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干扰素基因刺激因子STING构象锁定纳米抗体的发现与检验应用

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干扰素基因刺激因子STING构象锁定纳米抗体的发现与检验应用

作者：廖家铃湖北医药学院

学位级别：硕士

目的:本研究拟发现靶向干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)的高亲和力“构象锁定纳米抗体”,用以识别激活/静息状态的STING蛋白,尝试解析纳米抗体与不同构象STING结合时的表位关系,并对细胞中处于不同状态的STIN... 详细信息

目的:本研究拟发现靶向干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)的高亲和力“构象锁定纳米抗体”,用以识别激活/静息状态的STING蛋白,尝试解析纳米抗体与不同构象STING结合时的表位关系,并对细胞中处于不同状态的STING进行定位和相对定量分析,为STING相关的疾病诊断、药物筛选、靶向治疗和作用机制研究提供工具与依据。方法:***蛋白的表达及纯化:利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和无缝克隆技术将STING基因连接到表达载体p RFSDuet-1中,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株后,获得N端含有His-SUMO标签的可溶性蛋白表达菌株,依次利用Ni-NTA亲和层析与凝胶过滤层析对蛋白样品进行分离和纯化,随后用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)进行纯度鉴定。***纳米抗体的筛选:通过两轮磁性细胞分选和两轮流式细胞分选后,再通过流式细胞分析对酵母表面展示的单克隆抗体进行分析,提取阳性克隆的酵母基因,经PCR获得目标纳米抗体的序列。***纳米抗体的制备:利用PCR及无缝克隆技术,将7个纳米抗体序列连接到表达载体p Qlink-NB上,随后转化入大肠杆菌WK6菌株中,使纳米抗体以可溶性蛋白的形式高表达于细菌周质腔中,将周质腔中的可溶性纳米抗体抽提出来后,通过Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤层析进行纯化,并用SDS-PAGE验证纳米抗体的纯度。***构象锁定纳米抗体的验证:将获得的纳米抗体通过酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和共孵后凝胶过滤层析的方式,验证其与抗原STING的亲和力,随后经流式细胞分析及表面等离子共振实验验证其构象选择性。5.抗原抗体复合物分子机制研究:将具有构象选择性的纳米抗体与抗原STING按1:1.5比例共孵后,利用凝胶过滤纯化的方法获得二者的复合物并SDSPAGE验证复合物的纯度,随后用坐滴法对复合物的结晶条件进行筛选。6.基于构象锁定纳米抗体的免疫荧光检测:将具有构象选择性的纳米抗体经FITC标记后,制备成荧光抗体,并利用荧光共聚焦显微镜检测其在THP-1细胞中识别抗原STING的能力。结果:***蛋白的表达及纯化:成功表达并纯化了抗原STING,获得了高纯度的STING样品。***纳米抗体的筛选:获得了7个不同序列的STING亲和力纳米抗体序列,分别命名为Nb1-7。***纳米抗体的制备:纳米抗体Nb1-7均能以可溶性蛋白形式进行原核表达,且纯化后的Nb1-7均具有良好纯度。***构象锁定纳米抗体的验证:经ELISA验证,Nb1-7均可与STING结合;仅Nb-4与STING在共孵后经凝胶过滤纯化仍稳定结合,且Nb-4具有靶向STING的构象选择性。5.抗原抗体复合物分子机制研究:获得了STING与Nb-4的高纯度结合复合物,并获得了复合物共晶,但晶体质量不佳,未达到X-射线衍射的要求。6.基于构象锁定纳米抗体的免疫荧光检测:成功获得了异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的构象锁定纳米抗体FITC-Nb-4,此抗体能够对THP-1细胞中的抗原STING进行识别和定位,并且半定量发现,此纳米抗体能够辨别细胞内抗原STING的不同构象。结论:成功筛选获得STING构象锁定纳米抗体Nb-4,并对其进行了初步研究,成功将其应用于THP-1细胞中STING的免疫荧光检测,为STING相关的抗肿瘤机制研究及STING相关的疾病诊断提供了新的研究工具。

关键词： STING 抗体筛选纳米抗体结构生物学免疫荧光

考虑多灵活资源的虚拟电厂频率响应特性建模方法

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电力自动化设备 2024年

作者：石正朱超常悦铃许寅北京交通大学电气工程学院国网浙江省电力有限公司经济技术研究院

为适应直流受端区域电网的双高化发展趋势，针对虚拟电厂（VPP）辅助大电网进行紧急频率控制的问题，提出了一种考虑多灵活资源的VPP频率响应特性建模方法。首先，设计了VPP参与紧急频率控制的“集中-分散式”分层控制架构。其次，分析... 详细信息

为适应直流受端区域电网的双高化发展趋势，针对虚拟电厂（VPP）辅助大电网进行紧急频率控制的问题，提出了一种考虑多灵活资源的VPP频率响应特性建模方法。首先，设计了VPP参与紧急频率控制的“集中-分散式”分层控制架构。其次，分析了多类型灵活资源的频率响应特性，构建VPP的系统频率响应模型及等值模型。然后，基于逐步线性规划算法，提出一种VPP频率响应模型参数估计方法，以兼顾模型的准确性和计算效率。最后，基于PSD-BPA通过对三区域直流受端区域电网仿真测试验证了所提方法的准确性，且参数估计结果具有保守性，能够防止在紧急频率控制决策中系统误判。

关键词：虚拟电厂紧急频率控制频率响应模型参数估计多灵活资源

基于sEMG的柔性下肢外骨骼协同控制方法研究

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基于sEMG的柔性下肢外骨骼协同控制方法研究

作者：邓福铃重庆交通大学

学位级别：硕士

随着人口老龄化的加剧和各种运动损伤的增加,康复医学在医疗领域中的地位日益突出。医用康复外骨骼机器人作为康复医学与机器人技术的完美结合,广泛应用于康复医疗,相比传统康复训练,其对于提高康复效率、减少医护人员的负担、降低康复... 详细信息

随着人口老龄化的加剧和各种运动损伤的增加,康复医学在医疗领域中的地位日益突出。医用康复外骨骼机器人作为康复医学与机器人技术的完美结合,广泛应用于康复医疗,相比传统康复训练,其对于提高康复效率、减少医护人员的负担、降低康复过程的风险有着不可忽视的作用。目前市场上大多数医疗康复外骨骼机器人采用电机驱动,为康复初期的患者提供被动助力。在这一阶段,由于患者肌力较弱,外骨骼起到引导作用,带动患者按照设定的轨迹进行运动。然而,康复后期患者肌力逐渐恢复,患者会主动地参与训练。在这种情况下,患者与外骨骼之间可能会产生较大的耦合力,而传统的电机驱动由于其强刚性,有可能在训练中对患者造成意外伤害。针对康复后期患者的特殊需求,本文设计了一种柔性外骨骼协同控制系统。通过将柔性驱动器—气动肌肉与人体运动意图识别技术—表面肌电信号相结合,使外骨骼更加柔和、自然地与患者的运动相协调,减少不必要的耦合力,降低二次伤害的风险,具体研究内容如下:首先,设计气动肌肉驱动的康复外骨骼机器人。依据人体下肢运动机理及关节角度特性出发完成外骨骼的整体结构设计,并对结构进行运动学与动力学分析,搭建Adams虚拟仿真平台,对建立的动力学模型进行验证,证明外骨骼设计可行。其次,提出KPCA-LSTM网络模型对下肢关节角度进行预测。采集的表面肌电信号(s EMG)通过预处理后,提取时域特征值,通过核主成分分析(KPCA)与长短期记忆神经网络(LSTM)建立特征值与下肢关节转角之间的映射关系模型。将模型与径向基神经网络(RBF)、反向传播神经网络(BP)和不结合KPCA的LSTM神经网络做出对比,证明KPCA-LSTM的神经网络角度预测精度更高,时间更短。然后,建立气动肌肉的三元素模型,并提出基于模糊补偿的鲁棒自适应模糊滑模控制算法对气动肌肉关节进行控制。针对不同型号气动肌肉建模误差较大,采用实验方法建立所选气动肌肉的三元素模型。同时,气动肌肉本身的非线性和人机之间的耦合力等因素造成的外加干扰使得关节角度控制精度低,稳定性差。因此,设计针对非线性系统和外加干扰的模糊补偿的鲁棒自适应模糊滑模控制器,通过与传统非线性控制器滑模控制作对比其有效抑制了高频抖动和迟滞现象,并增强了系统的鲁棒性和稳定性,控制效果有明显提升。最后,搭建协同运动控制实验平台,包括肌电数据采集系统、运动控制系统、驱动系统,PC上位机控制系统。完成从肌电采集到角度预测到控制输出一体的主动控制实验,最后结果表明KPCA-LSTM算法在预测关节角度方面具有较高的准确性和可行性,外骨骼控制器轨迹跟踪平均误差较小,整个系统具有可行性。

关键词：康复下肢外骨骼气动肌肉表面肌电信号 KPCA-LSTM模型协同控制

基于多源遥感数据的甘蔗种植面积提取与长势监测研究

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基于多源遥感数据的甘蔗种植面积提取与长势监测研究

作者：张焕铃桂林理工大学

学位级别：硕士

骑行感知体验下的炮台历史风貌区街道空间景观设计

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骑行感知体验下的炮台历史风貌区街道空间景观设计

作者：邓铃娑内蒙古农业大学

学位级别：硕士

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《历代名臣奏议》（宋初）语词研究

《历代名臣奏议》（宋初）语词研究

作者：漆玉铃西南科技大学

学位级别：硕士

基于SDN的物联网安全通信系统的设计与实现

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基于SDN的物联网安全通信系统的设计与实现

作者：叶铃云北京邮电大学

学位级别：硕士

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活性炭过滤对黄酒品质的影响

食品与发酵工业 2024年第4期50卷 31-36页

作者：谢铃刘双平毛健江南大学生物工程学院江苏无锡214122 粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心(江南大学) 江苏无锡214122 江南大学(绍兴)产业技术研究院浙江绍兴312000 国家黄酒工程技术研究中心浙江绍兴312000

黄酒生产贮存过程中酒体经常会产生异杂味和少许沉淀等。活性炭因其强大的吸附能力,广泛应用于酒类的后期处理。该实验将黄酒经过酒类活性炭过滤,不仅去除了异杂味,且对于黄酒中的一些非喜好代谢物质产生了吸附作用,例如杂醇、生物胺、... 详细信息

黄酒生产贮存过程中酒体经常会产生异杂味和少许沉淀等。活性炭因其强大的吸附能力,广泛应用于酒类的后期处理。该实验将黄酒经过酒类活性炭过滤,不仅去除了异杂味,且对于黄酒中的一些非喜好代谢物质产生了吸附作用,例如杂醇、生物胺、嘌呤、氨基甲酸乙酯等物质。结果表明,活性炭添加量越大,对以上物质的吸附量就越大,但对原酒样的色度和风味损失也越大。最佳吸附条件为:活性炭添加量10 g/L,吸附温度35℃、吸附时间9 h。此时黄酒感官评价得分85分(初始82分),总酸降低27.96%,且氨基酸态氮损失不大。杂醇降低14.22%,生物胺降低31.10%,嘌呤降低27.78%,氨基甲酸乙酯降低30.77%,酯类风味物质保持较好。该研究可对黄酒工业化生产过程中品质的控制提供一种便捷有效的方法。

关键词：活性炭黄酒杂醇生物胺嘌呤氨基甲酸乙酯

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马克思生态正义思想研究

马克思生态正义思想研究

作者：靳美铃吉林大学

学位级别：硕士

自古以来,人类对与自然的关系进行了持续不断的关注与研究,从最早的原始社会时期的刀耕火种,到现代社会的物质文明,这一关系始终是人类社会发展中的焦点之一。随着时间的推移,生态问题由于其与人类生活息息相关的特殊属性而越来越引起... 详细信息

自古以来,人类对与自然的关系进行了持续不断的关注与研究,从最早的原始社会时期的刀耕火种,到现代社会的物质文明,这一关系始终是人类社会发展中的焦点之一。随着时间的推移,生态问题由于其与人类生活息息相关的特殊属性而越来越引起人们的关注。在历史的长河中,学者和思想家们对生态问题进行了深入的研究,其中,马克思的生态正义思想就是一个内容丰富、结构完整的思想体系。它要求人们的行为应符合生态平衡原理,在尊重和保护自然的前提下,公平正义地参与社会产品的分配和生产。在使用资源时要考虑到未来世代的利益,不仅满足当前的需求,也要保护后代人的权益,从而达到可持续发展的要求。马克思的生态正义思想不仅是一种理论框架,也是一种行动指南。通过遵循这一观点,我们能够更好地保护和改善环境,实现人与自然的和谐共生,为未来世代留下一个更美好的世界。工业革命以来,资本所到之处无不是对自然资源的征服与掠夺,其结果是人与自然之间的生态失衡日趋严重,人类赖以生存的自然环境遭受前所未有的巨大破坏,进而影响了人类自身的生存和发展。由于资本主义私有制的存在,生态权利往往掌握在少数的资产阶级手中,无产阶级被迫承受坏境破坏的恶果。在今天生态危机日趋全球化的背景下,如何消解人与自然的对立,探索人与自然的相处之道,真正实现人与自然和谐共生,需要以科学的理论为指导。马克思生态正义思想旨在通过保护环境和解决生态问题来确保人们平等的享有生态资源。该问题涉及到资源分配的公平、环境权益的保护以及社会经济的可持续发展等多个方面。马克思生于资本主义蓬勃发展的阶段,大工业生产方式的兴起推动了资本主义社会的迅速繁荣,但同时也导致了工人的生态权利遭到无情的忽视和剥夺,阶层的生态资源分配不公正,资本主义制度固有的内在矛盾和冲突进一步激化。无产阶级开始觉醒,但还缺乏科学的理论指导。与此同时,自然科学的发展也对马克思生态正义思想产生了深远影响,马克思生态正义思想正是在这个时代背景下应运而生。马克思借鉴了古希腊有机整体自然观,超越了德国古典哲学自然观,扬弃了西方正义思想,形成了符合时代发展需要的生态正义思想。马克思生态正义思想历经萌芽探索、推进发展和深化成熟三个阶段,马克思在不同阶段对生态正义问题进行了深入思考,生态正义理念也在马克思思想体系中不断丰富和发展。马克思站在实践唯物主义的立场上,从人与自然的关系以及社会历史发展的视角把握生态正义问题,对资本主义的意识形态、生产方式和技术异化进行了批判。马克思提醒我们关注生态权利和生态资源的分配问题,并强调通过社会变革来实现生态正义的目标。马克思生态正义思想蕴含着生态正义在人与自然关系上的体现、生态正义在资源分配上的体现、生态正义在生产方式上的体现的多重意涵。从理论价值来看,马克思生态正义思想有利于引领和构建有机整体的思维方式、廓清和扬弃生态正义流派的思想、丰富和发展马克思唯物史观。从实践价值来看,马克思生态正义思想为消费观念转化、发展模式变革和人与自然生命共同体构建的实现提供了指导。综上所述,马克思的生态正义思想深入探讨了人与自然、人与人之间的关系,强调了环境保护和自然资源的正义分配对于人类社会持续发展的重要性。马克思的生态正义思想对于解决当前的生态危机和促进可持续发展具有重要的启示意义,我们应该秉持这一思想,推动环境保护和资源分配的公正,以实现人与自然的和谐统一,为未来世代创造一个更加美好的生活环境。

关键词：人与自然生态正义资本批判资源分配