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职业技术教育 1998年第7期19卷 42-43页

作者：王玉连安徽农业技术师范学院

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作者：王玉连

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阻断C5a/C5aR上调调节性T细胞治疗慢性移植物抗宿主病的实验研究

作者：王玉连

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阻断C5a/C5aR上调调节性T细胞治疗慢性移植物抗宿主病的实验研究

作者：王玉连南方医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨阻断C5a/C5aR治疗慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的疗效,为cGVHD的免疫治疗提供新的实验依据。方法:1.采集异基因造血干细胞移植后cGVHD患者、无cGVHD患者及供者静脉血标本,流式细胞术检测三组外周血淋巴细胞及CD14+单核细胞中C5a... 详细信息

目的:探讨阻断C5a/C5aR治疗慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的疗效,为cGVHD的免疫治疗提供新的实验依据。方法:1.采集异基因造血干细胞移植后cGVHD患者、无cGVHD患者及供者静脉血标本,流式细胞术检测三组外周血淋巴细胞及CD14+单核细胞中C5aR的表达及CD4+4D25+Foxp3+ Tregs细胞的比例,并进行相关性分析。2.流式细胞术检测遗传背景相同的C5aR敲除及野生型BALB/c小鼠脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+Tregs细胞占CD4+T细胞的比例;体外培养小鼠脾细胞,分为C5aR-/-组、野生型组、RmC5a蛋白刺激组(分为100ng/mL及500ng/mLRmC5a+野生型脾细胞两组),分别采用ELISA检测各组培养上清中TGF-β1的分泌水平及流式细胞术检测各组CD4+CD25+Foxp3+Tregs细胞的比例。3.分选C5aR敲除及野生型BALB/c小鼠脾细胞中的CD4+T细胞,设C5aR-R-组及BALB/c组,通过CD3、CD28、IL-2、TGF-β1等细胞因子诱导Tregs细胞分化3天后,检测2组CD4+T细胞中CD4+CD25+Foxp3+ Tregs细胞的比例。4.建立小鼠cGVHD模型。通过移植主要组织相容性抗原(MHC)相合、次要组织相容性抗原(miHA)不合的异基因B10.D2雄性小鼠的骨髓细胞及脾脏细胞(8×106,1:1)→BALB/c雌性小鼠,建立一种能模拟临床cGVHD的小鼠模型。5.以cGVHD小鼠模型为研究对象,设对照组及PMX53治疗组2组。随机分配cGVHD小鼠至PMX53治疗组及对照组,每组各6只,+29d时,所有小鼠均出现cGVHD,予PMX53(1mg/kg,每周2次,持续3周)治疗。治疗后临床观察:体重低于14g或到观察终点(移植后+65d)处死小鼠。观察终点进行以下实验:(1)观察2组小鼠cGVHD临床评分、生存时间及组织病理形态学改变。(2)流式细胞术检测两组小鼠脾细胞中C5aR的表达及脾脏CD4+T细胞中CD4+CD25+Foxp3.+ Tregs细胞的比例。(3)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2组小鼠外周血血浆中TGF-β1的分泌水平。6.统计学分析:应用SPSS 20.0软件对数据进行统计学分析。正态分布数据以均数±标准误(x±SEM)表示。采用One-Way ANOVA比较多组间数据,采用Levene检验方差齐性;各组方差齐时,组间的比较选用可进行多个样本均数间两两均数比较的LSD。比较两组间数据,各组方差齐时,采用两样本t检验比较两组间均数。分析两变量之间的关系采用Spearman相关性分析,Kapplan-Meier法分析小鼠生存时间。检验水准均为:a=0.05。结果:***患者外周血淋巴细胞及CD14+单核细胞中C5aR的表达均显著高于无cGVHD 患者及健康供者(淋巴细胞:3.76±0.30%vs2.36±0.55%,1.16±0.16%,P均0.05);且CD4+ T淋巴细胞中CD4+CD25+Foxp3+ Tregs细胞的比例与淋巴细胞中C5aR的表达呈显著的负性相关(R=-0.603,P0.05)。2.C5aR-/-促进Tregs细胞的分化,而Rm C5a抑制小鼠脾细胞TGF-β1的分泌及CD4+CD25+Foxp3+ Tregs 细胞比例:(1)C5aR-/--组小鼠脾脏CD4+T细胞中Tregs细胞比例显著高于野生型小鼠(15.67±0.55 vs 11.3±0.60%,P0.05)。(3)流式检测显示100ng/mL及500ng/mL Rm C5a蛋白刺激组的CD4+

关键词： C5a/C5aR 慢性移植物抗宿主病调节性T细胞 TGF-β1

利福喷丁对氟康唑体外抗耐药白念珠菌增效作用及机制研究

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利福喷丁对氟康唑体外抗耐药白念珠菌增效作用及机制研究

作者：王玉连第二军医大学

学位级别：硕士

研究背景及目的白念珠菌是一种条件致病性真菌。近年来,由于广谱抗生素的大量不合理应用、激素的滥用、肿瘤的化学治疗及器官移植后免疫抑制剂的大量应用、免疫功能低下患者不断增多,使真菌感染发生率大大增加,其中白念珠菌感染最常见... 详细信息

研究背景及目的白念珠菌是一种条件致病性真菌。近年来,由于广谱抗生素的大量不合理应用、激素的滥用、肿瘤的化学治疗及器官移植后免疫抑制剂的大量应用、免疫功能低下患者不断增多,使真菌感染发生率大大增加,其中白念珠菌感染最常见。氟康唑因其口服吸收效果好,生物利用度高,副作用小,通常作为临床首选治疗白念珠菌感染的药物,但随着氟康唑的大量、频繁使用,真菌耐药发生率逐年上升,导致临床治疗真菌感染的失败。本课题组前期药敏实验发现利福喷丁、舍曲林等联合氟康唑时对耐氟康唑白念珠菌可能有协同作用。利福喷丁为利福霉素类抗生素,是治疗结核病的一线用药,抗结核杆菌作用比利福平强,且药物不良反应比利福平小。到目前为止,关于利福喷丁体外抗真菌协同作用的研究较少,因此,我们开展利福喷丁联合氟康唑体外抗白念珠菌的效应研究,为临床治疗白念珠菌感染探索有效方法。实验方法第一部分:参考M27-A2方案中的微量液基稀释法测定利福喷丁、氟康唑单用及两药合用时对白念珠菌的最低抑菌浓度(MIC);用棋盘式测定利福喷丁联合氟康唑体外抗白念珠菌的效应。通过时间—生长曲线实验、Spot assay实验验证利福喷丁对氟康唑体外抗耐药白念珠菌的增效作用,并摸索后续实验研究所需的药物浓度。第二部分:应用透射电镜观察白念珠菌100分别在利福喷丁、氟康唑单药及两药联合作用前后超微结构的变化。第三部分:应用流式细胞仪检测白念珠菌100分别在利福喷丁、氟康唑单药及两药联合作用前后细胞周期的变化。实验结果第一部分:利福喷丁单药对实验所选12株白念珠菌均无抗菌活性(MIC>1024μg/m L)。在氟康唑敏感白念珠菌株中,利福喷丁联合氟康唑后未表现出协同效应(FICI>0.5);在氟康唑耐药白念珠菌中,利福喷丁联合氟康唑后均表现出显著的协同作用(FICI连续,清晰可见,胞核及线粒体正常;利福喷丁组细胞形态基本正常,边界清楚,部分细胞见胞核肿胀不规则,未见明显空泡液泡;氟康唑组大多数细胞形态基本正常,部分细胞胞壁电子密度不均匀分布,透明层局灶性增厚,胞膜粗糙,可见肿胀的线粒体,核质相对分明,可见少量空泡、液泡;联合用药组大部分细胞形态不规则,细胞壁的电子透明层厚薄不一,细胞膜与细胞壁分离,层次不清,边界模糊,胞膜严重缺损,线粒体肿胀,核质界限不清,许多大小不等的团块状物质聚集于细胞膜附近,核膜断裂、溶解消失,胞核集聚不规则,凝聚成团。第三部分:通过流式细胞术检测药物作用12h、24h对耐氟康唑白念珠菌100细胞周期各期DNA含量变化。作用12h时,空白对照组、利福喷丁组、氟康唑组及合药组在G0/G1期细胞计数百分比分别为:(76.41±1.52)%、(75.48±1.41)%、(72.36±1.01)%、(8.11±0.22)%,S期细胞计数百分比分别为:(5.46±0.73)%、(8.46±0.23)%、(6.86±0.56)%、(12.52±0.54)%,G2/M期细胞计数百分比分别为:(18.14±1.11)%、(16.06±1.37)%、(20.78±1.48)%、(79.37±0.52)%;作用24h时,空白对照组、利福喷丁组、氟康唑组及合药组在G0/G1期细胞计数百分比分别为:(82.36±1.25)%、(70.52±3.11)%、(60.45±1.07)%、(8.11±0.22)%,S期细胞计数百分比分别为:(6.03±0.92)%、(12.15±1.92)%、(15.19±1.23)%、(7.79±1.45)%,G2/M期细胞计数百分比分别为:(11.61±0.86)%、(17.33±1.32)%、(24.36±0.40)%、(86.26±0.94)%,两药合用组比生长对照组及单用药组G0/G1期细胞数显著减少(p<0.01),G2/M期细胞数显著增多(p<0.01),表明联合用药组细胞周期阻滞在G2/M期,通过对12h、24h两个时间点对比发现,药物对白念珠菌100细胞周

关键词：白念珠菌氟康唑利福喷丁增效作用超微结构细胞周期

血栓弹力图在评估肝硬化患者凝血状态中的作用

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血栓弹力图在评估肝硬化患者凝血状态中的作用

作者：王玉连东南大学

学位级别：硕士

背景与目的：肝硬化患者肝脏合成功能受损,促凝因子与抗凝因子均下降,凝血系统维持平衡稳定的能力受损,形成低凝或高凝状态。临床上肝硬化患者不仅易出血,而且易出现静脉血栓形成,甚至出血和血栓并存,这都与凝血系统变化有关。目前肝硬... 详细信息

背景与目的：肝硬化患者肝脏合成功能受损,促凝因子与抗凝因子均下降,凝血系统维持平衡稳定的能力受损,形成低凝或高凝状态。临床上肝硬化患者不仅易出血,而且易出现静脉血栓形成,甚至出血和血栓并存,这都与凝血系统变化有关。目前肝硬化低凝导致出血的现象广为临床关注,高凝状态导致血栓的现象也逐渐被重视。因此对肝硬化患者进行凝血功能指标的检测对于患者病情的判断、治疗及预后具有重要意义。常规的凝血指标在反映低凝或高凝状态方面存在一定的局限性,并不能准确预测出血或血栓形成风险。而血栓弹力图(TEG)可提供凝血、血小板功能、纤维蛋白原功能及纤维蛋白溶解等多方面信息,这决定了TEG可作为检测血液凝固状态和纤溶现象的一种辅助诊断手段,具有指导溶栓、抗凝、成分性输血、临床用药等多重作用。近年来TEG广泛应用于指导成分输血、高凝或低凝状态的监测及纠正、凝血机制研究等方面。目前,TEG在心血管疾病、创伤救治、器官移植等方面的应用已得到重视,但在肝硬化患者中尚应用较少。本研究探讨血栓弹力图在判断肝硬化失代偿期患者出血或血栓形成风险中的作用,以用于指导临床治疗。方法：1、选择80例确诊为肝硬化失代偿期(Child C级),并排除原发或继发性肝癌、合并遗传性出血性疾病、使用华法林及阿司匹林等干扰凝血药物的患者作为研究对象。并根据临床表现、腹部CT血管造影及下肢静脉血管超声检查结果,统计肝硬化失代偿期患者出血及血栓形成的情况。同时选择无肝胆疾病、无血液系统疾病、未使用干扰凝血的药物、肝功能正常的26例作为对照组。分别采取上述不同人群的外周血检测血常规、常规凝血指标及TEG。比较肝硬化失代偿期出血患者、无出血患者及正常对照组的PLT、常规凝血指标及TEG各参数变化。2、在肝硬化失代偿期出血患者中,比较合并血栓与无合并血栓患者PLT、常规凝血指标及TEG各参数变化。3、在肝硬化失代偿期无出血的患者中,比较合并血栓与无合并血栓患者PLT、常规凝血指标及TEG各参数变化。结果：1、肝硬化失代偿期出血及无出血患者常规凝血指标中PT较对照组延长,D-D水平升高,PLT、FIB水平下降(P0.05)。2、在肝硬化失代偿期出血患者中,合并血栓组的α角明显高于无合并血栓组(P0.05)。3、在肝硬化失代偿期无出血患者中,合并血栓组的PLT明显高于无合并血栓组(P0.05)。结论：TEG可作为判断肝硬化失代偿期患者凝血状态的临床指标。本研究中TEG提示肝硬化失代偿期患者纤维蛋白原及血小板功能均下降(K值延长、α角缩小、MA值缩短),且在出血患者中更为明显,因此TEG对于了解患者的低凝状态、明确出血高风险、指导临床成分性输血均有积极作用,可有效降低出血风险。此外本研究中TEG提示肝硬化失代偿期患者凝血因子活性增高(R值缩短),但TEG并不能准确预测肝硬化失代偿期患者血栓形成的风险。本研究由于临床时间较短,病例数有限,大规模临床研究有待进一步探讨。

关键词：肝硬化失代偿期凝血状态血栓弹力图常规凝血指标

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红腹柄天牛危害对罗浮栲可溶性糖含量的影响

福建林业科技 2012年第2期39卷 40-43,46页

作者：王玉连福建省德化县林业局福建德化362500

对受红腹柄天牛不同危害程度的罗浮栲韧皮部和木质部中可溶性糖含量进行测定,分析可溶性糖含量与红腹柄天牛危害之间的关系。结果表明:在天牛取食活动期,不同受害程度罗浮栲的韧皮部和木质部可溶性糖含量差异明显,尤其韧皮部的变化比木... 详细信息

对受红腹柄天牛不同危害程度的罗浮栲韧皮部和木质部中可溶性糖含量进行测定,分析可溶性糖含量与红腹柄天牛危害之间的关系。结果表明:在天牛取食活动期,不同受害程度罗浮栲的韧皮部和木质部可溶性糖含量差异明显,尤其韧皮部的变化比木质部更加强烈;受害初期的植株,可溶性糖含量与未受害相比显著减少,冬季当幼虫和成虫进入休眠期后,不同受害程度罗浮栲韧皮部和木质部中可溶性糖的含量与未受害植株相比差异程度趋向缓和。表明可溶性糖含量可作为监测罗浮栲植株受红腹柄天牛为害程度的参考。

关键词：红腹柄天牛罗浮栲可溶性糖

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三叶青水提物体内、体外抗肿瘤作用的研究

中成药 2013年第5期35卷 1076-1078页

作者：丁丽纪其雄吕雯婷王玉连浙江医药高等专科学校浙江宁波315100

目的考察三叶青水提物体内、体外抗肿瘤的作用。方法应用中药血清药理学方法,制备三叶青水提物的含药血清。采用MTT法观察不同质量浓度三叶青水提物及其含药血清对人宫颈癌细胞Hela229和人恶性黑色素瘤细胞A375细胞的体外抑制作用;以小... 详细信息

目的考察三叶青水提物体内、体外抗肿瘤的作用。方法应用中药血清药理学方法,制备三叶青水提物的含药血清。采用MTT法观察不同质量浓度三叶青水提物及其含药血清对人宫颈癌细胞Hela229和人恶性黑色素瘤细胞A375细胞的体外抑制作用;以小鼠S180肉瘤为模型,观察三叶青水提物在体内对肿瘤生长的抑制作用。结果三叶青水提物对Hela229和A375细胞有增殖抑制作用,且呈现出剂量依赖性,IC50分别为45.60 g/L和38.35 g/L;三叶青水提物含药血清高、中、低(20,10,5 g/kg)剂量组也可抑制Hela229和A375细胞的体外增殖,IC50分别为41.82 g/L和248.60 g/L,呈现出剂量依赖性;三叶青水提物在体内对小鼠S180肉瘤的生长具有一定的抑制作用,高、中、低(24,12,6 g/kg)剂量组的抑瘤率分别为28.24%、41.56%和6.00%。结论三叶青水提物体内、体外均具有抗肿瘤作用。

关键词：三叶青水提物抗肿瘤含药血清 Hela229细胞 A375细胞 S180

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YL—8960型低温联合消解仪的研制

土壤 1990年第5期22卷 272-274页

作者：卢明远杨玉兰王玉连陈喜才中国科学院沈阳应用生态研究所国营江苏电分析仪器厂

本文介绍了供测定土壤(植物)全氮、全磷和全钾用的低温联合消解仪(YL—8960型)的原理、结构、精度和使用方法。

关键词： YL-8960型低温联合消解仪器研制

相对论q形变理想费米气体的低温热力学统计性质(英文)

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四川大学学报（自然科学版） 2009年第5期46卷 1391-1398页

作者：刘慧门福殿章毛连王玉连安徽科技学院理学院蚌埠233100 中国石油大学(华东)物理科学与技术学院东营257061 浙江大学理学院杭州310027

在q形变费米-狄拉克分布函数的基础上,研究了相对论q形变理想费米气体的低温热力学统计性质,得到了一些重要热力学量例如费米能,基态能,化学势,总能和热容量的解析表达式,揭示了q形变参数和相对论对系统性质的影响.结果表明:q形变导致... 详细信息

在q形变费米-狄拉克分布函数的基础上,研究了相对论q形变理想费米气体的低温热力学统计性质,得到了一些重要热力学量例如费米能,基态能,化学势,总能和热容量的解析表达式,揭示了q形变参数和相对论对系统性质的影响.结果表明:q形变导致了一些与正常的系统不同的新奇特性,另外,相对论费米系统的性质与非相对论系统的性质明显不同.

关键词：热力学统计性质 q形变相对论费米气体