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CHOP和Caspase-12在脊髓损伤大鼠模型中表达改变的研究

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CHOP和Caspase-12在脊髓损伤大鼠模型中表达改变的研究

作者：王章富浙江大学

学位级别：硕士

研究背景:脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）可导致终身残疾和功能障碍,造成沉重的家庭和社会负担,一般认为,脊髓损伤包括原发性损伤和继发性损伤:原发性损伤是指脊髓遭受机械性外力后瞬间发生的损伤,而继发性损伤是指在原发性损伤基... 详细信息

研究背景:脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）可导致终身残疾和功能障碍,造成沉重的家庭和社会负担,一般认为,脊髓损伤包括原发性损伤和继发性损伤:原发性损伤是指脊髓遭受机械性外力后瞬间发生的损伤,而继发性损伤是指在原发性损伤基础上发生的多种因素参与的序列性组织自毁性破坏的过程。脊髓损伤的最终结局不但取决于原发机械损伤,更与继发损伤的发展程度密切相关。继发性SCI一直是困扰医学专家的世界性难题之一,目前关于继发性损伤的机制尚未完全阐明,而研究也已证实,当严重的或长时间的内质网应激损伤了内质网的功能时,细胞将出现凋亡,以去除受损伤的细胞。学者发现内质网应激参与了许多疾病的发生和发展,例如阿兹海默症、帕金森病、肿瘤等病变。由内质网应激诱发的凋亡主要由CHOP/GADD153基因的激活转录以及内质网特有的半胱氨酸蛋白酶caspase-12的激活而诱发。CHOP/GADD153是转录因子家族C/EBP成员之一,在正常生理状态下基本检测不到,但在内质网应激时,被显著诱导表达,参与调节下游凋亡相关基因的表达。Caspase-12是内质网膜上的组成性蛋白,在发生内质网应激时经过特定位点裂解激活,引发细胞凋亡。我们有理由认为,脊髓受到创伤后,产生强烈的内质网应激,最终引起神经元的各种功能障碍,直至产生了神经元的凋亡,但在国内尚未见报导。本研究通过制作大鼠急性脊髓损伤模型,观察脊髓急性损伤后神经细胞CHOP和Caspase-12的表达情况,从而进一步探讨内质网应激反应在脊髓损伤中可能的作用机制。目的:观察大鼠脊髓机械性损伤后（spinal cord injury,SCI）损伤处脊髓CHOP、Caspase-12的表达变化,以探讨脊髓损伤过程中内质网应激与神经细胞凋亡的关系。材料和方法:健康成年SD大鼠20只,雌雄不拘,体重150g～200g,由浙江大学动物实验中心提供。动物随机分为两组:脊髓损伤组10只;假手术对照组10只。采用Allen氏WD（weight drop,WD）技术制作大鼠脊髓损伤模型;假手术对照组,只作全椎板切除不做脊髓打击。运用BBB评分、形态学观察和免疫组化、Westem-blot等方法,观察脊髓打击损伤12小时后,大鼠运动功能的改变、脊髓的病理变化、CHOP和Caspase-12的表达变化。采用UTHSCSA Image Tools 3.0图像分析处理系统进行分析,统计各张切片单位面积内（mm）CHOP和Caspase-12阳性细胞的数量和光密度。BIO-RAD的软件Quantity one测定并用相对灰度值表示CHOP和Caspase-12蛋白的表达量,SPSS统计分析软件对所得数据进行分析。结果:1.脊髓损伤12 h后,损伤组大鼠均出现截瘫,出现严重运动功能障碍,BBB功能评分为0～1分不等,假手术对照组运动自如,未出现任何功能障碍,评分为21分。2.HE染色观察发现损伤段脊髓出现不同程度的细胞肿胀,神经元退行性变及胶质细胞逐渐增生。脊髓灰质中有空泡形成,并有大量炎性细胞浸润。3.免疫组化结果显示脊髓损伤12 h后,CHOP和Caspase-12在损伤段脊髓表达明显增加,其单位面积内（mm）CHOP阳性细胞的光密度和平均数量分别为:168±12.5和6.3±1.2/mm;Caspase-12阳性细胞的光密度和平均数量分别为:185±11.2和8.7±2.5/mm。假手术组则分别为:120.4±5.6和2.9±0.5/mm;113.1±7.4和3.5±1.2/mm,两组有显著性差异（P＜0.01）。4.Western-blot的结果和上述结果一致,损伤12 h后CHOP和Caspase-12的表达结果条带与标准蛋白分子量相对比,相对吸光度比值为175.6±20.5%和231.3±17.2%,显著高于对照组（P＜0.01）。结论:1.在国内首次发现CHOP和Caspase-12在机械性损伤动物模型中损伤脊髓处的表达较对照组显著增高（P＜0.01）;2.在机械性损伤动物模型中,验证了脊髓损伤过程中内质网应激参与了损伤处脊髓神经元的凋亡,通过抑制CHOP和Caspase-12的表达可能是阻止脊髓损伤后内质网应激介导细胞凋亡的潜在治疗靶点。

关键词：脊髓损伤 CHOP Caspase-12 内质网应激大鼠

Caspase-12在大鼠急性脊髓损伤中的表达

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中华急诊医学杂志 2011年第2期20卷 181-183页

作者：顾传龙朱晓庆王章富张晓明浙江大学医学院基础医学系杭州310058 浙江省台州医院骨科

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）包括原发性损伤和继发性损伤,前者是脊髓遭受机械性外力损伤后瞬间引起,后者是在原发损伤基础上发生的多种因素参与的序列性组织自毁性破坏的过程.

关键词：急性脊髓损伤 Caspase-12 大鼠继发性损伤原发性损伤机械性

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胸廓出口综合征的诊断治疗进展

中国骨伤 2019年第2期32卷 190-194页

作者：项杰陈肖肖王章富陈伟富陈海啸浙江省台州医院浙江临海317000

胸廓出口综合征(thoracic outlet syndrome,TOS)是指臂丛神经或者锁骨下动脉或者锁骨下静脉在胸廓出口受到卡压而出现的一些列症状。可分为神经型TOS、静脉型TOS和动脉型TOS,其中神经型TOS最为常见。TOS的临床表现非常多样,并且缺乏确... 详细信息

胸廓出口综合征(thoracic outlet syndrome,TOS)是指臂丛神经或者锁骨下动脉或者锁骨下静脉在胸廓出口受到卡压而出现的一些列症状。可分为神经型TOS、静脉型TOS和动脉型TOS,其中神经型TOS最为常见。TOS的临床表现非常多样,并且缺乏确诊性的检查方法,因此诊断应结合详细的病史、查体及相关的辅助检查。保守治疗和手术治疗均适用于TOS,并且都能获得较好的预后。神经型TOS首选保守治疗,对于有症状的血管型TOS和保守治疗失败的神经型TOS,应尽早手术。

关键词：胸廓出口综合征诊断治疗综述文献

TLR4/MyD88/NF-κB通路基因及相关炎症因子在继发性脊髓损伤患者中的表达

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浙江大学学报（医学版） 2019年第6期48卷 609-616页

作者：米爽吴燕君洪正华王章富冯兴兵郑光彬浙江省台州医院脊柱外科

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/NF-κB通路基因及相关炎症因子TNF-α、IL-12、IL-6在继发性脊髓损伤(SSCI)患者中的表达及与预后的相关性。方法:回顾性分析2017年7月至2018年6月浙江省台州医院收治的105例SSCI患者及4... 详细信息

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/NF-κB通路基因及相关炎症因子TNF-α、IL-12、IL-6在继发性脊髓损伤(SSCI)患者中的表达及与预后的相关性。方法:回顾性分析2017年7月至2018年6月浙江省台州医院收治的105例SSCI患者及40名健康体检者的临床资料。根据Frankel脊髓损伤分级评估结果将SSCI患者分为完全损伤组和不完全损伤组,根据日本矫形外科学会(JOA)患者神经功能改善率将SSCI患者分为预后优良组和预后不良组。对比SSCI患者与健康体检者、完全损伤组与不完全损伤组、预后优良组与预后不良组外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达及血清TNF-α、IL-12、IL-6水平;采用Logistic回归分析法分析导致SSCI患者预后不良的危险因素,并采用Pearson相关性分析法分析JOA改善率与上述指标的相关性。结果:SSCI患者PBMC中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达量及血清TNF-α、IL-12、IL-6水平均高于健康体检者(均P<0.01),完全损伤组上述指标均高于不完全损伤组,且预后不良组高于预后优良组(均P<0.01)。预后不良组Frankel分级A级、脊髓水肿或出血、脊髓损伤长度超过4 cm患者的比例均高于预后优良组(均P<0.01),且经Logistic回归分析证实Frankel分级、脊髓水肿或出血、脊髓损伤长度及PBMC中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA相对表达量、血清TNF-α、IL-12、IL-6水平均是导致SSCI患者预后不良的危险因素(P<0.05或P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,JOA改善率与PBMC中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA相对表达量以及血清TNF-α、IL-12、IL-6水平均呈负相关(P<0.05或P<0.01)。结论:TLR4/MyD88/NF-κB通路激活及其相关炎症因子TNF-α、IL-12、IL-6表达上调参与SSCI疾病进展且与神经炎症损伤关系密切,可作为评估SSCI患者预后的参考指标。

关键词： Toll样受体4 核因子κB 髓样分化因子88 脊髓损伤基因表达预后

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颈椎黄韧带囊肿一例

中华外科杂志 2020年第6期58卷 475-477页

作者：米爽吴燕君徐伟洪正华王章富浙江省台州医院脊柱外科 317000

女性,66岁,因"行走不稳7年,双下肢麻木无力加重1周"于2018年6月8日入院。患者7年前无明显诱因出现行走不稳,转身困难;1周前出现双下肢麻木、无力,不能行走,双上肢无明显症状,无明显排便、排尿困难或大小便失禁,无鞍区麻木、晨僵,无关节... 详细信息

女性,66岁,因"行走不稳7年,双下肢麻木无力加重1周"于2018年6月8日入院。患者7年前无明显诱因出现行走不稳,转身困难;1周前出现双下肢麻木、无力,不能行走,双上肢无明显症状,无明显排便、排尿困难或大小便失禁,无鞍区麻木、晨僵,无关节红肿、发热畏寒等,否认既往头颈部外伤史。患者症状持续不缓解,遂于我院就诊。

关键词：大小便失禁双下肢麻木关节红肿头颈部外伤周前排尿困难晨僵

MKP-1和磷酸化ERK蛋白在急性脊髓损伤大鼠模型中表达的实验研究

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分子细胞生物学报 2008年第3期41卷 207-212页

作者：洪正华陈海啸洪华兴林列王章富浙江省台州医院骨科浙江台州317000

探讨丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)相关蛋白丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶(Mitogen activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)和磷酸化细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinases,ERK)在大鼠脊髓损伤后表达的变化及其意义。20只SD大鼠,随机分为实验组及假手术对照组。实验组采用改良Allen′S打击法制作脊髓损伤动物模型,假手术对照组同法暴露脊髓,但不损伤脊髓。2组大鼠术后12h取手术段脊髓,用苏木精——伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化和检测脊髓标本损伤段的MKP-1和磷酸化ERK蛋白表达的差异。实验组脊髓HE染色显示存在大量出血坏死后形成的囊腔,组织和神经细胞水肿以及神经纤维溶解消失。免疫组化和Western Blot结果发现,术后第12h实验组MKP-1蛋白的表达减少,同时磷酸化ERK-1蛋白的表达量却明显增加,差别有显著性意义(P<0.01)。脊髓组织受重物打击后可下调MKP-1蛋白的表达,同时显著增加磷酸化ERK蛋白,而这可能是脊髓损伤的机制之一。

关键词：脊髓损伤 MKP-1 ERK 大鼠

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颈椎二次手术探讨和预防

颈椎二次手术探讨和预防

2016年浙江省骨科学学术年会

作者：王章富浙江省台州医院

目的探讨颈椎二次手术的种类和原因,并确定相应的预防措施。方法 2010年3月至2016年7月,我院共开展颈椎手术1860例,其中二次重返手术18例,占0.97%,二次重返手术的原因,切口血肿7例,脑脊液漏3例,内固定调整4例,食道瘘3例,计划外拆内固定... 详细信息

目的探讨颈椎二次手术的种类和原因,并确定相应的预防措施。方法 2010年3月至2016年7月,我院共开展颈椎手术1860例,其中二次重返手术18例,占0.97%,二次重返手术的原因,切口血肿7例,脑脊液漏3例,内固定调整4例,食道瘘3例,计划外拆内固定1例。结果经二次重返手术后,22例患者获得较好效果,2例患者死亡。结论随着颈椎外科技术的不断提高,颈椎手术安全性较高;出现颈椎手术相关并发症强调早期及个体化治疗。

关键词：颈椎手术并发症二次手术

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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经皮椎体成形术穿刺失误致并发症的治疗

中华骨科杂志 2016年第17期36卷 1107-1113页

作者：林鹏洪正华陈海啸王章富浙江省台州医院骨科台州317000

目的探讨骨质疏松性椎体压缩性骨折行经皮椎体成形术（percutaneous vertebroplasty，PVP）时穿刺失误所致并发症的治疗方法。方法回顾性分析2011年12月至2014年11月收治3位骨质疏松性椎体压缩性骨折PVP术后出现并发症行翻修手术患者的... 详细信息

目的探讨骨质疏松性椎体压缩性骨折行经皮椎体成形术（percutaneous vertebroplasty，PVP）时穿刺失误所致并发症的治疗方法。方法回顾性分析2011年12月至2014年11月收治3位骨质疏松性椎体压缩性骨折PVP术后出现并发症行翻修手术患者的病历资料，均为女性，年龄71-82岁，平均78岁。1例患者因“骨质疏松性T12椎体压缩性骨折”，PVP术后出现椎管内骨水泥外漏致左侧腹部束带感、左腹股沟区痛触觉减退，1年后行“前路减压、骨水泥取出及内固定术”。1例患者因“骨质疏松性L1椎体压缩性骨折”，PVP术后出现椎管内骨水泥外漏致腹部及双下肢疼痛、双下肢肌力下降以及痛、触觉减退，再次行“后路减压、骨水泥取出及内固定术”。1例患者因“骨质疏松性T12椎体压缩性骨折”，PVP术后出现椎管内血肿致两下肢肌力0级，感觉障碍，再次行“后路椎板减压、椎管内止血及血肿清除术”。再次术后随访21～29个月，平均24．7个月，观察患者恢复情况，并分析出现并发症的原因。结果1例患者翻修术后腹部束带感消除，左侧腹股沟区痛、触觉改善，随访21个月内固定无松动；1例患者术后腹部及双下肢疼痛缓解，双下肢肌力恢复至4级，双下肢痛触觉恢复正常，随访29个月内固定无松动；1例患者术后双下肢肌力、感觉略恢复，同时残留双下肢疼痛，一直未完全缓解，患者在术后2年死亡。结论骨质疏松性椎体压缩性骨折行PVP术后出现脊髓受压的并发症，虽然翻修手术难度大，风险高，但只要通过合适的手术方式进行翻修可以获得良好的治疗效果。

关键词：椎体成形术脊柱骨折骨质疏松性骨折手术后并发症再手术

后路固定+前路胸腔镜辅助下病灶清除植骨融合治疗胸椎结核

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后路固定+前路胸腔镜辅助下病灶清除植骨融合治疗胸椎结核