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牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对牛外周血单核巨噬细胞完全吞噬功能的影响

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中国动物传染病学报 2023年第3期31卷 178-183页

作者：王赞嘉锡林高娃吴金花布日额邢家辉代牡兰内蒙古民族大学生命科学与食品学院通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所通辽028043

探索奶牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对体外培养的单核巨噬细胞完全吞噬功能的影响。通过体外培养牛外周血单核巨噬细胞(BMC-7),利用牛乳腺炎粪肠球菌野生型菌株(BME1708)和cylA基因敲除突变株(BME1708ΔcylA)按照不同时间梯度侵染BMC-7,利... 详细信息

探索奶牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对体外培养的单核巨噬细胞完全吞噬功能的影响。通过体外培养牛外周血单核巨噬细胞(BMC-7),利用牛乳腺炎粪肠球菌野生型菌株(BME1708)和cylA基因敲除突变株(BME1708ΔcylA)按照不同时间梯度侵染BMC-7,利用台酚蓝染色显微镜观察法,统计不同时间BMC-7对BME1708和BME1708ΔcylA的吞噬率和吞噬指数的差异。结果表明随着时间的延续,吞噬率和吞噬指数存在动态变化,至48 h时BMC-7对BME1708的吞噬率和吞噬指数分别为25%和2.3,而对BME1708ΔcylA的吞噬率和吞噬指数分别为50%和5.5。随着时间的进一步延续,巨噬细胞开始死亡。说明溶血素cylA基因阳性的粪肠球菌菌株对巨噬细胞的吞噬作用具有一定的负调控作用,并且在巨噬细胞内的存活率相对高,在单核巨噬细胞内存在一定的“内生”现象,这一现象可能是由该致病菌引起的牛乳腺炎常反复、难治愈的分子机制之一。

关键词：牛单核巨噬细胞粪肠球菌侵染实验

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内蒙古地区牛乳腺炎致病性粪肠球菌表面蛋白esp基因的克隆、表达及抗原性分析

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中国病原生物学杂志 2023年第1期18卷 23-29页

作者：石竞楠锡林高娃吴金花布日额王金良陈金龙王赞嘉内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所山东省滨州畜牧兽医研究院

目的克隆、表达内蒙古地区奶牛乳腺炎临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的表面蛋白esp基因,对表达产物进行抗原性鉴定及生物信息学分析。方法以Genbank公布的序列号为CP045045.1粪肠球菌esp基因DNA为模板设计1对引物,对esp基... 详细信息

目的克隆、表达内蒙古地区奶牛乳腺炎临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的表面蛋白esp基因,对表达产物进行抗原性鉴定及生物信息学分析。方法以Genbank公布的序列号为CP045045.1粪肠球菌esp基因DNA为模板设计1对引物,对esp基因进行克隆、测序,构建重组表达载体pET-30a(+)-esp后进行原核表达,对表达蛋白进行Western blot鉴定。利用DNA Star生物信息软件对表达蛋白的空间构象,理化特性,跨膜区,抗原性等进行预测分析。结果测序显示,克隆的esp基因序列长度为776 bp,与NCBI公布的esp序列(CP045045.1)相似度为100%。经PCR及酶切鉴定,重组表达质粒pET30a(+)-esp构建正确。将其转化至原核表达工程菌BL21后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示该蛋白的相对分子质量约28×10^(3)。Western blot分析显示,纯化的重组蛋白能够被相应小鼠抗血清识别。DNAStar生物信息学软件分析显示,该蛋白相对分子质量为37×10^(3),等电点为4.33,带负电荷残基总数54个,带正电荷残基总数30个,分子式为C_(1190)H_(1899)N_(309)O_(438),α螺旋占6.98%,β折叠占1.94%,无规则折叠占68.6%;其二级结构以无规则卷曲为主,表面存在较多抗原表位;6-25位氨基酸之间存在跨膜区域,推测该蛋白具有跨膜特性。抗原性分析显示,esp基因编码蛋白在14-55、59-170、186-197、206-255位氨基酸残基区段存在良好的抗原可及性,以59-170位区间抗原可及性较为集中。结论内蒙古地区分离的牛乳腺炎致病性粪肠球菌esp基因编码蛋白具有良好的抗原性,可作为该菌感染检测靶标候选抗原。

关键词：奶牛乳腺炎粪肠球菌 esp基因抗原理化特性分析

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内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌的分离与鉴定

中国乳品工业 2023年第5期51卷 31-35页

作者：代牡兰锡林高娃吴金花布日额邢家辉王赞嘉石竞楠内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所内蒙古通辽028043

对内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌进行分离并鉴定。以蒙古族传统发酵乳为材料,采用传统的细菌纯培养分离方法分离乳酸菌株,通过形态学特征及生理生化试验初步确定乳酸菌的基础上,进一步利用细菌16S r DNA基因序列分析和系统发育进化树构... 详细信息

对内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌进行分离并鉴定。以蒙古族传统发酵乳为材料,采用传统的细菌纯培养分离方法分离乳酸菌株,通过形态学特征及生理生化试验初步确定乳酸菌的基础上,进一步利用细菌16S r DNA基因序列分析和系统发育进化树构建,对其种属进行分析鉴定。分析鉴定结果显示,分离得到的29株乳酸菌共鉴定为2个属,6个种。2个属分别为乳酸杆菌属(Lactobacillus)和肠球菌属(Entercoccus),6个种分别为短乳杆菌(Levilaccillus brevis,4株)、植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum,8株)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis,9株)、鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum,3株)、蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii,1株)、耐久肠球菌(Enterococcus durans,4株)。该研究采集的发酵乳样品中乳酸菌资源丰富,代表着内蒙古蒙古族传统发酵乳制品中优势性乳酸菌菌种,为优良发酵剂的研发奠定了微生物资源基础。

关键词：传统发酵乳乳酸菌分离鉴定 16S r DNA基因序列分析

内蒙古地区牛乳腺炎粪肠球菌临床分离株全基因组测序与生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2021年第12期16卷 1409-1413页

作者：邢家辉锡林高娃吴金花王赞嘉代牡兰布日额石竞楠内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所内蒙古通辽028043

目的对内蒙古地区奶牛乳腺炎临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的基因组进行测序,并预测和分析其生物信息学特征。方法本实验以“内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心”分离的粪肠球菌临床分离菌株FC(BME1708)为对象,... 详细信息

目的对内蒙古地区奶牛乳腺炎临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的基因组进行测序,并预测和分析其生物信息学特征。方法本实验以“内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心”分离的粪肠球菌临床分离菌株FC(BME1708)为对象,利用PacBio RS II平台进行全基因组测序,分别使用RNAmmer和tRNAscan-SE软件对菌株基因组中的rRNA和tRNA进行预测,并对测序基因序列进行数据分析、基因注释、耐药性及毒力因子分析。结果测序组装后结果显示,该菌株基因组大小为2934454 bp,其中包含5个双股环状质粒DNA、61个tRNA、12个rRNA,蛋白总数为3151个。耐药性及毒力因子基因预测结果显示,该菌株对庆大霉素、链霉素、β内酰胺、青霉素、四环素、万古霉素等27类抗生素耐药,存在cyl、esp、ace、gel、efaA等82个相关毒力因子。结论已将本次分离的粪肠球菌基因组测序结果登录于GenBank(登录号:CP028835.1),该实验结果将为后续致病及免疫调控机理研究,以及防控策略的制定提供了可靠的生物信息数据。

关键词：牛乳腺炎粪肠球菌全基因组测序

牛乳腺炎粪肠球菌逃逸巨噬细胞的分子机制研究

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内蒙古民族大学学报（自然科学版） 2024年第6期39卷 90-96页

作者：王赞嘉锡林高娃吴金花布日额石竞楠代牡兰内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所内蒙古通辽028043

为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛单核巨噬细胞(BMC-7)吞噬功能和免疫调节的分子机制,利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株(BME1708)及cylA基因缺失突变株(BME1708△cylA)对牛巨噬细胞进行侵染,利用MTT检测法检测细胞... 详细信息

为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛单核巨噬细胞(BMC-7)吞噬功能和免疫调节的分子机制,利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株(BME1708)及cylA基因缺失突变株(BME1708△cylA)对牛巨噬细胞进行侵染,利用MTT检测法检测细胞活性;在明确细胞活性不受影响的条件下,提取被侵染的BMC-7总mRNA,利用RT-qPCR检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α以及NOS2的转录水平差异,采用ELISA法检测相应表达水平;利用Western blot检测牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对BMC-7的p38 MAPK信号通路磷酸化水平的影响;利用p38 MAPK信号通路抑制剂(PD 169316)孵育BMC-7,ELISA法检测相应细胞因子表达水平,以明确cylA基因调控该信号通路的分子机制。结果显示:与BME1708组相比,BME1708△cylA组在IL-10和TNF-α转录水平下调,IL-4、IL-8、IL-12以及NOS2转录水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与BME1708组相比,BME1708△cylA组IL-10表达水平下调,IL-4、IL-8、IL-12表达水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);TNF-α的表达水平降低,但是差异不显著;对p38 MAPK磷酸化检测结果显示,粪肠球菌cylA基因可以激活p38 MAPK信号通路并使其磷酸化;在PD 169316孵育后,与未添加抑制剂组相比,添加抑制剂组的IL-10、TNF-α的表达水平下调,IL-4、IL-8、IL-12的表达水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。上述结果表明,p38 MAPK信号通路为粪肠球菌β溶血素cylA基因发挥免疫调节机制的重要通路,该结论为奶牛乳腺炎的治疗及防控提供新的靶位,可通过其毒力的钝化以及对p38 MAPK信号通路进行识别及信号通路封闭,对粪肠球菌感染进行有效防控。

关键词：牛乳腺炎粪肠球菌溶血素cylA基因细胞因子 p38 MAPK

西藏狮泉河地区渐新世钾质火山岩成因及其地质意义

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岩石学报 2025年第1期41卷 151-166页

作者：俞嘉嘉陈伟唐菊兴李阳中国地质科学院矿产资源研究所北京100037 中国地质大学(北京)地球科学与资源学院北京100083

新生代钾质-超钾质火山岩与南北向裂谷关系密切,是认识青藏高原隆升过程的重要途径。本次工作在中拉萨地块狮泉河左左区识别出一套钾质粗面岩,为探讨其成因及构造背景指示,本文对其进行了年代学、岩石地球化学以及Lu-Hf同位素研究。锆石... 详细信息

新生代钾质-超钾质火山岩与南北向裂谷关系密切,是认识青藏高原隆升过程的重要途径。本次工作在中拉萨地块狮泉河左左区识别出一套钾质粗面岩,为探讨其成因及构造背景指示,本文对其进行了年代学、岩石地球化学以及Lu-Hf同位素研究。锆石U-Pb年龄确定该套火山岩形成于24.2Ma和22.3Ma,从而将原属于则弄群朗久组的火山岩重新厘定为渐新世。地球化学分析表明其具有高硅(64.6%

关键词：钾质-超钾质火山岩粗面岩南北向裂谷狮泉河地区

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箱梁预制封锚施工技术及运用研究

中华建设 2025年第2期 175-177页

作者：王赞北京铁城工程咨询有限公司

本文致力于探讨箱梁预制封锚施工技术在桥梁工程中的应用及其运用效果。通过介绍箱梁预制技术的工艺流程以及在桥梁工程中的广泛应用，着重分析了封锚技术在箱梁预制中的定义、作用以及实际应用场景。在此基础上，深入研究了箱梁预制封...

本文致力于探讨箱梁预制封锚施工技术在桥梁工程中的应用及其运用效果。通过介绍箱梁预制技术的工艺流程以及在桥梁工程中的广泛应用，着重分析了封锚技术在箱梁预制中的定义、作用以及实际应用场景。在此基础上，深入研究了箱梁预制封锚施工技术的具体操作步骤，包括施工前的准备工作、封锚施工过程中的关键步骤，以及质量控制与安全保障方面的考量。通过本文的研究旨在为提高桥梁工程施工效率、确保结构质量和安全施工提供实用的技术指南。

关键词：

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湖泊细菌群落及其对水体自净影响的研究进展

环境科学与技术 2025年第02期 203-213页

作者：陈聪聪孙明东谢培孙宁刘成真王赞春秦燕乔飞重庆交通大学河海学院中国环境科学研究院长江大学资源与环境学院

气候变化和人类活动的加剧导致淡水生态环境持续恶化。细菌群落参与有机污染物、无机污染物的降解循环，在水体自净过程中扮演至关重要的角色。该文总结了湖泊细菌群落的研究方法与特征、介导的水体自净过程、环境影响因素及群落变化对... 详细信息

气候变化和人类活动的加剧导致淡水生态环境持续恶化。细菌群落参与有机污染物、无机污染物的降解循环，在水体自净过程中扮演至关重要的角色。该文总结了湖泊细菌群落的研究方法与特征、介导的水体自净过程、环境影响因素及群落变化对水体自净影响。结果发现，高通量测序技术的开发为细菌群落研究提供有利的手段，α多样性、β多样性、生产力、呼吸率是表征细菌群落多样性和作用的重要指标。湖泊中典型类群为变形菌门（Proteobacteria）。环境因素作为影响细菌群落的主要因素，通过影响细菌的生长代谢影响细菌群落介导水体自净的过程，尤其在气候变化和人类活动加剧情况下，气候变暖和频繁的人类活动降低了湖泊细菌群落多样性，对水体自净产生巨大但未知的后果。细菌群落受到多种环境因素的制约，探究复合因素对细菌群落的影响，调控环境条件提高水体自净能力是未来研究的一个重要方向。

关键词：湖泊细菌群落水体自净环境因素

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数字资本主义的时间剥削及其政治经济学批判

中国地质大学学报(社会科学版) 2025年

作者：聂嘉琪北京大学马克思主义学院

马克思在《资本论》及其手稿中立足于哲学—经济学视角，阐明了资本对劳动个体生命时间控制和剥削的内在机制，解答了资本运动的“时间之谜”。随着资本主义数字化转型，数字资本的时间剥削呈现出多元形态，既采用精准化管控、碎片化占... 详细信息

马克思在《资本论》及其手稿中立足于哲学—经济学视角，阐明了资本对劳动个体生命时间控制和剥削的内在机制，解答了资本运动的“时间之谜”。随着资本主义数字化转型，数字资本的时间剥削呈现出多元形态，既采用精准化管控、碎片化占有、界限模糊化等新方式加大对劳动时间的剥削，又通过数字劳动加强对“数字技工”“数众”等不同主体的闲暇时间剥削。数字资本从时空维度重构了生产时间，数字权力从社会时间等维度对时间体系进行系统规训，共同构成数字资本主义时间剥削的双重驱动力。要破除时间剥削困境，必须大力解放和发展数字生产力，变革数字资本主义生产关系，建构数字社会主义时间范式，真正实现人类社会的自由时间解放。

关键词：数字资本主义时间剥削劳动时间闲暇时间时间解放