本试验旨在研究饲粮添加笋头纤维对海兰褐蛋鸡育成期内脏器官指数、血浆激素含量和盲肠微生物区系的影响。试验选用384只8周龄健康海兰褐蛋鸡,随机分为4个组,每组4个重复,每个重复24只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添... 详细信息

本试验旨在研究饲粮添加笋头纤维对海兰褐蛋鸡育成期内脏器官指数、血浆激素含量和盲肠微生物区系的影响。试验选用384只8周龄健康海兰褐蛋鸡,随机分为4个组,每组4个重复,每个重复24只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加10(试验Ⅰ组)、20(试验Ⅱ组)和30 g/kg(试验Ⅲ组)的笋头纤维。试验预试期7 d,正试期60 d。结果表明:1)与对照组相比,试验组蛋鸡肌胃指数显著提高(P<0.05),试验Ⅲ组肠道指数显著提高(P<0.05),试验Ⅱ组和试验Ⅲ组肠道长度和肠道校正长度显著提高(P<0.05)。2)与对照组相比,试验Ⅱ组和试验Ⅲ组蛋鸡血浆雌二醇含量显著降低(P<0.05),试验Ⅲ组血浆孕酮含量显著高于其他组(P<0.05)。3)与对照组相比,第31天,试验组蛋鸡盲肠菌群Shannon指数显著提高(P<0.05),试验组盲肠副拟杆菌属(Parabacteroides)、颤螺菌属(Oscillospira)和萨特氏菌属(Sutterella)相对丰度显著提高(P<0.05);第61天,试验组蛋鸡盲肠菌群Chao1指数显著提高(P<0.05),试验组盲肠考拉杆菌属(Phascolarctobacterium)相对丰度显著降低(P<0.05)。差异物种分析表明,饲粮添加笋头纤维可显著降低蛋鸡盲肠甲烷杆菌科(Methanobacteriaceae)、肠球菌科(Enterococcaceae)和脱硫弧菌目(Desulfovibrionales)的相对丰度(P<0.05),显著提高盲肠巴恩斯氏菌科(Barnesiellaceae)、互养菌科(Synergistaceae)、克里斯滕森菌科(Christensenellaceae)、韦荣氏菌科(Veillonellaceae)和产碱菌科(Alcaligenaceae)的相对丰度(P<0.05)。综上所述,在育成期海兰褐蛋鸡饲粮中添加笋头纤维可改善蛋鸡胃肠道发育,改善血浆激素含量,提升盲肠菌群多样性和丰富度,并通过提高有益菌数量、抑制条件性致病菌繁殖,改善肠道健康,其中以30 g/kg添加水平效果较佳。

关键词：蛋鸡育成期笋头纤维器官指数血浆激素盲肠微生物区系

新发变异伪狂犬病毒FJ2012株灭活疫苗制备和免疫效力评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

福建农业学报 2022年第4期37卷 423-428页

作者：侯博王晨燕陈秋勇吴学敏刘玉涛王隆柏周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

【目的】比较不同种类佐剂制备的伪狂犬病毒(PRV)FJ2012株灭活疫苗的免疫效力。【方法】对PRV新发变异毒株FJ-2012的gE/gI基因采用同源重组技术缺失构建gE/gI基因缺失株(FJ-2012ΔgE/gI株),经甲醛灭活后分别与水相佐剂GEL02、两性佐剂IS... 详细信息

【目的】比较不同种类佐剂制备的伪狂犬病毒(PRV)FJ2012株灭活疫苗的免疫效力。【方法】对PRV新发变异毒株FJ-2012的gE/gI基因采用同源重组技术缺失构建gE/gI基因缺失株(FJ-2012ΔgE/gI株),经甲醛灭活后分别与水相佐剂GEL02、两性佐剂ISA 206VG和白油佐剂制成不同种类的灭活疫苗,经质量检查后免疫绵羊,免疫28 d后采用ELISA法检测各组绵羊的gB和gE抗体,并且以变异毒FJ-2012攻毒,评估不同灭活疫苗对绵羊的保护效力。【结果】成功构建了基因缺失株FJ-2012ΔgE/gI,并制备3种不同佐剂的灭活疫苗,接种绵羊后均无不良反应发生。免疫28 d后gB抗体均全部转阳,gE抗体阴性;对照组绵羊在攻毒后6 d内全部死亡(5/5),以GEL02和白油作为佐剂的灭活疫苗组绵羊全部存活(5/5),保护率达到100%,而以ISA 206VG作为佐剂的免疫组绵羊死亡2头,保护率仅为60%(3/5)。【结论】以GEL02佐剂和白油佐剂制成的FJ-2012ΔgE/gI株灭活疫苗免疫绵羊后可以抵御变异毒亲本株FJ-2012株的攻击,能够对我国目前新发变异PRV的防控提供技术保障。

关键词：伪狂犬病毒 gE/gI基因缺失免疫效力灭活疫苗

猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及oppA基因遗传进化分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2022年第12期49卷 1686-1694页

作者：李红婕董紫凡车勇良周伦江王隆柏白丁平福建农林大学动物科学学院(蜂学学院) 福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

【目的】了解福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的流行及oppA基因遗传进化情况。【方法】本研究采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR扩增测序、PCR荚膜分型、oppA基因克隆及相似性分析、动物回归试验等方法... 详细信息

【目的】了解福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的流行及oppA基因遗传进化情况。【方法】本研究采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR扩增测序、PCR荚膜分型、oppA基因克隆及相似性分析、动物回归试验等方法对分离菌株进行鉴定和分析。【结果】本研究共分离到10株菌,分离菌在血平板上形成淡灰白色、湿润光滑、奶油露珠状菌落;分离菌株能酵解蔗糖、果糖、麦芽糖和甘露醇,不能分解葡萄糖、枸橼酸盐、乳糖、硫化氢等,与多杀性巴氏杆菌生化特性基本一致;分离菌株16S rRNA序列与GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌相似性达99.9%以上,10株分离菌均为多杀性巴氏杆菌;PCR荚膜分型显示,6株分离菌为荚膜A型,4株为荚膜D型;基于oppA基因的遗传进化树显示,10株分离菌均位于同一分支内;动物回归试验结果显示,在24 h内攻毒小鼠死亡率较高(21/30),分离菌有较强的致病力。【结论】福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌流行菌株的荚膜血清型主要是A和D型,且大部分菌株都来源于共同的祖先,本研究结果丰富了猪多杀性巴氏杆菌的流行病学资料,并为该病的防控奠定基础。

关键词：猪多杀性巴氏杆菌荚膜分型分离鉴定 oppA基因遗传进化

猪圆环病毒4型Rep蛋白原核表达及多克隆抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2023年第10期50卷 4188-4195页

作者：陈如敬吴学敏陈秋勇严山吴仁杰车勇良王隆柏周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程中心福州350013

【目的】应用原核表达系统表达猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV4)复制酶蛋白(Rep),纯化后免疫小鼠制备Rep蛋白多克隆抗体。【方法】以PCV4福建株(FJ2020001)为模板,采用PCR法扩增获得Rep基因片段,构建原核表达质粒pET-30a-... 详细信息

【目的】应用原核表达系统表达猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV4)复制酶蛋白(Rep),纯化后免疫小鼠制备Rep蛋白多克隆抗体。【方法】以PCV4福建株(FJ2020001)为模板,采用PCR法扩增获得Rep基因片段,构建原核表达质粒pET-30a-Rep;将pET-30a-Rep转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用0.5 mmol/L IPTG诱导表达重组Rep蛋白,利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白。表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,利用Western blotting和间接ELISA鉴定鼠源多克隆抗体的免疫原性和抗体效价。【结果】成功克隆PCV4 Re p基因,构建了可表达重组Rep蛋白的原核表达质粒;SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子质量约为35 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果表明,该蛋白能被PCV4阳性血清和鼠源多克隆抗体特异性识别,制备的鼠源多克隆抗体效价可达1∶16000。【结论】本研究成功表达并纯化了具备抗原性的PCV4重组Rep蛋白,为开发PCV4血清学诊断试剂盒和开展猪场PCV4流行病学调查奠定基础。

关键词：猪圆环病毒4型(PCV4) Rep蛋白原核表达多克隆抗体

福建省猪源多黏菌素耐药基因mcr-1阳性细菌的耐药特性及分布特征

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2022年第12期50卷 1-8,17页

作者：车勇良陈秋勇陈如敬吴学敏王隆柏刘玉涛周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

【目的】了解福建省猪源mcr-1基因阳性细菌的流行性、耐药特性及分布特征。【方法】从福建省7个地市的21个猪场采集313份粪便样本,应用PCR方法筛选、分离和鉴定mcr-1基因阳性细菌;采用K-B琼脂扩散试验进行药敏检测,分析mcr-1基因阳性细... 详细信息

【目的】了解福建省猪源mcr-1基因阳性细菌的流行性、耐药特性及分布特征。【方法】从福建省7个地市的21个猪场采集313份粪便样本,应用PCR方法筛选、分离和鉴定mcr-1基因阳性细菌;采用K-B琼脂扩散试验进行药敏检测,分析mcr-1基因阳性细菌的耐药性,并使用PCR方法分析其耐药表型;进一步采用多位点序列分型(MLST)方法鉴定mcr-1基因阳性大肠杆菌的类型,使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析方法对mcr-1阳性大肠杆菌进行聚类分析,探明其分布特征和亲缘关系。【结果】从313份猪粪便中共分离获得43株mcr-1基因阳性细菌,其中大肠杆菌39株。耐药性结果显示,分离菌株对磺胺甲基异恶唑、氟苯尼考、链霉素、强力霉素、恩诺沙星、新霉素、阿莫西林、头孢噻肟、林可-壮观、亚胺培南、呋喃妥因、利奈唑胺和替加环素的耐药率分别为90.1%,83.7%,74.4%,67.4%,67.4%,58.1%,53.5%,39.5%,34.9%,11.6%,4.6%,0和0。磺胺类耐药基因中的sul1、sul2和sul3基因检出率较高,分别达到81.4%,90.7%和74.4%;喹诺酮类耐药基因中仅有qnrS和aac(6′)-Ib-cr被检出,其检出率分别为51.2%和30.2%;氯霉素类耐药基因中Cat2和cmlA基因的检出率较高,分别达到86.0%和74.4%;氟苯尼考耐药基因(floR)的检出率为83.7%;金属β-内酰胺酶耐药基因(NDM-1)的检出率为23.2%;多药耐药基因(cfr)的检出率为7.0%;而替加环素耐药基因(tet(X))未被检出。39株mcr-1基因阳性大肠杆菌除了4株不能分型外,其他35株共分为19个ST型,具有高度多样性,其中ST10为优势型,共有9株菌株。PFGE图谱显示,39株mcr-1基因阳性大肠杆菌共获得30种PFGE谱型,具有多态性特征,分为6组克隆群。【结论】福建猪源mcr-1基因阳性细菌主要为大肠杆菌,少部分为肠杆菌科其他菌株,且分离菌株具有明显的多重耐药性;mcr-1基因阳性大肠杆菌在地域分布上具有多态性和高度多样性特点。

关键词：多黏菌素耐药性耐药基因猪源mcr-1基因阳性菌福建省