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以聚丙烯腈纤维为载体制备固定化青霉素G酰化酶的研究

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微生物学报 2001年第4期41卷 475-480页

作者：鲜海军王祯祥中国科学院微生物研究所北京100080

以酸部分水解聚丙烯腈纤维为载体 ,以戊二醛为交联剂 ,共价键结合制备了固定化胞外青霉素G酰化酶。当水解后的载体中 NH2 基含量为 690 μmol g和含水量为 64%时 ,对酶蛋白的固定量达 1 0 0mg g以上 ,固定化酶的活力达 2 30 0IU g ,酶... 详细信息

以酸部分水解聚丙烯腈纤维为载体 ,以戊二醛为交联剂 ,共价键结合制备了固定化胞外青霉素G酰化酶。当水解后的载体中 NH2 基含量为 690 μmol g和含水量为 64%时 ,对酶蛋白的固定量达 1 0 0mg g以上 ,固定化酶的活力达 2 30 0IU g ,酶活力总产率为 30 % ,固定化效率为 56%。酶活力的总产率和固定化率随加酶量的增加而降低。该酶可以将浓度为 2 5%～1 2 5%的青霉素G钾盐水解 98%以上。批投青霉素G钾盐为 1 0g,酶负荷为 1 50IU g(PGK) ,经2 0批水解反应后 ,剩余酶活力为 80 %。用二硫基苏醣醇处理固定化酶 ,对水解青霉素G钾盐的操作稳定性有促进作用。固定化酶的室温保存半衰期为 1 30d。用戊二醛和硼氢化钠溶液处理固定化酶后 ,酶活力的室温保存稳定性有所降低。

关键词：青霉素酰化酶固定化酶巨大芽孢杆菌聚丙烯腈纤维载体

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胞外青霉素酰化酶产生菌的选育

微生物学报 1992年第2期32卷 99-104页

作者：王祯祥韩文珍门大鹏王青中国科学院微生物研究所

利用纸片显色方法,从土壤中快速筛选出98株产胞外青霉素酰化酶的菌种,经复筛其中10株酶活力较高,经鉴定均属于巨大芽孢杆菌。经单株分离得46号菌,用这株菌进行了产酶条件的研究,在最适产酶条件下,酶活力比开始提高了3.6倍。在此基础上... 详细信息

利用纸片显色方法,从土壤中快速筛选出98株产胞外青霉素酰化酶的菌种,经复筛其中10株酶活力较高,经鉴定均属于巨大芽孢杆菌。经单株分离得46号菌,用这株菌进行了产酶条件的研究,在最适产酶条件下,酶活力比开始提高了3.6倍。在此基础上又进行了物理化学因素处理,得突变株 UL-81,酶活力达720u/100ml 发酵液。对原株和突变株进行比较,发现UL-81菌落、细胞形态、诱导剂苯乙酸用量及添加时间等明显不同于原株。在500L 罐发酵酶活达820u/100ml 发酵液,为开始酶活的16倍。

关键词：巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶

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聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶性质的研究

微生物学报 1998年第3期38卷 204-207页

作者：韩辉徐冠珠朱丽钊韩文珍王祯祥中国科学院微生物研究所北京100080

将巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium）青霉素酞化酶连接到聚丙烯腈纤维载体上，制成固定化青霉素酰化酶。其表现活力约为2000u／g。水解青霉素G的最适温度为50℃；最适PH为9．0；在PHS．5～10．3、温度50℃以下酶的活力稳定；表观米氏... 详细信息

将巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium）青霉素酞化酶连接到聚丙烯腈纤维载体上，制成固定化青霉素酰化酶。其表现活力约为2000u／g。水解青霉素G的最适温度为50℃；最适PH为9．0；在PHS．5～10．3、温度50℃以下酶的活力稳定；表观米氏常数Ka为1．33×10-8mol／L；最大反应速度Vm为2．564mmol·min-1；苯乙酸为竞争性抑制剂，抑制常数为0．16mol／L。水解10％的青霉素G钾盐溶液，使用20批，保留酶活力80％。

关键词：巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶聚丙烯腈固定化酶

固定化青霉素G酰化酶水解头孢菌素G制备7—ADCA的研究

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微生物学报 1997年第3期37卷 190-195页

作者：徐冠珠韩辉王祯祥高宏庆赵丽中国科学院微生物所北京100080 山东新华制药厂淄博255005

用聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶水解头孢菌素G制备7-ADCA,固定化酶对头孢菌素G的最适pH为9.0,最适温度50℃。在37℃、pH8.0固定化酶对头孢菌素G的表观米氏常数为1.67×10^(-2)mol/L。最大反应速度为3.01mmol·g^(-1)·min^(-1)。头... 详细信息

用聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶水解头孢菌素G制备7-ADCA,固定化酶对头孢菌素G的最适pH为9.0,最适温度50℃。在37℃、pH8.0固定化酶对头孢菌素G的表观米氏常数为1.67×10^(-2)mol/L。最大反应速度为3.01mmol·g^(-1)·min^(-1)。头孢菌素G溶液浓度在2％以上时,对固定化酶有明显的抑制作用。固定化酶水解头孢菌素G的最佳投料浓度为5％～6％,水解时用酶量以每克头孢菌素G投300U以上为好。按上述条件水解头孢菌素G,操作25批后固定化酶保留活力77.8％,7-ADCA平均收率92.68％。

关键词：固定化青霉素酰化酶头孢菌素G 7-ADCA 制备

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大肠杆菌青霉素酰化酶的提纯及其性质的研究

微生物学报 1986年第3期26卷 254-259页

作者：矫庆华张启先王祯祥中国科学院微生物研究所

大肠杆菌(Escherichia coli)AS1.76发酵液经有机溶剂处理,硫酸铵分级,再用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳进行纯化,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的青霉素酰化酶纯品。纯酶作用的最适温度为45—55℃,最适pH为7.0—7.7,在无NIPAB存在下,纯酶... 详细信息

大肠杆菌(Escherichia coli)AS1.76发酵液经有机溶剂处理,硫酸铵分级,再用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳进行纯化,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的青霉素酰化酶纯品。纯酶作用的最适温度为45—55℃,最适pH为7.0—7.7,在无NIPAB存在下,纯酶在45℃以下稳定,但在55℃保温一小时,酶活力残存33.58%,纯酶在pH5.0—8.0稳定。酶作用于重排酸的米氏常数为3.33×10-2g/ml。Ag~+对酶有抑制作用。用聚丙烯酰胺薄层凝胶等电聚焦测定酶的等电点(pI)为6.7—6.8,用SDS凝胶电泳测酶的亚基分子量分别为14300和58900。纯酶具有水解苯甘氨酸甲酯盐酸盐的作用,反应两小时产生12.74mM苯甘氨酸。

关键词：青霉素酰化酶重排酸青霉素G

基于Levenberg-Marquardt方法的内蒙古及邻区地震烈度影响场改进技术

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地震 2017年第3期37卷 117-126页

作者：杨彦明姜立新王祯祥内蒙古自治区地震局呼和浩特010010 中国地震台网中心北京100045

在收集和整理内蒙古及邻近地区1940年以来M_S4.0以上历史震害资料的基础上,对研究区域进行合理分区,选取65次中强地震事件的152条等震线数据,利用椭圆烈度衰减模型,采用Levenberg-Marquardt非线性反演方法,建立内蒙古及邻区的分区地震... 详细信息

在收集和整理内蒙古及邻近地区1940年以来M_S4.0以上历史震害资料的基础上,对研究区域进行合理分区,选取65次中强地震事件的152条等震线数据,利用椭圆烈度衰减模型,采用Levenberg-Marquardt非线性反演方法,建立内蒙古及邻区的分区地震烈度衰减关系,通过与地震灾害评估系统使用的华北地区地震影响场模型进行对比分析,综合分析研究认为,建立分区烈度衰减关系更符合研究区域地震灾害的地域性特点,对于地震灾害快速评估具有重要的参考意义。

关键词：烈度地震影响场衰减关系 Levenberg—Marquardt方法内蒙古地区

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固定化青霉素酰化酶的研究

微生物学报 1992年第3期32卷 212-217页

作者：徐冠珠王祯祥朱丽钊韩辉李庆中中国科学院微生物研究所

将巨大芽孢杆菌胞外青霉素酰化酶通过共价键连接到醋酸纤维素载体上,制成的固定化青霉素酰化酶的表观活力达2000 u/g左右(PDAB 法)。水解10%(W/V)的青霉素 G 钾盐溶液,使用30批,保留活力70%以上。6-氨基青霉烷酸(6-APA)总收率平均达88.... 详细信息

将巨大芽孢杆菌胞外青霉素酰化酶通过共价键连接到醋酸纤维素载体上,制成的固定化青霉素酰化酶的表观活力达2000 u/g左右(PDAB 法)。水解10%(W/V)的青霉素 G 钾盐溶液,使用30批,保留活力70%以上。6-氨基青霉烷酸(6-APA)总收率平均达88.37%。固定化青霉素酰化酶水解青霉素 G 的最适 pH 为9.95,最适温度为55℃,表观米氏常数为1.093×10^(-2)mol/L,在 pH 5.8—10.7,温度45℃以下酶的活力稳定。

关键词：青霉素酰化酶固定化酶

α-氨基酸酯水解酶产生菌的筛选及其合成头孢立新的研究

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微生物学报 1990年第3期30卷 238-241页

作者：王媺芝王祯祥乐华爱韩文珍矫庆华中国科学院微生物研究所

酶法合成头孢立新的研究已有不少报道,并对酶的来源、测定方法、特性和应用等作了详细阐述。我们也作了大肠杆菌 AS1.76酶法合成头孢立新的研究,收率为86.9%,但侧链苯甘氨酸甲酯盐酸盐用量较大,且回收困难,阻碍了该法进一步推广。研究... 详细信息

酶法合成头孢立新的研究已有不少报道,并对酶的来源、测定方法、特性和应用等作了详细阐述。我们也作了大肠杆菌 AS1.76酶法合成头孢立新的研究,收率为86.9%,但侧链苯甘氨酸甲酯盐酸盐用量较大,且回收困难,阻碍了该法进一步推广。研究发现铜绿假单孢菌 AS1.204用以合成头孢立新可以解决这一问题。

关键词：氨基酸酯水解酶假单孢菌

巨大芽孢杆菌BP931胞外青霉素G酰化酶的产生条件

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微生物学报 1996年第3期36卷 193-198页

作者：崔福绵韩文珍韩辉朱丽钊王祯祥中国科学院微生物研究所北京100080

研究了巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)BP 931胞外青霉素G酰化酶的产生条件。菌在由葡萄糖0.7％,氮源1号0.5％,酵母膏1.0％和苯乙酸0.8％组成的液体培养基(灭菌前pH9.0,灭菌后pH8.0)中,28℃振荡培养44h。以6-硝基-3-苯乙酰胺基苯甲... 详细信息

研究了巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)BP 931胞外青霉素G酰化酶的产生条件。菌在由葡萄糖0.7％,氮源1号0.5％,酵母膏1.0％和苯乙酸0.8％组成的液体培养基(灭菌前pH9.0,灭菌后pH8.0)中,28℃振荡培养44h。以6-硝基-3-苯乙酰胺基苯甲酸为底物,培养滤液酶活力为9.0IU/ml。诱导物苯乙酸于培养6h后加入,酶活力可以提高到11.0IU/ml。Ca^(2+)、Al^(3+)、Sn^(4+)、Mn^(2+)和Fe^(2+)离子降低酶的形成;Cu^+和C0^(2+)离子显著抑制菌生长,降低酶的形成;Zn^(2+),Cd^(2+)和Hg^(2+)离子完全抑制菌生长和酶形成。

关键词：巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶产酶条件