检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

特异性过敏原TBt多克隆抗体的制备与鉴定

细胞与分子免疫学杂志 2011年第9期27卷 1000-1002页

作者：杨振煌崔晓东李平李玉英王转花山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西太原030006

目的:制备特异性苦荞主要过敏原TB t的多克隆抗体,为深入研究TB t分子中各结构域的功能奠定基础。方法:通过盐析,离子交换层析,分子筛层析等方法从苦荞种子中纯化出过敏蛋白TB t,免疫新西兰兔子,制备多克隆抗体。用间接ELISA、W estern ... 详细信息

目的:制备特异性苦荞主要过敏原TB t的多克隆抗体,为深入研究TB t分子中各结构域的功能奠定基础。方法:通过盐析,离子交换层析,分子筛层析等方法从苦荞种子中纯化出过敏蛋白TB t,免疫新西兰兔子,制备多克隆抗体。用间接ELISA、W estern b lot检测该抗体的效价和特异性;竞争ELISA研究IgG抗体对TB t过敏患者血清IgE的抑制作用。结果:间接ELISA法检测所制备抗体的效价达1∶256 000左右;W estern b lot显示该抗体能与TB t蛋白特异结合;竞争ELISA表明制备的IgG抗体能够特异性抑制荞麦过敏患者血清IgE与过敏蛋白的结合。结论:制备的TB t多抗血清具有较高的效价和良好的特异性,该多克隆抗体可用于TB t的免疫活性鉴定,为下一步研究该蛋白的分子特征及免疫治疗奠定了基础。

关键词：苦荞过敏蛋白多克隆抗体

荞麦rBTI-2的表达及其对肿瘤细胞的生长抑制作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国细胞生物学学报 2011年第7期33卷 759-765页

作者：李玉英郭慧崔晓东王转花山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006

设计一种适合基因工程开发的无标签重组荞麦胰蛋白酶抑制剂rBTI-2,并研究其对肿瘤细胞的生长抑制作用。构建原核表达载体pExSecI-BTI-2,诱导表达获得可溶性目的蛋白,经Resource^(TM) Q纯化后作用于HL-7702、HepG2、EC9706和QBC-939细胞,... 详细信息

设计一种适合基因工程开发的无标签重组荞麦胰蛋白酶抑制剂rBTI-2,并研究其对肿瘤细胞的生长抑制作用。构建原核表达载体pExSecI-BTI-2,诱导表达获得可溶性目的蛋白,经Resource^(TM) Q纯化后作用于HL-7702、HepG2、EC9706和QBC-939细胞,MTT检测rBTI-2对其生长的影响,并与前期获得的几种融合蛋白酶抑制剂进行功能比对。结果表明:质粒pEXSecI-BTI-2构建成功,SDS-PAGE分析表明分子量约为7.8 kDa。MTT检测表明rBTI-2对几种肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用,而对正常细胞HL-7702作用很小。几种蛋白酶抑制剂对肿瘤细胞的生长均有不同程度的影响,其中rBTI-2对肿瘤细胞的生长抑制作用要大于融合蛋白酶抑制剂rBTI,这为深入研究BTI诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制及其应用开发提供了重要基础和研究依据。

关键词：胰蛋白酶抑制剂 MTT检测细胞增殖

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

荞麦BTI全长基因的克隆及表达分析

中国农学通报 2007年第3期23卷 53-57页

作者：李玉英张政王转花山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西太原030006

【研究目的】扩增荞麦胰蛋白酶抑制剂(Buckwheat trypsin inhibitor,BTI)基因,并对其表达特性和氨基酸同源性进行分析。【方法】根据荞麦胰蛋白酶抑制剂氨基酸的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术,以荞麦cDNA为模板,扩增BTI基... 详细信息

【研究目的】扩增荞麦胰蛋白酶抑制剂(Buckwheat trypsin inhibitor,BTI)基因,并对其表达特性和氨基酸同源性进行分析。【方法】根据荞麦胰蛋白酶抑制剂氨基酸的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术,以荞麦cDNA为模板,扩增BTI基因并进行序列及其表达谱分析。【结果】克隆得到了BTI基因。它的cDNA全长为459bp,含有一个216bp的完整阅读框,编码72个氨基酸。同源性分析表明,其蛋白质序列与已报道的荞麦种子提取的BWI-1的氨基酸序列的同源性达96%,与笕属植物ATI、亚麻属植物Luti、马铃薯蛋白酶抑制剂PPI-I的氨基酸序列的同源性分别为65%、59%、48%。RT-PCR分析表明,BTI基因可在不同的组织中进行表达,但经伤害处理后的叶片中其表达量略高于生长各阶段。这可能与逆境情况(如外界损伤)下的应答等生理过程有关。【结论】荞麦BTI基因的获得,可为荞麦胰蛋白酶抑制剂的基础及应用研究奠定基础。

关键词：荞麦胰蛋白酶抑制剂半定量RT-PCR 基因表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡血超氧化物歧化酶脱辅、替代及重组的研究

山西大学学报(自然科学版) 1993年第2期 205-208页

作者：王转花金晓弟山西大学生物系

本文对天然鸡血SOD中的金属辅基进行了去除和重组,初步研究了Cu2+、Zn2+、Co2+等二价阳离子对SOD活性的影响。对天然态Cu2Zn2-SOD、重组Cu2Co2-SOD及脱辅E2E2-SOD的活性测定和光谱学行为的分析表明,重组Cu·Co-SOD具有同天然Cu·Zn-SOD... 详细信息

本文对天然鸡血SOD中的金属辅基进行了去除和重组,初步研究了Cu2+、Zn2+、Co2+等二价阳离子对SOD活性的影响。对天然态Cu2Zn2-SOD、重组Cu2Co2-SOD及脱辅E2E2-SOD的活性测定和光谱学行为的分析表明,重组Cu·Co-SOD具有同天然Cu·Zn-SOD类似的酶活性。在pH3.8时加入Cu2+和Co（2+）,重组的金属酶活性可恢复至天然酶活的85％,紫外吸收图谱也基本一致。

关键词：超氧化物歧化酶辅基替代重组光谱

苦荞α-螺旋发夹抗菌肽的分子改造抑制植物真菌活性

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物化学与分子生物学报 2019年第2期35卷 196-204页

作者：崔晓东王婷芬杜晶晶王转花化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所太原030006 山西大学生命科学学院生物工程系太原030006

本研究对来源于苦荞的α-螺旋发夹抗菌肽Ft AMP抗真菌机制与结构之间的关系进行了研究。首先人工合成了Ft AMP分子中N-端和C-端的α-螺旋(Ft AMP-N和Ft AMP-C),探究两个α-螺旋究竟是哪个螺旋在起抗菌作用。然后以Ft AMP为模板,α-螺旋... 详细信息

本研究对来源于苦荞的α-螺旋发夹抗菌肽Ft AMP抗真菌机制与结构之间的关系进行了研究。首先人工合成了Ft AMP分子中N-端和C-端的α-螺旋(Ft AMP-N和Ft AMP-C),探究两个α-螺旋究竟是哪个螺旋在起抗菌作用。然后以Ft AMP为模板,α-螺旋区电荷和两亲性特征为变化要素,利用螺旋轮投影和特定氨基酸残基替换的方法,对其进行初步分子改造,并通过对多肽结构和活性比较,探讨Ft AMP结构-功能的关系。研究表明,Ft AMP-N和Ft AMP-C都显示出良好的抗菌活性。根据螺旋轮投影方法分析螺旋的两亲性特征,并以Ft AMP氨基酸序列为模板,分别表达4个Ft AMP突变体(Ft AMP-E12A、Ft AMP-E12A/E9K、Ft AMP-E12A/E9A和Ft AMP-E12A/E9K/T24E)。圆二色光谱分析显示,4个多肽都可正确折叠成α-螺旋结构,在208 nm和222 nm处有典型的双负峰,表明氨基酸的改变及其表达过程中并未改变多肽的二级结构。抗真菌活性分析显示,与Ft AMP相比,4种突变体对植物真菌的抑制作用均有一定增强。特别是Ft AMP-E12A/E9K突变体,其抗真菌作用增强约1倍,同时诱导溶血活性并不显著,选择特异性提高近2倍。该研究也进一步表明,α-螺旋发夹抗菌肽发挥抗真菌效应主要与其螺旋结构有关,而与其抑制剂的活性位点没有关系,为该类抗菌肽结构和功能的关系提供了一定的参考。

关键词：苦荞抗菌肽蛋白酶抑制剂抗真菌活性分子改造溶血活性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

荞麦胰蛋白酶抑制剂的原核表达及纯化

西北植物学报 2007年第1期27卷 16-20页

作者：李玉英张政李晨王转花化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所太原030006

根据文献报道的荞麦胰蛋白酶抑制剂的氨基酸序列及本研究室先前已获得的部分基因序列设计引物,经过RT-PCR扩增,获得荞麦胰蛋白酶抑制剂编码区基因全序列.将该基因克隆到原核表达载体pQE-31中,并转化至大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达获得可... 详细信息

根据文献报道的荞麦胰蛋白酶抑制剂的氨基酸序列及本研究室先前已获得的部分基因序列设计引物,经过RT-PCR扩增,获得荞麦胰蛋白酶抑制剂编码区基因全序列.将该基因克隆到原核表达载体pQE-31中,并转化至大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达获得可溶性目的蛋白,其表达量约占菌体总蛋白的25%.该目的蛋白经Ni2+-NTA柱亲和纯化,SDS-PAGE分析显示,在大约9kD处出现明显的目的条带,与预计蛋白分子量大小一致.Western blot鉴定证实,目的蛋白N端带有6个组氨酸标签.活性测定表明,目的蛋白具有专一性的胰蛋白酶抑制剂活性,抑制活性约为77U/mg纯化蛋白.本实验为进一步研究荞麦胰蛋白酶抑制剂结构与功能的关系奠定了基础.

关键词：荞麦胰蛋白酶抑制剂表达抑制活性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

从荞麦中提取总RNA的有效方法

生物技术 2004年第3期14卷 23-24页

作者：李玉英王转花张政山西大学生物技术研究所山西太原030006

介绍了一种简单快速的从荞麦中提取总RNA的方法。经SDS、KAc和异丙醇等常规试剂提取高纯度的荞麦RNA ,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析表明 ,其 2 8SRNA与 18SRNA的比值约为 2∶1,紫外吸收值A2 60 /A2 80 为 1.91- 2 .0 6 ,产率为 6 9.2 -... 详细信息

介绍了一种简单快速的从荞麦中提取总RNA的方法。经SDS、KAc和异丙醇等常规试剂提取高纯度的荞麦RNA ,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析表明 ,其 2 8SRNA与 18SRNA的比值约为 2∶1,紫外吸收值A2 60 /A2 80 为 1.91- 2 .0 6 ,产率为 6 9.2 - 87.5 μgRNA/g植物材料。用该法提取的总RNA可满足RT -PCR和cDNA文库构建等的需要。

关键词：荞麦总RNA RNase 提取

连翘花黄色素对秀丽隐杆线虫在氧化应激下的保护作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物化学与分子生物学报 2019年第4期35卷 436-445页

作者：李玉英张东丹李娇张立伟王转花山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006 山西大学分子科学研究所太原030006

自由基过度引起的氧化应激是多种疾病发生的因素。连翘花黄色素(forsythia flower yellow pigment, FFYP)中含有大量的抗氧化活性物质,但其对氧化应激的抵抗性仍不清楚。本文首先通过化学方法检测FFYP的体外抗氧化活性;用细胞内抗氧化活... 详细信息

自由基过度引起的氧化应激是多种疾病发生的因素。连翘花黄色素(forsythia flower yellow pigment, FFYP)中含有大量的抗氧化活性物质,但其对氧化应激的抵抗性仍不清楚。本文首先通过化学方法检测FFYP的体外抗氧化活性;用细胞内抗氧化活性(cellular antioxidant activity,CAA)方法检测FFYP细胞内抗氧化活性;然后以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)为模型,检测FFYP对线虫氧化应激抵抗力及体内抗氧化指标的影响;用Daf-16和Skn-1突变体线虫和qRT-PCR实验探究其作用机制。研究结果表明,FFYP具有1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除能力,铁离子还原能力和活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)清除能力,并且具有浓度依赖性。用500μmol/L的胡桃醌提供氧化应激压力时,FFYP能显著提高线虫在氧化应激下的寿命,表明FFYP可以提高线虫对氧化应激的抵抗力。进一步研究发现,FFYP可显著降低线虫体内ROS自由基含量,提高超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)活性,增加还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量,表明FFYP通过提高线虫体内抗氧化防御系统活性清除自由基来提高线虫对氧化应激的抵抗力。突变体线虫实验显示,FFYP对线虫延长氧化应激下寿命的效应在Skn-1突变体线虫中完全消失,在Daf-16突变体中效应被减弱。qRT-PCR实验也显示,Daf-16和Skn-1靶基因的表达量均被提高。表明FFYP对线虫氧化应激抵抗力提高的作用是通过Daf-16和Skn-1共同作用。这预示着FFYP具有很好的抗氧化及抗应激药用价值,有潜力成为一种新的有生物活性的天然色素。

关键词：连翘花黄色素秀丽隐杆线虫抗氧化活性氧化应激

1,4-二甲基-6,8-二甲氧基-9,10-蒽醌的合成及其与BSA和ct-DNA的相互作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

化学通报 2015年第6期78卷 525-531页

作者：李玉英管英英张立伟王转花山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006

合成了大黄素类蒽醌衍生物1,4-二甲基-6,8-二甲氧基-9,10-蒽醌(1)并应用紫外光谱、荧光光谱、圆二色谱等方法研究了其与牛血清白蛋白(BSA)和小牛胸腺DNA(ct-DNA)的相互作用。荧光光谱结果表明,化合物1与BSA的相互作用主要以静态猝灭方式... 详细信息

合成了大黄素类蒽醌衍生物1,4-二甲基-6,8-二甲氧基-9,10-蒽醌(1)并应用紫外光谱、荧光光谱、圆二色谱等方法研究了其与牛血清白蛋白(BSA)和小牛胸腺DNA(ct-DNA)的相互作用。荧光光谱结果表明,化合物1与BSA的相互作用主要以静态猝灭方式使BSA的内源性荧光发生猝灭;圆二色谱表明,化合物1通过疏水作用及形成氢键破坏了α-螺旋结构,导致BSA分子中的α-螺旋含量下降。在p H 7.4时固定DNA的浓度,加入化合物1后,紫外光谱的最大吸收峰发生红移且吸光度加大。荧光光谱表明,化合物1与DNA-4S green NC的结合为竞争性抑制,并可使溶液体系荧光猝灭;圆二色谱表明,随着化合物1的加入,DNA碱基间作用能迅速减弱,表明化合物1与DNA之间为嵌插作用。此外,MTT方法的结果表明,化合物1对结肠癌细胞株HCT116增殖有明显的抑制作用。

关键词：蒽醌类衍生物牛血清白蛋白 DNA 相互作用光谱