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苦荞凝集素靶向抑制结肠癌细胞HCT116增殖的机制

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中国生物化学与分子生物学报 2017年第1期33卷 73-80页

作者：郭培钰崔晓东贾乔瑾吕彦王转花化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所太原030006

苦荞凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL)是一类兼具核糖体失活蛋白N-糖苷酶活性和芦丁水解酶活性的糖蛋白,具有显著的抑制结肠癌细胞增殖的功能。先前研究表明,TBL可以下调结肠癌细胞HCT116中包括miR-135a和miR-135b在内的一些oncom... 详细信息

苦荞凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL)是一类兼具核糖体失活蛋白N-糖苷酶活性和芦丁水解酶活性的糖蛋白,具有显著的抑制结肠癌细胞增殖的功能。先前研究表明,TBL可以下调结肠癌细胞HCT116中包括miR-135a和miR-135b在内的一些oncomiRs的表达,并且可以抑制结肠癌细胞HCT116的增殖。因此,我们推测TBL可能通过调控oncomiRs从而抑制HCT116细胞的增殖。本研究中,我们构建了包含miR-135a和miR-135b结合位点的腺瘤性结肠息肉病基因(adenomatous polyposis coli,APC)的3'-UTR区。双荧光素酶报告系统表明,经过TBL处理后,实验组的荧光素酶活性较对照组高,而且用miR-135a&b的反义核酸anti-miR-135a&b处理后和实验组有相似的结果。Western印迹分析表明,TBL处理HCT116细胞24 h后,细胞中APC和p-β-catenin的表达上调,总β-catenin的表达下调,且存在剂量依赖效应,而对GSK-3β的表达无明显影响。进一步探究了TBL进入细胞的方式,我们发现,加入TBL作用2 h后,其主要存在于HCT116细胞的表面,部分进入细胞内部,在细胞表面可以同半乳糖凝集素galectin-3竞争结合细胞膜表面受体,并且存在剂量和时间依赖性。这些结果表明:TBL以HCT116细胞表面的galectin-3受体为靶点,通过内吞作用进入细胞,进而调控HCT116细胞中miR-135a&b的表达,影响Wnt信号通路而抑制结肠癌细胞的增殖。

关键词：苦荞凝集素 miR-135a&b 腺瘤性结肠息肉基因结肠癌细胞 Wnt信号通路

重组苦荞麦过敏蛋白TBa的原核表达及其免疫活性鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第4期22卷 308-312页

作者：王岚李玉英蔡桂红张政王转花山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006

TBa[tartary buckwheat allergen]是苦荞麦中的一种主要过敏蛋白.根据长度为585bp的TBacDNA序列,以pET-28a为表达载体并选择合适的酶切位点合成上、下游引物,采用基因克隆技术构建重组表达载体pET-28a-TBa.进一步将重组质粒转入大肠杆菌... 详细信息

TBa[tartary buckwheat allergen]是苦荞麦中的一种主要过敏蛋白.根据长度为585bp的TBacDNA序列,以pET-28a为表达载体并选择合适的酶切位点合成上、下游引物,采用基因克隆技术构建重组表达载体pET-28a-TBa.进一步将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.从而获得以包涵体形式存在的TBa目的蛋白.该目的蛋白经Ni2+-NTA琼脂糖柱亲和纯化及SDS-PAGE分析显示,纯度达到95%以上.用透析复性的方法将目的蛋白重折叠,其复性产率可达到约68%.Western印迹证实,目的蛋白N端带有6个组氨酸标签.ELISA检测表明,通过基因重组及表达获得的重组苦荞麦过敏蛋白,与天然苦荞种子中的该蛋白具有相似的免疫学活性,与荞麦过敏病人血清中的IgE有特异性的结合.

关键词：苦荞麦过敏蛋白原核表达免疫活性

荞麦RAPD指纹图谱的建立及在品种鉴定中的应用

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山西大学学报(自然科学版) 2006年第2期29卷 194-197页

作者：许瑾周小梅范玲娟王转花山西大学生命科学与技术学院山西大学生命科学与技术学院山西太原030006

从9个荞麦品种的幼苗叶片提取DNA,使用CTAB和PVP并结合纯化过程中在高盐(N aC l)下沉淀DNA,可除去样品中影响DNA纯度的多酚类化合物和多糖.共使用13个随机引物,扩增的DNA片段大小为3.0K b~0.8 K b.从9个材料的13组RAPD指纹图谱上可以看... 详细信息

从9个荞麦品种的幼苗叶片提取DNA,使用CTAB和PVP并结合纯化过程中在高盐(N aC l)下沉淀DNA,可除去样品中影响DNA纯度的多酚类化合物和多糖.共使用13个随机引物,扩增的DNA片段大小为3.0K b~0.8 K b.从9个材料的13组RAPD指纹图谱上可以看出甜荞和苦荞的图谱差异很大(相同条带数占总条带数的比例为21%).在13个引物中有10个引物(占全部引物的77%)在甜荞的RAPD图谱上显示了品种间的DNA多态性,而苦荞只有6个引物(占全部引物的46%)产生了这种多态性.从荞麦RAPD指纹图谱上得到的特异带可以作为品种鉴定的分子标记.

关键词：荞麦 RAPD 指纹图谱

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乌麦萌发前后抗氧化酶的研究

山西大学学报(自然科学版) 2003年第4期26卷 352-355页

作者：马文丽王转花山西大学生命科学与技术学院山西大学生命科学与技术学院山西太原030006

较系统地研究了乌麦萌发前后过氧化物酶 (POD)、超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)等几种抗氧化酶活性的变化 ,同时利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对几种抗氧化酶进行了同工酶分析 .结果显示 :乌麦萌发前后 ,几种抗氧化酶活性均有显著变... 详细信息

较系统地研究了乌麦萌发前后过氧化物酶 (POD)、超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)等几种抗氧化酶活性的变化 ,同时利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对几种抗氧化酶进行了同工酶分析 .结果显示 :乌麦萌发前后 ,几种抗氧化酶活性均有显著变化 ,且与对照小麦有明显差异 .乌麦萌发前后 POD同工酶谱的变化显著 ,且与对照小麦的差异性大 ,SOD同工酶谱的变化及与对照小麦的差异性不明显 .

关键词：乌麦过氧化物酶(POD) 超氧化物歧化酶(SOD) 过氧化氢酶(CAT)

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荞麦生物活性物质的研究进展

食品与药品 2008年第1期10卷 58-61页

作者：赵飞王转花化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所山西太原030006

荞麦是一种古老的杂粮作物,在世界一些国家和高寒地区都有种植,在某些地区还是当地的主要粮食作物。由于它的化学和生物学成分独特,目前在食品和医药方面的应用前景十分广阔。本文对其生物活性物质,尤其蛋白酶抑制剂的理化性质及其功能... 详细信息

荞麦是一种古老的杂粮作物,在世界一些国家和高寒地区都有种植,在某些地区还是当地的主要粮食作物。由于它的化学和生物学成分独特,目前在食品和医药方面的应用前景十分广阔。本文对其生物活性物质,尤其蛋白酶抑制剂的理化性质及其功能等进行了综述。

关键词：荞麦生物活性物质蛋白酶抑制剂抗肿瘤作用

谷氧还蛋白rbGrx可延缓CL4176秀丽隐杆线虫中β淀粉样蛋白诱导的毒性

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中国生物化学与分子生物学报 2018年第8期34卷 844-853页

作者：李芳崔晓东马晓丽李娇王转花化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所太原030006 山西大学生命科学学院生物工程系太原030006 山西医学科学院山西大医院肿瘤内科太原030032

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种与衰老相关的神经退行性疾病,其中β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)诱导的细胞毒性被认为是其发病的主要原因。本文以Aβ转基因秀丽隐杆线虫CL4176为模型,研究了重组荞麦谷氧还蛋白(recombina... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种与衰老相关的神经退行性疾病,其中β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)诱导的细胞毒性被认为是其发病的主要原因。本文以Aβ转基因秀丽隐杆线虫CL4176为模型,研究了重组荞麦谷氧还蛋白(recombinant buckwheat glutaredoxin,rbGrx)对Aβ诱导的毒性和氧化应激的影响。结果显示,4μmol/L rbGrx可以延长CL4176线虫平均寿命达20%左右,并增加衰老虫体运动能力约43.6%,延迟产卵高峰期1 d,同时可以有效延缓Aβ毒性诱导的瘫痪表型。进一步研究发现,在正常条件和Aβ诱导毒性时,rbGrx均能降低CL4176线虫体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,并上调SOD活性和GSH含量。另外,rbGrx下调AβmRNA水平44.1%,减少Aβ沉积量,并且明显上调热激因子1 hsf-1(2.01倍)和hsp-16.2(2.65倍)mRNA表达水平。这表明,rbGrx通过降低CL4176线虫体内的ROS水平和上调热激蛋白质的转录表达水平,降低CL4176秀丽隐杆线虫中Aβ诱导的毒性。结果提示,rbGrx可能具有预防AD的潜力。

关键词：重组荞麦谷氧还蛋白 β-淀粉样蛋白 AD模型秀丽隐杆线虫热激因子1

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截短型rBTI的表达、纯化及性质研究

截短型rBTI的表达、纯化及性质研究

NH4+激活人红细胞膜Na+,K+——ATP酶的研究

泛环渤海地区九省市生物化学与分子生物学会——2011年...

作者：李静舒王转花化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所

蛋白酶抑制剂(Protease Inhibitor,PI)是一类可以作用于蛋白酶,并对其有抑制活性的小分子肽或者蛋白质。蛋白酶抑制剂广泛分布在自然界中,以多种形式存在于动物、植物和微生物体内。有机体中许多重要的生理学过程都需要依赖蛋白酶抑制... 详细信息

蛋白酶抑制剂(Protease Inhibitor,PI)是一类可以作用于蛋白酶,并对其有抑制活性的小分子肽或者蛋白质。蛋白酶抑制剂广泛分布在自然界中,以多种形式存在于动物、植物和微生物体内。有机体中许多重要的生理学过程都需要依赖蛋白酶抑制剂对蛋白酶精确的调控作用来正常进行。荞麦

关键词：重组荞麦胰蛋白酶抑制剂截短型突变体理化性质抗肿瘤

来源： cnki会议评论

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山西大学学报(自然科学版) 1991年第2期 183-187页

作者：王转花范文平栗春鸿山西大学生物系山西大学生物系 1990届本科毕业生

用人红细胞膜为材料,以NH4+代替K+激活Na+,K+—ATP酶,探讨K+或NH4+激活人红细胞膜Na+,K+—ATP酶的异同以及Na+,K+—ATP酶对强心苷类K—毒毛旋花苷及有机溶剂乙醇的敏感性。结果表明:（1） NH4+可代替K+来激活Na+,K+—ATP酶且两者具有相... 详细信息

用人红细胞膜为材料,以NH4+代替K+激活Na+,K+—ATP酶,探讨K+或NH4+激活人红细胞膜Na+,K+—ATP酶的异同以及Na+,K+—ATP酶对强心苷类K—毒毛旋花苷及有机溶剂乙醇的敏感性。结果表明:（1） NH4+可代替K+来激活Na+,K+—ATP酶且两者具有相同的作用机理;（2）用NH4+激活Na+,K+—ATP酶时,强心苷类药物对该酶具有用K+激活该酶同样的抑制作用,乙醇可使K+或NH4+激活的Na+,K+—ATP酶失活。

关键词： Na~+,K~+—ATP酶红细胞铵离子 K—毒毛旋花苷乙醇

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苦荞凝集素的稳定性及体外消化性

食品工业科技 2018年第24期39卷 57-61页

作者：李晨宁丽娜崔晓东李娇王转花山西大学生命科学学院山西太原030006 山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西太原030006

目的:从苦荞种子中分离得到一种凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL),研究其酸碱、热稳定性及体外消化性。方法:采用酸性缓冲液浸提脱脂荞麦粉及阴离子交换层析纯化凝集素,TBL分别经沸水浴加热不同时间、不同pH处理、模仿胃液、模仿... 详细信息

目的:从苦荞种子中分离得到一种凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL),研究其酸碱、热稳定性及体外消化性。方法:采用酸性缓冲液浸提脱脂荞麦粉及阴离子交换层析纯化凝集素,TBL分别经沸水浴加热不同时间、不同pH处理、模仿胃液、模仿胰液消化后,采用SDS-PAGE及灰度扫描分析,研究其稳定性及体外消化性。结果表明:选用pH4.7浸提缓冲液可简化提取工艺,采用一步层析可得到电泳纯TBL。沸水浴加热60 min时,TBL仍可保留50%以上。在pH4～12条件处理30 min后,BTL的保留率均在80%以上。体外消化实验表明,TBL对人工模拟胃液有一定抗性,降解一半TBL所需时间为10 min,而TBL在人工模拟肠液中很难消化,即使作用时间为50 min时,TBL也未发生明显降解。将TBL沸水浴加热30 min后再进行体外消化实验,发现在模拟肠液及模拟胃液中,仅处理10 min时,SDS-PAGE结果中TBL蛋白条带完全消失,表明被TBL被消化酶完全降解。结论:天然TBL具有良好的稳定性,耐热、耐酸碱、耐胰蛋白酶消化,在胃蛋白酶液中降解也较为缓慢。预加热处理可明显提高TBL在模拟胃液及模拟肠液中的消化率。

关键词：苦荞凝集素消化性稳定性