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肾移植受者西罗莫司联合小剂量环孢素转换治疗的五年临床观察

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中华医学杂志 2016年第20期96卷 1556-1561页

作者：朱兰丁韬王筱啸林正斌陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的通过5年随访，探讨肾移植术后由传统的环孢素A（CsA）三联免疫抑制治疗转换为西罗莫司（SRL）联合小剂量CsA和泼尼松（Pred）的临床有效性和安全性。方法前瞻性、开放性非随机的临床研究，选取2007年1月至2011年5月在华中科技大学... 详细信息

目的通过5年随访，探讨肾移植术后由传统的环孢素A（CsA）三联免疫抑制治疗转换为西罗莫司（SRL）联合小剂量CsA和泼尼松（Pred）的临床有效性和安全性。方法前瞻性、开放性非随机的临床研究，选取2007年1月至2011年5月在华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所门诊规律随访的46例口服CsA＋霉酚酸酯（MMF）＋Pred的。肾移植受者，进行SRL＋小剂量CsA＋Pred的转换治疗。其中主动转换组27例（转换前血肌酐≤140μmoL／L，无或仅轻微蛋白尿），被动转换组19例（血肌酐〉140μmol／L，尿蛋白〈＋＋）。转换后目标谷浓度：SRL为5～7μg/L，CsA为20—60μg/L。观察转换后5年的血肌酐和尿蛋白变化，急性排斥反应发生率、移植肾存活率和SRL相关的不良反应。结果转换后所有受者CsA平均减药63％。主动转换组转换时平均血肌酐为（110±19）μmol／L；8例退组，原因为关节痛1例、蛋白尿加重2例、慢性腹泻2例、轻度或可疑急性排斥反应2例和反复发热1例；其余19例受者平均随访5年血肌酐保持平稳，为（103±12）μmol／L，转换后5年移植肾存活率为100％。被动转换组在转换时平均血肌酐为（205±45）μmol／L，4例受者退组，原因分别为蛋白尿加重2例和人为因素2例；10例受者在转换后1～50个月移植肾失功能，其余5例受者平均随访5年血肌酐保持稳定[转换前为（218±46）μmol／L，5年随访时为（205±73）μmol／L]，总体移植肾5年存活率为33．3％，显著低于主动转换组（P〈0．001）。急性排斥反应在主动转换组发生2例，在被动转换组无发生。所有受者在随访期间未出现白细胞减少或血小板减少，也未观察到口腔溃疡、肺部感染等不良反应发生。结论SRL联合小剂量CsA的免疫抑制方案是一种较为安全有效的免疫抑制维持治疗方案，但需把握合适的转换治疗时机，在移植肾功能尚正常或只有早期轻度受损时进行转换能取得较为满意的长期效果，可考虑作为临床肾移植个体化免疫抑制方案的选择之一。

关键词：肾移植西罗莫司环孢素转换治疗

食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞检测ABO血型抗体水平的新方法

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中华器官移植杂志 2014年第5期35卷 300-305页

作者：王璐王军祥王筱啸陈松陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨以食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞（RCTEC）为靶细胞检测ABO血型抗体滴度的可行性。方法分离培养食蟹猴原代RCTEC，蛋白质印迹法和流式细胞术鉴定细胞的表型与纯度。利用流式细胞术分别检测ABO组织-血型抗原在RCTEC上的表达、RCTE... 详细信息

目的探讨以食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞（RCTEC）为靶细胞检测ABO血型抗体滴度的可行性。方法分离培养食蟹猴原代RCTEC，蛋白质印迹法和流式细胞术鉴定细胞的表型与纯度。利用流式细胞术分别检测ABO组织-血型抗原在RCTEC上的表达、RCTEC与人血清血型抗体的结合能力以及比较人红细胞与RCTEC测定血型抗体滴度的差异。结果分离得到的肾皮质细胞绝大部分是RCTEC。39．90％～73．80％的RCTEC表达ABO组织-血型抗原，且能与人血清中的血型抗体特异性结合。较长时间冻存对RCTEC的ABO组织-血型抗原表达水平无明显影响，冻存前表达B型抗原的阳性细胞比例为39．90％，冻存10个月后复苏再培养9d，阳性细胞的比例为39．．65％。利用钥孔戚血蓝蛋白偶联的血型抗原A（KLH—A）致敏前后的食蟹猴血清对比原代RCTEC与人红细胞检测血型抗体滴度的效果，结果显示，在RCTEC检测组，未出现凝集现象，与两种血清中抗体结合的几何平均荧光强度（MFI）均在最低血清稀释度（1：16）时最高，其后均随血清稀释度的增加而逐渐降低，未致敏血清的MFI值在稀释度为1：128时降至基线水平，致敏血清的MFI值在1：8192稀释度时降至基线水平，在1：16～1：8192稀释度之间，未致敏血清的MFI值均低于致敏血清；在人红细胞检测组，当抗体滴度高时凝集现象明显，未致敏血清MFI值的最高峰出现在1：64稀释度时，致敏血清MFI值的最高峰出现存1：32稀释度时，且随血清稀释度的增加呈现无明显规律的波动，在1：64～1：512稀释度之间，未致敏血清MFI值高于致敏血清。利用RCTEC检测血型抗体滴度的MFI值能较准确地反映抗体滴度自；变化。结论食蟹猴RCTEC高表达AN）组织-血型抗原，比人红细胞更适用于血清中血型抗体滴度的流式细胞术检测，具有良好的临床与科研应用潜力。

关键词：肾皮质上皮细胞 ABO血型系统肾移植流式细胞术

灵长类动物ABO血型不合肾移植后超急性排斥反应模型的建立

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中华器官移植杂志 2014年第7期35卷 421-425页

作者：王军祥钟山王筱啸陈松陈实陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生和计划生育委员会器官移植重点实验室武汉430030

目的建立灵长类动物ABO血型不合肾移植后超急性排斥反应模型.方法选择B型血食蟹猴为受者,A型血食蟹猴为供者,行ABO血型不合同种肾移植.根据是否接受致敏预处理,将受者猴分为2组：（1）未致敏对照组（n=1）,直接施行血型不合的同种肾... 详细信息

目的建立灵长类动物ABO血型不合肾移植后超急性排斥反应模型.方法选择B型血食蟹猴为受者,A型血食蟹猴为供者,行ABO血型不合同种肾移植.根据是否接受致敏预处理,将受者猴分为2组：（1）未致敏对照组（n=1）,直接施行血型不合的同种肾移植术;（2）KLH-A预致敏组（n=3）,预先皮下注射钥孔戚血蓝蛋白（KLH）偶联血型抗原A（KLH-A抗原）,致敏2周后施行血型不合的同种肾移植术.检测受者猴血清抗A血型抗体水平的变化,观察两组受者猴在移植术中开放血流1h内及术后移植肾存活情况,并对移植肾进行病理学检测及诊断.结果在术中未观察到未致敏对照组移植肾超急性排斥反应的发生,术后存活超过30 d（血肌酐为263 μmol/L）;KLH-A预致敏组3例受者猴在致敏后14 d,血清中抗A抗体水平显著升高,肾移植术中血流开放1h内移植物即转为紫黑色,HE染色及免疫荧光检测证实均发生超急性排斥反应.结论通过KLH偶联血型抗原预先致敏,以显著升高受者猴相应血型抗体水平的策略,能成功建立灵长类动物ABO血型不合肾移植超急性排斥反应模型.

关键词： ABO血型不合肾移植超急性排斥反应灵长类动物

肾移植后早期间质性肺炎的临床病程进展规律及治疗30例

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中华器官移植杂志 2014年第5期35卷 282-286页

作者：王筱啸陈松喻俊朱兰林正斌陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所武汉430030 武汉医药卫生学会联合办公室

目的探讨肾移植后间质性肺炎的临床病程规律、治疗原则及影响转归的主要因素。方法回顾性分析2006年11月至2013年12月间诊治的30例肾移植后早期间质性肺炎患者的临床资料，对其临床表现、病程进展规律、治疗措施及临床转归进行分析。结... 详细信息

目的探讨肾移植后间质性肺炎的临床病程规律、治疗原则及影响转归的主要因素。方法回顾性分析2006年11月至2013年12月间诊治的30例肾移植后早期间质性肺炎患者的临床资料，对其临床表现、病程进展规律、治疗措施及临床转归进行分析。结果30例患者中有29例于肾移植后246个月内发病，其病程进展具有较一致的规律性，整个病程时间为（34．9±7．5）d，通过每周肺部CT检查，发现起病到病程高峰的时间为（14．8±1．9）d，病程达到高峰后一般维持（7．3±3．6）d，即会出现明显的病程好转。若病程高峰时的肺部CT表现严重，且维持时间长而未出现病程好转，则往往预后较差。病程恢复时间为（13．1±3．7）d。治疗上通过使用皮质激素、抗生素和抗真菌药物进行优化调整，结合营养支持、提高免疫力以及大幅减量或停用免疫抑制剂等措施，病程高峰期胸部CT表现程度为较轻及中度的23例患者均治愈出院，胸部CT表现较重的7例患者中3例治愈，4例死亡。结论肾移植后早期间质性肺炎具有比较规律的病程进展特点。治疗上，对目前的大多数文献报道的治疗方案，包括对于甲泼尼龙的使用、抗生素的使用、抗真菌药物的使用、营养支持和免疫抑制剂的使用等方面进行进一步的优化调整，在避免过度医疗的情况下可取得良好的治疗效果。

关键词：肾移植间质性肺炎巨细胞病毒

聚乙二醇干扰素α-2b联合利巴韦林治疗肾移植后丙型肝炎9例的效果及安全性

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中华器官移植杂志 2014年第7期35卷 416-420页

作者：王筱啸朱兰喻俊陈松林正斌陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生和计划生育委员会器官移植重点实验室武汉430030 武汉医药卫生学会联合办公室

目的探讨聚乙二醇干扰素α-2b联合利巴韦林治疗肾移植后丙型肝炎的疗效及安全性.方法对9例肾移植术后1年以上、合并丙型肝炎、血肌酐稳定在正常范围的受者,采用聚乙二醇干扰素α-2b（50 μg皮下注射,每周1次）联合利巴韦林（400～600m... 详细信息

目的探讨聚乙二醇干扰素α-2b联合利巴韦林治疗肾移植后丙型肝炎的疗效及安全性.方法对9例肾移植术后1年以上、合并丙型肝炎、血肌酐稳定在正常范围的受者,采用聚乙二醇干扰素α-2b（50 μg皮下注射,每周1次）联合利巴韦林（400～600mg/d口服）治疗.每月检测丙型肝炎病毒（HCV） RNA,HCV RNA转阴后继续巩固治疗3～9个月.观测病毒学应答情况,同时观察肝肾功能、血常规变化及治疗过程中的不良反应.结果 9例受者的总疗程为4～20个月,其中6例（66.7％）获得满意的持续病毒学应答（完全应答）,随访至停用干扰素治疗后6个月未出现复发;2例在获得快速病毒学应答后,于巩固治疗3个月停止治疗后复发;1例在治疗8个月的过程中未见明显病毒学应答.治疗中所有受者的血肌酐水平均在正常范围内波动,所有受者均未出现急性排斥反应迹象.治疗过程中的主要不良反应包括流感样症候群（发热、肌肉酸痛、食欲不振等）、一过性骨髓抑制以及贫血等.所有不良反应未经处理或经对症处理后均可缓解或耐受.结论聚乙二醇干扰素α-2b联合利巴韦林治疗肾移植后合并丙型肝炎的移植肾功能稳定受者有确切疗效,对移植肾功能无明显影响,无严重不良反应,较为安全.

关键词：肾移植丙型肝炎治疗结果

应用改良流式法检测猕猴和食蟹猴体内血型抗体水平的分布情况

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Zoological Research 2011年第1期32卷 56-61页

作者：张弛王筱啸王璐向莹魏晴王婉瑜熊郁良陈实陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室卫生部器官移植重点实验室湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院血库湖北武汉430030 中国科学院昆明动物研究所动物毒素室云南昆明650223

绝大部分灵长类动物存在与人类相似的ABO血型系统,该研究采用改良流式法(flow cytometry method,FCM)检测猕猴及食蟹猴血清中血型抗体水平的分布情况。以流式细胞术为基础,使用商品化人源红细胞为靶细胞,并通过加入特异性荧光标记的抗人... 详细信息

绝大部分灵长类动物存在与人类相似的ABO血型系统,该研究采用改良流式法(flow cytometry method,FCM)检测猕猴及食蟹猴血清中血型抗体水平的分布情况。以流式细胞术为基础,使用商品化人源红细胞为靶细胞,并通过加入特异性荧光标记的抗人IgM或IgG二抗,对收集的实验用猕猴及食蟹猴的血清样本进行检测,以人类健康受试者的血清样本为对照,比较两者血型抗体水平的差异。结果显示:预先用人O型浓缩红细胞吸附猴血清中所含种属间非特异性抗体后,FCM法能够准确检测其血型抗体水平及分型,并且发现猴血清中天然血型抗体的水平明显低于健康人(P<0.05)。由此得出:通过预处理清除非特异性抗体的干扰后,FCM法同样适用于灵长类动物血清中血型抗体的检测,也为构建灵长类动物模拟人ABO血型不合器官移植模型提供了技术保障和实验数据。

关键词：流式检测法 ABO血型抗体猕猴食蟹猴

大鼠脂肪来源干细胞抵抗人血清介导的异种体液免疫杀伤作用及其机制

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中华器官移植杂志 2014年第6期35卷 370-373页

作者：赵越王璐阮永乐王筱啸贾钰向莹陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所武汉430030

目的研究大鼠脂肪来源干细胞（rASC）抵抗人血清介导的异种体液性杀伤的作用及其主要机制。方法分离培养SD大鼠ASC，将2～8代的rASC作为实验材料，以大鼠淋巴细胞（rLC）作为对照。采用流式细胞技术，检测两种细胞异种抗原”Gal的表达... 详细信息

目的研究大鼠脂肪来源干细胞（rASC）抵抗人血清介导的异种体液性杀伤的作用及其主要机制。方法分离培养SD大鼠ASC，将2～8代的rASC作为实验材料，以大鼠淋巴细胞（rLC）作为对照。采用流式细胞技术，检测两种细胞异种抗原”Gal的表达情况，体积分数20％正常人血清对两种细胞的杀伤作用、两种细胞分别与正常人血清中天然抗体IgM和IgG的结合情况，以及与正常人血清作用后补体C3c、CAc,CSb-9在两种细胞上的沉积情况。结果成功分离和培养rASC，rASC表面标志检测呈CD44阳性、CD45阴性、CD90阳性及主要组织相容性抗原Ⅱ阴性，并成功诱导rASC向成脂细胞和成骨细胞分化。相对于rLC，rASC对人血清介导的异种体液性杀伤具有明显的抵抗作用，其几何平均荧光强度（Gmean）值为（20．42±2．80）％，低于rLC的（51．84±6．70）Vo（P〈0．01）；rASC上α-Gal的表达量为13．97±0．33，显著低于rLC的24．47±3．03（P〈0．05）；rASC与人血清中IgG和IgM的结合量分别为9．4±2．0和5．73±1．0，显著低于rLC的107．2±4．8和27．49±3．9（P〈0．01）；与正常人血清作用后，rLC可见显著的C3c、CAc和C5b-9沉积（Gmean值分别为1924±509．4、177．3±37．17和37．05±7．4），但rASC仅有较少C3c和CAc沉积（Gmean值分别为294．6±38．02和35．23±3．1），C5b-9沉积几乎为阴性（Gmean值为5．63±1．74），两种细胞间比较，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论rASC能明显抵抗人血清介导的异种体液免疫杀伤作用，其机制可能与rASC低表达异种抗原α-Gal及抑制了补体攻膜复合物形成有关。

关键词：脂肪干细胞体液免疫异种抗原

Over-expression of Heme Oxygenase-1 Does not Protect Porcine Endothelial Cells from Human Xenoantibodies and Complement-mediated Lysis

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2013年第1期33卷 102-106页

作者：张弛王璐钟山王筱啸向莹陈实陈刚 Institute of Organ Transplantation Ministry of Public HealthTongji HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology Department of Urology Fujian Provincial Hospital Institute of Organ Transplantation Tongji HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology Key Laboratory of Organ Transplantation Ministry of Public HealthTongji HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology

Accommodated organs can survive in the presence of anti-organ antibodies and complement. Heme oxygenase-1 （HO-1） is essential to ensure accommodation in concordant xenotransplant models. However, whether induction of HO-1 over-expression could protect porcine endothelial cells （PECs） against human xenoantibodies and complement-mediated lysis and induce an in vitro accommodation is still unknown. The SV40-immortalized porcine aorta-derived endothelial cell line （iPEC） was pre-incubated with 20, 50, or 80 μmol/L of cobalt-protoporphyrins IX （CoPPIX） for 24 h, and the HO-1 expression in iPECs was analyzed by using Western blotting. CoPPIX-treated or untreated iPECs were incubated with normal human AB sera, and complement-dependent cytotoxicity （CDC） was measured by both flow cytometry and lactate dehydrogenase （LDH） release assay. In vitro treatment with CoPPIX significantly increased the expression of HO-1 in iPECs in a dose-dependent manner. Over-expression of HO-1 was successfully achieved by incubation of iPECs with either 50 or 80 μmol/L of CoPPIX. However, HO-1 over-expression did not show any protective effects on iPECs against normal human sera-mediated cell lysis. In conclusion, induction of HO-1 over-expression alone is not enough to pro- tect PECs from human xenoantibodies and complement-mediated humoral injury. Additionally, use of other protective strategies is needed to achieve accommodation in pig-to-primate xenotransplantation.

关键词： heme oxygenase-1 porcine endothelial cells complement-dependent cytotoxicity xenotransplantation

小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞诱导同种幼稚T淋巴细胞分化的研究

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中华器官移植杂志 2014年第2期35卷 117-120页

作者：赵越王璐阮永乐王筱啸向莹王军祥陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植武汉430030

目的研究小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞（imDC）诱导同种幼稚T淋巴细胞分化为调节性T淋巴细胞（Treg细胞）及辅助性T淋巴细胞（TH）1、TH2和TH17的能力。方法培养Balb／c小鼠骨髓来源树突状细胞（DC），加入脂多糖刺激DC成熟。分别将inf... 详细信息

目的研究小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞（imDC）诱导同种幼稚T淋巴细胞分化为调节性T淋巴细胞（Treg细胞）及辅助性T淋巴细胞（TH）1、TH2和TH17的能力。方法培养Balb／c小鼠骨髓来源树突状细胞（DC），加入脂多糖刺激DC成熟。分别将inff）C与成熟DC（mDC）与同种C57BL／6小鼠幼稚T淋巴细胞共同培养，用酶联免疫斑点法检测Tn1类细胞因子[γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素（IL）-2]、TH2类细胞因子（IL-4和IL-10）、TH17类细胞因子（IL-17）的分泌情况。imDC和miX；分别与同种幼稚T淋巴细胞在加入IL-2及转化生长因子B，的条件下共同培养，用流式细胞术检测T淋巴细胞中Treg细胞比例。结果分别与imDC或mDC共同培养后，T淋巴细胞中分泌IFN-γ细胞的数量分别为（11．67±2．18）／2×105个细胞和（182．00±23．71）／2×105个细胞（P〈0．01），分泌．IL-2细胞的数量分别为（26．67±2．96）／2×105个细胞和（318．30±18．62）／2×105个细胞（P〈0．01），分泌IL-4细胞的数量分别为（17．00±3．78）／2×105个细胞和（45．33±3．48）／2×105个细胞（P〈0．01），分泌IL-10细胞的数量分别为（7．00±1．00）／2×105个细胞和（158．70±10．90）／2×105个细胞和（P〈0．001），分泌IL-17细胞的数量为（0．66±0．33）／2×105个细胞和（238．30±24．39）／2×105个细胞（P〈0．001）。imDC诱导产生的Treg细胞占（22．70±1．53）％，高于mDC诱导产生的（5．42±1．27）％（P〈O．001）。结论imDC诱导同种幼稚T淋巴细胞较多分化为Treg细胞，而较少分化为TH1、TH2和TH17细胞。

关键词：树突细胞移植耐受 T淋巴细胞,调节 T淋巴细胞,辅助诱导