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双色多重CRISPR/sgRNA系统的构建及在斑马鱼染色体成像上的初步应用

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双色多重CRISPR/sgRNA系统的构建及在斑马鱼染色体成像上的初步应...

作者：王阿利武汉大学

学位级别：硕士

染色体是真核生物遗传信息的载体,其结构与功能之间的紧密联系促使人们在时间和空间尺度上不断探索染色质的三维结构。尽管人们已经开发出多种染色体成像方法(如锌指蛋白、荧光原位杂交和Hi-C等),但这些方法均存在一定的缺陷。聚集的短... 详细信息

染色体是真核生物遗传信息的载体,其结构与功能之间的紧密联系促使人们在时间和空间尺度上不断探索染色质的三维结构。尽管人们已经开发出多种染色体成像方法(如锌指蛋白、荧光原位杂交和Hi-C等),但这些方法均存在一定的缺陷。聚集的短回文重复序列及其相关蛋白(The clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated proteins,CRISPR/Cas)技术的出现,为染色体成像技术开辟了新的领域。目前,基于CRISPR/Cas技术已经开发出多种染色体成像系统,如CRISPR-Sirius和dCas9-Sun Tag等。这些系统的优势在于成像过程中无需进行DNA变性等操作,从而极大程度上维持了染色体在活细胞中的正常生命活动。斑马鱼是现代生物学中国际通用的模式物种之一,它具有易于遗传控制操作和与人类有较高遗传相似性的优势,是人类疾病相关基因研究的理想模型。斑马鱼的胚胎透明的特点,为探索器官发育、神经调控、谱系追踪等方面提供了重要材料,对染色体结构和动态的研究也具有非常重要的意义。本研究利用overlapping PCR技术,构建了基于CRISPR/dCas9的MS2/MCP、PP7/PCP双色荧光成像系统。实验证明两个成像系统均能够特异性靶向斑马鱼Zem-2S细胞染色体上的高度重复序列。借助Golden-gate克隆技术建立的多顺反子t RNA-sgRNA质粒表达载体,结合MS2/MCP、PP7/PCP双色荧光成像系统,实现了对斑马鱼Zem-2S活细胞中24号染色体和25号染色体上中度重复序列的活体成像。两个成像系统在单个斑马鱼活细胞中能够同时标记两对同源染色体,并实时追踪它们的空间位置变化。本研究还考察了成像系统中多顺反子t RNA-sgRNA对细胞的毒性,发现在同等量sgRNA被转染的情况下,瞬时转染多顺反子t RNA-sgRNA载体比瞬时转染单一sgRNA载体对细胞毒性更低。利用CRISPR/dCas9技术对斑马鱼染色体进行成像的研究鲜有报道,本研究结果能为斑马鱼染色体空间结构成像研究奠定一定的实验基础。

关键词： CRISPR/Cas9 染色体成像斑马鱼细胞

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提速道岔滑床板结构优化研究

提速道岔滑床板结构优化研究

作者：王阿利西南交通大学

学位级别：硕士

本文较为系统地总结了国内外道岔用滑床板的结构现状，针对提速道岔用滑床板存在的扣压力失效、弹片与销钉出现裂纹、滑床台板表面阻力大、轨距调整困难等问题，改进和优化了提速道岔用滑床板的结构。重点介绍了改进型滑床板用楔形调整... 详细信息

本文较为系统地总结了国内外道岔用滑床板的结构现状，针对提速道岔用滑床板存在的扣压力失效、弹片与销钉出现裂纹、滑床台板表面阻力大、轨距调整困难等问题，改进和优化了提速道岔用滑床板的结构。重点介绍了改进型滑床板用楔形调整弹片式和双弹条分体式两种类型弹性扣压件的结构特征、三种滚轮滑床板用减摩滚轮装置的结构特征、调整轨距用复合缓冲偏心套的结构特征，并对两种规格的楔形调整弹片式弹性扣压件及便于改进型滑床板调整轨距的复合缓冲偏心套进行了试制。在改进型滑床板的弹性扣压系统设计中利用有限元分析软件ansys对新型弹片的强度、弹程进行检算，对新型弹片的结构设计进行了多次优化，提高了设计的理论水平，缩短了设计周期，降低了设计成本。改进型滑床板一方面能持久、可靠的扣压基本轨内侧，保持扣压力的恒定，另一方面能够方便、灵活的配合基本轨的轨距调整，此外滚轮滑床板减小了道岔转换阻力，降低了尖轨的不足位移，确保道岔转换可靠。改进型滑床板结构优化的成功研究，解决了既有滑床板的主要结构缺陷，满足了铁路快速发展对道岔滑床板的使用要求。

关键词：提速道岔滑床板改进型弹性扣压减摩轨距调整

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复杂条件下道岔主要病害的整治措施

铁道建筑 2024年第8期64卷 45-49页

作者：王阿利中铁宝桥集团有限公司陕西宝鸡721006

高海拔、强紫外线、冻土等复杂环境及线路条件对道岔现有结构、扣件系统、跨区间无缝线路等关键技术的适应性提出了严峻挑战。为提高道岔产品的安全性能,减少缺氧环境下的维护作业量,本文调研了复杂条件下道岔的主要病害,并提出针对性... 详细信息

高海拔、强紫外线、冻土等复杂环境及线路条件对道岔现有结构、扣件系统、跨区间无缝线路等关键技术的适应性提出了严峻挑战。为提高道岔产品的安全性能,减少缺氧环境下的维护作业量,本文调研了复杂条件下道岔的主要病害,并提出针对性整治措施。主要措施包括:通过优化道岔平面线形和尖轨结构、材质、制造工艺,延长曲线尖轨的服役寿命;通过优化辙叉结构、材料成分及制造工艺,解决心轨裂纹及剥落掉块问题;通过采用岔枕预埋铁座式扣件、加强型Ⅱ型弹条及弹性夹,提升扣件系统稳定性能;通过采用防护电务整体式岔枕,顶铁和间隔铁预留融雪加热条安装空间,避免冰雪及异物干扰电务转换系统,改善了工电接口;通过采用60AT2钢轨、辊轮装置,对台板进行减摩处理,减小了道岔扳动力;通过设置螺栓防松机构,减少了道岔维护作业量。

关键词：道岔病害整治措施服役寿命扣件稳定性道岔电务转换维护作业量

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临沂市轮状病毒腹泻病原调查分析

山东医药 2000年第8期40卷 34-35页

作者：张丽邱方贾云王阿利临沂市卫生防疫站!276000

轮状病毒为病毒性腹泻的主要病原.1992～1998年,我们对临沂市408例临床诊断为病毒性腹泻的患者采集粪便标本,进行病原基因分型.现报告如下.

关键词：轮状病毒临沂市婴幼儿腹泻婴幼儿消化不良聚丙烯酰胺凝胶电泳技术补体结合试验补体结合实验散发病例病毒性腹泻粪便标本轮状病毒核酸

时速350km客运专线铁路60kg/m钢轨42号单开道岔的制造

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铁道标准设计 2010年第3期30卷 6-8页

作者：王阿利费维周中铁宝桥集团有限公司陕西宝鸡721006

介绍时速350 km客运专线铁路用60 kg/m钢轨42号单开道岔(有砟)主要零件的制造工艺,它是我国目前制造、上道铺设的号码最大的高速道岔。为保证道岔制造精度,对长大轨件加工工艺、垫板平面度、长大轨件吊装变形等制造的难点进行了工艺攻关... 详细信息

介绍时速350 km客运专线铁路用60 kg/m钢轨42号单开道岔(有砟)主要零件的制造工艺,它是我国目前制造、上道铺设的号码最大的高速道岔。为保证道岔制造精度,对长大轨件加工工艺、垫板平面度、长大轨件吊装变形等制造的难点进行了工艺攻关,对基本轨、尖轨、翼轨、心轨加工工艺进行了总结。

关键词：客运专线铁路 42号道岔制造工艺

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云南兔儿风小极性成分GC-MS分析

中药材 2013年第1期36卷 61-64页

作者：王蓉孙珍王阿利院珍珍李金杰尚小雅首都师范大学生命科学学院北京100048 北京联合大学生物活性物质与功能食品北京市重点实验室北京100191

目的:分析云南兔儿风乙醇提取物中的小极性成分。方法:云南兔儿风干燥茎叶用乙醇超声提取,得到的浸膏水溶后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取;石油醚萃取部分进行正相硅胶柱层析,得到石油醚∶丙酮=50∶1～20∶1的洗脱流分即为小... 详细信息

目的:分析云南兔儿风乙醇提取物中的小极性成分。方法:云南兔儿风干燥茎叶用乙醇超声提取,得到的浸膏水溶后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取;石油醚萃取部分进行正相硅胶柱层析,得到石油醚∶丙酮=50∶1～20∶1的洗脱流分即为小极性成分。采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对小极性成分进行分离鉴定,并运用气相色谱峰面积百分比法确定其相对百分含量。结果:从云南兔儿风小极性部位共鉴定了50个化合物。结论:该结果为全面认识云南兔儿风的化学成分和药理作用提供了理论依据。

关键词：云南兔儿风小极性成分 GC-MS

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温度对广式高盐稀态酱油原油品质的影响

食品科学 2023年第22期44卷 55-63页

作者：于茜雅鲁骞吴昌正王阿利黄桂东佛山科学技术学院食品科学与工程学院广东省传统发酵食品工程技术研究中心广东省食品流通安全控制工程技术研究中心佛山市酿造工程技术研究中心佛山市农业生物制造工程技术研究中心广东佛山528231 广东海天创新技术有限公司广东省调味食品生物发酵先进技术企业重点实验室广东佛山528000 佛山市海天(高明)调味食品有限公司广东佛山528500

为探究温度在不同季节酿造酱油品质形成中的重要作用,设置3个发酵温度梯度(37、30、15℃)模拟广东四季温度变化情况并与自然发酵条件进行对比,发酵过程中监测原油风味指标的动态变化,并结合感官评定结果评判原油品质。结果表明:30℃发... 详细信息

为探究温度在不同季节酿造酱油品质形成中的重要作用,设置3个发酵温度梯度(37、30、15℃)模拟广东四季温度变化情况并与自然发酵条件进行对比,发酵过程中监测原油风味指标的动态变化,并结合感官评定结果评判原油品质。结果表明:30℃发酵有利于醇类、酯类及酚类形成,且感官评分最高,原油综合品质最佳;37℃发酵的原油中总酸含量较高,易形成苦味氨基酸,且醛酮类、呋喃(酮)类及吡嗪类物质较为丰富,满足了酱香形成的风味物质基础;15℃发酵不利于酸类、苦味氨基酸及酱油特征风味化合物的形成,且感官得分最低;而自然发酵的原油温度变化幅度大,不利于原油中游离氨基酸及风味物质形成。该研究结果为广式高盐稀态酱油的生产工艺升级以及品质稳定性的提升提供了科学的理论基础。

关键词：酱油原油控温发酵理化指标风味

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提速道岔用改进型滑床板的结构研究

铁道工程学报 2008年第3期25卷 15-19页

作者：王阿利费维周中铁宝桥股份有限公司陕西宝鸡721006

研究目的:针对提速道岔用滑床板存在扣压力失效、弹片与销钉出现裂纹、滑床台板表面阻力大、轨距调整困难等问题,改进和优化了提速道岔用滑床板的结构。研究结论:研制的改进型滑床板一方面能持久、可靠地扣压基本轨内侧,保持扣压力的恒... 详细信息

研究目的:针对提速道岔用滑床板存在扣压力失效、弹片与销钉出现裂纹、滑床台板表面阻力大、轨距调整困难等问题,改进和优化了提速道岔用滑床板的结构。研究结论:研制的改进型滑床板一方面能持久、可靠地扣压基本轨内侧,保持扣压力的恒定,另一方面能够方便、灵活地配合基本轨进行轨距调整;另外,滚轮滑床板减小了道岔转换阻力,降低了尖轨的不足位移,能确保道岔的转换可靠,满足了铁路快速发展对道岔滑床板的使用要求。

关键词：提速道岔滑床板优化弹性扣压减摩轨距调整

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铅中毒误诊7例分析

山东医药 2002年第14期42卷 67-68页

作者：李玉娟王阿利密继梅临沂市卫生防疫站山东临沂276001 山东侨联医院

1999年1月～2002年2月,我们收治69例铅中毒患者,其中误诊7例.现报告如下,并分析误诊原因.临床资料:本组男5例,女2例;年龄28～72岁.4例患者因出现不同程度的恶心、呕吐、腹胀、剧烈腹痛,伴有发热、麻痹性肠梗阻,腹部x线平片可见肠麻痹征... 详细信息

1999年1月～2002年2月,我们收治69例铅中毒患者,其中误诊7例.现报告如下,并分析误诊原因.临床资料:本组男5例,女2例;年龄28～72岁.4例患者因出现不同程度的恶心、呕吐、腹胀、剧烈腹痛,伴有发热、麻痹性肠梗阻,腹部x线平片可见肠麻痹征象而被误诊为胰腺炎,给予解痉镇痛和抗生素治疗7～10天,症状未见减轻.

关键词：铅中毒误诊诊断治疗病例分析