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红花黄酮生物合成途径糖基转移酶基因CtUGTs的功能研究

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红花黄酮生物合成途径糖基转移酶基因CtUGTs的功能研究

作者：王璐暖中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

红花(Carthami Flos)作为一种传统的活血化瘀中药,在临床上应用广泛。现代药理研究表明,其主要药效物质是以羟基红花黄色素A(Hydroxysafflower yellow A,HSYA)为代表的查尔酮类化合物和以菸花苷为代表的黄酮醇类化合物,这些化合物均具... 详细信息

红花(Carthami Flos)作为一种传统的活血化瘀中药,在临床上应用广泛。现代药理研究表明,其主要药效物质是以羟基红花黄色素A(Hydroxysafflower yellow A,HSYA)为代表的查尔酮类化合物和以菸花苷为代表的黄酮醇类化合物,这些化合物均具有良好的心脑血管损伤保护活性。黄酮类化合物的生物合成途径已在多种模式植物及农作物中得到广泛研究,但是红花中黄酮类化合物的生物合成途径仍未被完全解析,尤其是HSYA等红花中特有的黄酮糖苷类活性成分生物合成相关的后修饰酶尚不清楚。糖基转移酶(UDP-Glycosyltransferase,UGT)是黄酮糖苷类化合物形成的末端修饰酶,黄酮糖基化的完成与化合物的活性密切相关,因此,深入筛选及研究红花黄酮糖基转移酶,对于阐释红花品质形成的分子机制,定向调控红花品质具有重要意义。本论文基于红花花冠转录组数据库筛选获得58个UGTs基因,基于不同开花时间点花冠基因表达量与代谢组数据库中有效成分含量进行皮尔森相关性分析,发现CtUGT18与HSYA、柚皮素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、苯丙氨酸、Carthamin 5个有效成分的积累量密切相关(r>0.5)。CtUGT25与HSYA、槲皮素、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、木犀草素、芦丁、野黄芩素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、苯丙氨酸9个有效成分积累量密切相关(r>0.5)。克隆获得CtUGT18基因全长1738 bp,其中ORF区域1458 bp,编码485个氨基酸,蛋白分子式CHNOS,蛋白分子量54697.91Da,理论等电点(p I)为5.73;CtUGT25基因全长1746 bp,其中ORF区域1473 bp,编码490个氨基酸,蛋白分子式CHNOS,蛋白分子量55298.90 Da,理论等电点(p I)为5.92。Wo LF PSORT亚细胞定位预测CtUGT18定位在细胞质,CtUGT25定位在细胞核。CtUGT18及CtUGT25均为不稳定的亲水性蛋白且不存在跨膜区域,为非跨膜蛋白。CtUGT18及CtUGT25在红花不同部位表达特征分析结果显示,CtUGT18在根中转录水平较高,CtUGT25在花冠中转录水平较高,且在盛花期基因表达量最高,与红花花冠中黄酮的积累模式相似,推测其参与了花冠中黄酮类化合物的生物合成。为进一步研究CtUGT18及CtUGT25在红花体内功能,将构建好的真核表达载体CtUGT18-p MT39及CtUGT25-p MT39转入农杆菌GV3101,并通过花粉管通道法进行基因转化,获得过表达红花植株CtUGT18-OVX 7株,CtUGT25-OVX 8株。采用q RT-PCR对T代转基因红花植株进行靶标基因表达量分析,CtUGT18-OVX植株中CtUGT18基因表达量提高了2.78倍,CtUGT25-OVX植株中CtUGT25基因表达量提高了2.17倍。UPLC-Q-TOF/MS测定黄酮类化合物含量结果显示,CtUGT18过表达后山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、荭草苷含量显著提高,而山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷含量有所降低,推测CtUGT18主要对在红花体内参与荭草苷、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷的合成;CtUGT25过表达后山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷及HSYA含量均显著提高(p<0.05),说明CtUGT25可能具有底物杂泛性并参与了红花中特有的查尔酮苷类HSYA等化合物的合成。通过构建CtUGT18-p ET28a(+)、CtUGT25-p ET28a(+)原核表达载体,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达CtUGT18及CtUGT25蛋白,基于Auto Dock Vina分子对接蛋白底物预测结果,进行两者体外糖基转移酶功能验证。结果显示CtUGT25具有2个活性口袋,且CtUGT25蛋白可催化槲皮素、柚皮素、芹菜素、山柰酚、木犀草素、2-羟基柚皮素的糖基化反应,具有广泛的催化活性;CtUGT18蛋白对2-羟基柚皮素具有催化活性。综上,本论文筛选获得了2个与红花黄酮类化合物合成密切相关的糖基转移酶基因CtUGT18、CtUGT25,分析了两者的分子特征并通过转基因手段在红花体内进行了功能验证,证明了CtUGT18是山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、荭草苷积累的糖基修饰酶;CtUGT25促进了山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷及HSYA的积累,可能是红花中特有有效成分HSYA生物合成的糖基修饰酶。同时,CtUGT25蛋白对多种黄酮底物均具有催化活性。为下一步通过分子生物技术调控红花的品质,特别是红花中特有成分HSYA等的工业化生产提供重要参考,也为其他植物的相关基因的研究提供资料。

关键词：红花黄酮类化合物糖基转移酶生物合成途径羟基红花黄色素A

羟基红花黄色素A生物合成途径短链还原酶基因的特征及功能研究

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药学实践杂志 2022年第3期40卷 218-225页

作者：王璐暖吴建辉何贝轩张彦洁郭美丽海军军医大学药学系生药学教研室上海200433

目的探究参与红花黄酮类生物合成途径特别是羟基红花黄色素A(HSYA)关键短链脱氢还原酶基因(SDRs)的功能。方法基于红花转录组数据库以及代谢组数据库,筛选参与HSYA生物合成途径的SDRs,用qRT-PCR法分析表达模式。采用无缝克隆技术构建过... 详细信息

目的探究参与红花黄酮类生物合成途径特别是羟基红花黄色素A(HSYA)关键短链脱氢还原酶基因(SDRs)的功能。方法基于红花转录组数据库以及代谢组数据库,筛选参与HSYA生物合成途径的SDRs,用qRT-PCR法分析表达模式。采用无缝克隆技术构建过表达载体,以农杆菌GV3101介导遗传转化云南巍山红花品系,对转基因T_(2)代植株进行阳性验证,并对花冠SDRs的基因表达量进行分析,UPLC-Q-TOF/MS法测定次生代谢物的含量。结果筛选出3个参与HSYA生物合成途径的关键短链脱氢还原酶基因CtSDR1、CtSDR2、CtSDR3,表达量从高到低依次为花冠>叶>茎>根。花冠中表达量随花冠发育逐渐升高。对转基因T_(2)代植株进行阳性验证后的花冠进行qRT-PCR分析发现:与空白对照组相比,转CtSDR3过表达T_(2)代阳性植株花冠中CtSDR3基因的转录水平增加了2~3倍,次生代谢物HSYA的含量提高了7.1%~16.6%(P<0.05)。结论CtSDR3可能参与了红花中黄酮类化合物特别是HSYA的生物合成,为阐释CtSDR3在HSYA生物合成途径中的功能提供了数据支撑。

关键词：短链脱氢还原酶羟基红花黄色素A 红花

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傣族姑娘

早期教育（家教·亲子共玩） 2005年第1期 26-26页

作者：王璐暖曹君包信源不详镇江市红红幼儿园镇江市中国画院

这幅彩笔画构图清新，立意明了，色彩欢快并富有天真浪漫之趣，那画面中央傣族姑娘的舞姿，身边飘动的树叶似彩带一般，还有那伴歌伴舞的小鸟，增添了画面的整体气息，更表现了画面主题的节律和动感。

关键词：《傣族姑娘》美术教学幼儿教育幼儿美术作品评析蜡笔画

流浪动物慈善救助中的“远狗近猫”效应及其机制探析

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心理学报 2024年第6期56卷 777-798,I0009-I0015页

作者：柳武妹王璐兰州大学管理学院兰州730000

已有的亲社会研究都在关注对人的慈善捐赠,关于流浪动物的慈善救助并未有人探讨。由于日常生活中流浪动物救助信息通常会同时呈现动物类型和空间距离,因此本文基于动物类型和空间距离之间的联结来探讨二者对流浪动物救助意愿的影响,以... 详细信息

已有的亲社会研究都在关注对人的慈善捐赠,关于流浪动物的慈善救助并未有人探讨。由于日常生活中流浪动物救助信息通常会同时呈现动物类型和空间距离,因此本文基于动物类型和空间距离之间的联结来探讨二者对流浪动物救助意愿的影响,以及其中的机制和边界条件。通过1个内隐联想测验、1个田野实验和7个不同情景的线上实验和实验室实验,本文发现:猫与近空间距离更匹配;狗与远空间距离更匹配(实验1a、1b)。因此,在近空间距离的情况下,呈现流浪猫(vs.流浪狗)引发人们对流浪动物的更高救助意愿;在远空间距离的情况下,呈现流浪狗(vs.流浪猫)引发人们对流浪动物的更高救助意愿(实验2、3、3S、4、4S、5);加工流畅性是内在中介(实验4、4S、5)。此外,思维模式会调节上述“远狗近猫”效应,也即该效应在基于情感的思维模式下存在但在基于理性的思维模式下消失(实验6)。理论层面,本文关注了流浪动物这一新颖的慈善捐赠对象,验证了动物类型和空间距离的内在联系。本文还识别出了流浪动物救助中的“远狗近猫”效应。实践层面,“远狗近猫”效应可以指导慈善组织和机构根据动物类型和空间距离的匹配来合理呈现救助信息。

关键词： “远狗近猫”效应动物救助加工流畅性思维模式

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直肠癌伴肝转移盆腔放疗策略的思考

中华胃肠外科杂志 2024年第3期27卷 295-299页

作者：王璐李明焕潍坊医学院临床医学院潍坊261053 山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院)放疗科山东第一医科大学(山东省医学科学院) 济南250117

肝脏是直肠癌最常见的转移部位,伴有可切除肝转移患者的生存较好。盆腔放疗已成为直肠癌伴肝转移多学科管理的组成部分。对于伴有不可切除肝转移患者,针对原发灶的姑息放疗能减少出血、梗阻等风险进而改善生活质量。对于伴有可切除肝转... 详细信息

肝脏是直肠癌最常见的转移部位,伴有可切除肝转移患者的生存较好。盆腔放疗已成为直肠癌伴肝转移多学科管理的组成部分。对于伴有不可切除肝转移患者,针对原发灶的姑息放疗能减少出血、梗阻等风险进而改善生活质量。对于伴有可切除肝转移患者,盆腔放疗可有效降低局部复发率、使部分患者免于手术而提高生活质量、甚至提高患者总生存率。目前,对于直肠癌伴肝转移患者盆腔放疗的标准化治疗模式没有达成共识,在如何筛选放疗获益人群、优化多学科协作以及放疗方案(长程放疗比短程放疗)、器官保留等方面成为研究热点。本文对近年来盆腔放疗在直肠癌伴肝转移中的研究进展作一综述,为直肠癌伴肝转移患者个体化盆腔放疗提供思路。

关键词：直肠肿瘤肝转移盆腔放疗短程放疗

明末清初儒家修身方式的传播与递嬗——以静坐为中心的考察

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清史研究 2024年第2期 88-99页

作者：王璐南京大学马克思主义学院暨中华优秀传统文化研究中心南京210008

随着明清之际儒学思想的转型,作为理学重要修身方式之一的静坐也发生了变化,具体表现为以下几方面:其一,面对理学静坐的局限及佛、道教的挑战,明末东林学者着手在理学话语体系下建构日常化、规程化、仪式化的儒门静坐法;其二,清初地方... 详细信息

随着明清之际儒学思想的转型,作为理学重要修身方式之一的静坐也发生了变化,具体表现为以下几方面:其一,面对理学静坐的局限及佛、道教的挑战,明末东林学者着手在理学话语体系下建构日常化、规程化、仪式化的儒门静坐法;其二,清初地方儒者通过集体化的运作方式,将静坐改造为一种宣传理学思想及塑造自我认同的公共仪式;其三,在清初礼学复兴的背景下,理学家对静坐进行礼学改造,最终在颜李学派那里形成取代静坐的“习恭”之法。考察明末清初以静坐为代表的儒家修身方式,有助于揭示这一时期理学传播与演化的丰富形态,并对已有的研究范式进行反思。

关键词：明清儒学静坐修身工夫礼学复兴

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高温色釉在“荷花”题材中的运用研究

高温色釉在“荷花”题材中的运用研究

作者：刘林暖景德镇陶瓷大学

学位级别：硕士

“泥沙入手经抟埴,光色便与寻常殊”。陶瓷是中华瑰宝,蕴含着深厚的中华文化内涵,是中华文化的符号,代表着中华民族的形象。陶瓷绘画作为陶瓷文化中的一个重要组成部分,历经岁月的洗礼和创新发展,形成了独具特色的艺术风格,最终成为独... 详细信息

“泥沙入手经抟埴,光色便与寻常殊”。陶瓷是中华瑰宝,蕴含着深厚的中华文化内涵,是中华文化的符号,代表着中华民族的形象。陶瓷绘画作为陶瓷文化中的一个重要组成部分,历经岁月的洗礼和创新发展,形成了独具特色的艺术风格,最终成为独立的纯艺术画种。特别是高温颜色釉的烧成和应用,使陶瓷绘画有了更丰富的艺术表现方式。荷花是中国绘画作品中常见的题材,因其独特的精神价值和文化内涵成为了文人心中高洁的文化符号,将荷花题材与高温颜色釉相结合,不仅能彰显颜色釉色彩斑斓的釉色之美,更能为绘画作品注入自然不拘的生命力量。本文首先对荷花的文化内涵及绘画中的表现形式进行深度调研分析,为后续的绘画创作提供了理论支撑和创作思路。其次,掌握高温色釉的材料特性,为更好地创作出陶瓷绘画作品奠定基础。研究的重点聚焦于高温色釉在荷花瓷画中的实践应用,通过对不同釉料及不同施釉技法的运用,展现出荷花的丰富色彩与生动形象。最后,结合个人创作实践,从色釉之美、自然之美、意向之美等方面阐述高温色釉在荷花题材绘画中的实际应用与创新意义。

关键词：荷花题材高温色釉运用研究诗意表达

数字贸易视域下直播平台国际版权义务规则新趋势及我国因应

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广西社会科学 2024年第2期 116-123页

作者：王璐广东金融学院法学院广东广州510521

伴随全球数字贸易发展,网络直播突破地域性,直播中的版权侵权情况激增,问题也更为复杂,然而目前国际多边规则对直播平台版权治理缺乏明晰规制,但是区域性平台版权治理规则却不断繁荣,从ACTA到USMCA等区域性规则以及欧盟《版权指令》和美... 详细信息

伴随全球数字贸易发展,网络直播突破地域性,直播中的版权侵权情况激增,问题也更为复杂,然而目前国际多边规则对直播平台版权治理缺乏明晰规制,但是区域性平台版权治理规则却不断繁荣,从ACTA到USMCA等区域性规则以及欧盟《版权指令》和美国DMCA现代化变革规则赋予了网络服务提供者高低不同的版权注意义务,义务规则呈现出“碎片化”及“强趋势”的特点,并且带来了一系列法益失衡的风险以及对新兴国家直播产业发展的抑制后果。当下我国正值直播产业“出海”占领国际市场的重要机遇,针对这种区域性规则的新趋势及其不利影响,我国首先应当破解“碎片化”,理顺当下国际规则中版权义务的核心规则,包括“红旗规则”下一般理性人应知的注意义务、“通知—屏蔽规则”下面向未来审查的注意义务、“一般过滤规则”下有义务预知的注意义务,且这三者呈现出梯度化的义务要求,义务程度逐级增加;其次应当对抗“强趋势”,划清注意义务的合理边界,减轻直播平台的不合理版权注意义务负担,结合直播平台特殊性构建直播平台版权注意义务规则;最后应当以国内法为基础,通过双边协定等带动区域逐步扩大我国规则的影响力,应对欧美区域性平台版权义务规则的扩散,主导具有中国特色的诸边体制,以对产业发展起到良性促进作用。

关键词：数字贸易直播平台版权保护欧盟《版权指令》美国DMCA

基于粒子群算法确定热源参数的EH40/316L高功率激光焊接温度场模拟

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焊接学报 2024年第1期45卷 31-39,I0005页

作者：徐加俊黄禹王璐荣佑民华中科技大学武汉430074 广东华中科技大学工业技术研究院东莞518052

焊接瞬态温度场对焊接残余应力与变形模拟结果具有重要的影响,为提高EH40/316L高功率激光焊接的温度场模拟精度,开发了用于热源模型经验参数优化的智能计算方法.该方法利用MATLAB软件随机生成热源模型的经验参数,调用ANSYS软件执行焊接... 详细信息

焊接瞬态温度场对焊接残余应力与变形模拟结果具有重要的影响,为提高EH40/316L高功率激光焊接的温度场模拟精度,开发了用于热源模型经验参数优化的智能计算方法.该方法利用MATLAB软件随机生成热源模型的经验参数,调用ANSYS软件执行焊接温度场模拟的APDL命令,并在计算完成后返回结果数据,然后通过借助粒子群算法的群体智能和进化智能的优点,根据预测结果生成新的热源经验参数,进行迭代计算,直至预测结果为最优结果;同时,为提高收敛速度,将有限元几何模型简化为原模型的1/5.基于该方法,开展了10个热源模型经验参数优化案例的计算,并根据优化结果分析了热源模型的参数敏感性.结果表明,该方法实现了温度场的准确预测,其中10个优化案例的平均计算时间为30.3 h,最大、最小和平均预测误差分别为2.84%,2.06%和2.16%;同时,由预测误差和热源经验参数的响应曲面可知,两者之间具有复杂的非线性关系,其数学函数为多谷函数.

关键词：高功率激光焊接异种钢焊接温度场模拟热源参数优化粒子群算法