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作者：王澍弘湖北中医学院

学位级别：硕士

目的研究姜黄素(Curcumin,Cur)对子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞生长增殖及血管形成的影响。方法 1、体外原代培养人子宫内膜异位症在位及异位内膜间质细胞,应用免疫细胞化学法进行细胞鉴定;2、用不同浓度的姜黄素(0、10μmol/... 详细信息

目的研究姜黄素(Curcumin,Cur)对子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞生长增殖及血管形成的影响。方法 1、体外原代培养人子宫内膜异位症在位及异位内膜间质细胞,应用免疫细胞化学法进行细胞鉴定;2、用不同浓度的姜黄素(0、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、50μmol/L)分别处理体外培养的人子宫内膜异位症在位及异位内膜间质细胞0、24 h、48 h、72 h、96 h后,(1)、倒置显微镜下观察细胞的生长状况及细胞的形态变化;(2)、四甲基偶氮唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2yi)-2,5-dipeyl terazolium bromide,MTT)法检测其对内膜间质细胞生长增殖的影响;(3)、流式细胞技术(folwcytometry,FCM)检测不同浓度以及不同时间的姜黄素对在位及异位内膜间质细胞凋亡及细胞周期的影响;(4)、免疫细胞化学法检测不同浓度以及不同时间点的姜黄素对血管内皮生长因子(Vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达的影响。结果 1、细胞培养结果:体外培养的异位内膜间质细胞14例,1例细菌污染,1例因所得标本过少未培养成功。成功12例,成功率85.7%;在位内膜培养16例,均成功;在位及异位内膜细胞传代培养成功;免疫细胞化学鉴定分离培养的在位及异位内膜细胞,波形蛋白染色阳性率均在95%以上。倒置显微镜下观察,在位及异位内膜细胞形态无明显差异,24 h贴壁后,细胞呈纺锤形,随时间的推移,细胞逐渐变长,排列呈编织状,边界不清,细胞间无明显的接触抑制,细胞培养10代以内形态基本不变;2、姜黄素作用结果:(1)形态学变化:不同浓度的姜黄素作用后,异位及在位内膜间质细胞的生长增殖能力均下降,呈现浓度和时间依赖性,细胞形态发生明显变化,10μmol/L浓度的姜黄素作用48 h后,细胞形态变化不明显,可见个别漂浮细胞,50μmol/L浓度的姜黄素作用48 h后,贴壁细胞数量明显减少,细胞生长欠佳,形态变化明显,细胞出现核固缩,核浆比例减小,细胞透光性减低,培养液内漂浮细胞明显增多,随处理时间的延长,上述变化更为明显。(2)细胞增殖变化:姜黄素可抑制异位及在位内膜间质细胞的生长增殖且呈时间剂量依赖性,10μmol/L浓度的姜黄素作用后异位内膜间质细胞在24 h、48 h、72 h、96 h的细胞抑制率分别为33.74%、52.23%、62.04%、68.72%,在位内膜间质细胞的细胞抑制率分别为13.13%、30.29%、44.26%、58.14%,50μmol/L的姜黄素作用后异位内膜间质细胞相应时间点的细胞抑制率分别为:51.61%、60.64%、70.00%、74.31%,在位内膜间质细胞的细胞抑制率分别为24.94%、36.70%、52.68%、67.35%,姜黄素对异位内膜细胞的抑制作用在每个时间点均强于在位内膜(P＜0.05),此抑制作用呈时间和剂量依赖性;(3)对凋亡的影响:Annexin V-FITC和PI双染结果显示,姜黄素对在位及异位内膜间质细胞均有明显的促凋亡作用。作用48 h后,两种细胞凋亡率明显增高,凋亡率随浓度的增加而增加,差异有统计学意义(P＜0.05),姜黄素对异位内膜细胞的促凋亡作用强于在位内膜,差异有统计学意义(P＜0.05);(4)对细胞周期的影响:细胞周期检测见姜黄素作用后,S期细胞数均减少,从G期到S期发生抑制,此抑制作用随浓度增加而增强(P＜0.05),异位内膜间质细胞G期细胞百分数由19.45±3.47逐渐增加到34.92±4.14(20μmol/L)和51.4 7±5.07(50μmol/L),差异有统计学意义(P＜0.01),在位内膜间质细胞G期细胞百分数由58.50±8.96逐渐增加到74.80±6.95(20μmol/L)和84.35±5.92(50μmol/L),差异有统计学意义(P＜0.05);(5)对VEGF表达的影响:免疫细胞化学结果显示:姜黄素可明显降低子宫内膜异位症在位及异位内膜间质细胞VEGF的表达(P＜0.01),作用48 h后,异位内膜间质细胞VEGF表达的阳性率积分由120.80±19.46下降至70.60±5.32(20μmol/L)和50.80±9.09(50μmol/L),在位内膜间质细胞VEGF表达的阳性率积分由83.00±9.35下降至54.40±5.32(10μmol/L)和40.60±4.88(50μmol/L),对异位内膜间质细胞VEGF表达的影响明显强于在位内膜间质细胞(P＜0.05)。结论 1、姜黄素可明显抑制人子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞的生长并促进其凋亡,呈时间和剂量依赖性。 2、姜黄素可降低异位及在位内膜间质细胞VEGF

关键词：姜黄素异位内膜间质细胞在位内膜间质细胞子宫内膜异位症血管内皮生长因子

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敲降Gata6基因雄性小鼠模型睾丸功能维持过程中的调控机制

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中国组织工程研究 2018年第24期22卷 3857-3862页

作者：王顺德李晶王澍弘重庆三峡中心医院重庆市404000

背景:GATA家族是一类含有两个保守锌指结构的转录调节因子,在人和脊椎动物中广泛表达,同时该家族参与调节组织发育、分化和细胞增殖过程。Gata6属于GATA家族中的一员,其在哺乳动物的心脏、性腺、脾脏、肝、性腺等器官发挥重要功能。目的... 详细信息

背景:GATA家族是一类含有两个保守锌指结构的转录调节因子,在人和脊椎动物中广泛表达,同时该家族参与调节组织发育、分化和细胞增殖过程。Gata6属于GATA家族中的一员,其在哺乳动物的心脏、性腺、脾脏、肝、性腺等器官发挥重要功能。目的:分析Gata6基因在小鼠睾丸中的作用机制。方法:以小鼠为模型,通过CRISPR/Cas9技术在雄性小鼠体内敲降Gata6基因,并以正常小鼠做对照,组织学观察睾丸形态学变化,Ellisa法测定雄激素相关合成酶,实时定量PCR仪检测相关基因。结果与结论:(1)利用CRISPR/Cas9技术成功在小鼠体内敲降Gata6基因;(2)与对照组相比,2月龄敲降组小鼠睾丸发育迟缓,睾丸及相关生殖器明显变小,精原细胞和精子生成减少,睾丸中雄性信号通路相关基因表达量降低,雄激素水平显著降低(P<0.05);(3)结果说明,Gata6在哺乳动物睾丸发育过程中发挥重要作用。

关键词：组织构建 Gata6基因基因敲降生殖发育

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2013年欧洲泌尿科学会男性不育指南介绍

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中国男科学杂志 2014年第1期28卷 65-67,72页

作者：王万荣谭艳谢胜谢子平王澍弘湖北医药学院附属人民医院男科十堰442000

2013年欧洲泌尿科学会（EAU）男性不育指南介绍如下。一、不育症WHO将不育症定义为夫妻同居有正常的性生活，未避孕超过1年，女方仍未能自然怀孕。在1年内约15％夫妇有不育并寻求治疗。生育第一胎有1／8妇夫不育，生育第二胎有1／6夫妇... 详细信息

2013年欧洲泌尿科学会（EAU）男性不育指南介绍如下。一、不育症WHO将不育症定义为夫妻同居有正常的性生活，未避孕超过1年，女方仍未能自然怀孕。在1年内约15％夫妇有不育并寻求治疗。生育第一胎有1／8妇夫不育，生育第二胎有1／6夫妇不育。

关键词：不育,男性指南欧洲

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帕罗西汀联合中频穴位电刺激治疗早泄的临床疗效

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中华男科学杂志 2015年第10期21卷 921-924页

作者：李韬谭艳谢子平王万荣王澍弘欧阳海康照鹏谢胜湖北医药学院附属人民医院男科湖北十堰442000

目的:探讨帕罗西汀联合中频穴位电刺激治疗早泄的临床价值。方法:选取69例符合早泄诊断标准患者为研究对象,随机分为单独帕罗西汀药物治疗组(对照组Ⅰ)、中频穴位电刺激治疗组(对照组Ⅱ)和帕罗西汀联合中频穴位电刺激治疗组(试验组),每... 详细信息

目的:探讨帕罗西汀联合中频穴位电刺激治疗早泄的临床价值。方法:选取69例符合早泄诊断标准患者为研究对象,随机分为单独帕罗西汀药物治疗组(对照组Ⅰ)、中频穴位电刺激治疗组(对照组Ⅱ)和帕罗西汀联合中频穴位电刺激治疗组(试验组),每组23例,治疗8周,记录各组治疗前后的阴道内射精潜伏期(IELT)、中国早泄患者性功能评价量表(CIPE-5)评分。对比分析3组患者治疗前后的IELT和CIPE-5评分,比较3组的积分变化、有效率、药物不良反应。结果:单独帕罗西汀组1例患者因腹痛、恶心不能耐受,退出试验。试验组组、对照组Ⅰ、对照组Ⅱ均可达到延缓IELT、降低CIPE-5评分的目的。IELT分别由治疗前的(0.91±0.09)、(0.92±0.12)、(0.92±0.11)min,提高为治疗后的(5.31±0.13)、(2.78±0.17)、(4.07±0.11)min(P<0.05),CIPE-5评分由治疗前的(13.1±2.8)、(12.8±2.9)、(12.5±3.0)分,提高为(25.2±2.1)、(19.5±1.9)、(22.0±2.0)分,试验组相较其他两组效果更明显(P<0.05)。总有效率为95.7%、72.7%、47.8%,差异有显著性(P<0.05)。结论:帕罗西汀联合中频穴位电刺激治疗早泄比单独帕罗西汀药物治疗所取得的临床疗效更佳,且能达到减少帕罗西汀用量及药物反应的效果。

关键词：帕罗西汀中频穴位电刺激早泄

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克罗米芬、他莫西芬和来曲唑治疗特发性中重度少精子症效果的探讨

克罗米芬、他莫西芬和来曲唑治疗特发性中重度少精子症效果的探讨

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第十一次全国中西医结合男科学术大会暨重庆市中西医结合学会2016年男科学术大会

作者：王澍弘王顺德重庆三峡中心医院男科

目的:比较克罗米芬、他莫西芬及来曲唑这三种药物在少精子症治疗疗效及妊娠结局。方法:选取2014年7月-2015年7月在重庆三峡中心医院门诊及住院低睾酮/雌二醇比值的特发性中重度少精子症患者90例,随机分为3组各30例,3组均疗程90天(每月用...

目的:比较克罗米芬、他莫西芬及来曲唑这三种药物在少精子症治疗疗效及妊娠结局。方法:选取2014年7月-2015年7月在重庆三峡中心医院门诊及住院低睾酮/雌二醇比值的特发性中重度少精子症患者90例,随机分为3组各30例,3组均疗程90天(每月用药25天,停药5天),剂量每日分别为A组:克罗米芬50mg,B组:他莫西芬10mg,C组:来曲唑2.5mg。3组均在用药第5天、第10天检查性激素水平。每30天检查肝肾功能、血清性激素水平和精液质量。采用配对t检验和X2检验进行统计分析。结果:共有85例患者完成了治疗和随访,其中A组28例,B组28例,C组29例。治疗后A和C组与本组治疗前相比,射精量、精子浓度显著提高(P<0.05)。B组射精量,精子浓度有所提高。其中C组最高,B组最低,差异有统计学意义(P<0.01)。随访1年,三组药物的妊娠率C组最高,B组最低,差异有统计学意义(P<0.05);三组药物的妊娠结局(配偶流产率和异位妊娠率)无统计学差异。雌二醇(E2)水平A组最高,C组最低,差异有统计学意义(P<0.05);睾酮(T)水平C组最高,B组最低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:来曲唑促进特发性中重度少精子症其精子浓度和配偶妊娠率提高,其临床治疗疗效优于克罗米芬和他莫西芬。

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来源： cnki会议评论

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基于CRISPR/Cas9敲除技术研究Gata4基因在雄性小鼠睾丸发育中的功能

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畜牧与兽医 2018年第8期50卷 36-39页

作者：郭善军李晶王澍弘王顺德达州职业技术学院四川达州635001 重庆三峡中心医院重庆404000

旨在通过CRISPR/Cas9技术研究Gata4基因在雄性小鼠睾丸中的作用机制。试验以C57BL/6小鼠为模型,通过CRISPR/Cas9技术在雄性小鼠体内敲除Gata4基因,组织学观察睾丸形态学变化,ELISA法测定雄激素相关合成酶,实时定量PCR检测相关标记基因... 详细信息

旨在通过CRISPR/Cas9技术研究Gata4基因在雄性小鼠睾丸中的作用机制。试验以C57BL/6小鼠为模型,通过CRISPR/Cas9技术在雄性小鼠体内敲除Gata4基因,组织学观察睾丸形态学变化,ELISA法测定雄激素相关合成酶,实时定量PCR检测相关标记基因。利用CRISPR/Cas9技术成功在小鼠体内敲除Gata4基因,通过PCR扩增、酶切计算得到基因敲除率93%;在2月龄小鼠性成熟时,通过定量PCR、HE染色和ELISA检测发现,与对照组相比,敲除组小鼠睾丸发育迟缓,明显变小,精原细胞和精子生成减少,睾丸中雄性信号通路相关基因（Stra8,Vasa,Dazl,Tnp1,Spo11,Sox9,17HSDb3,Dmrt1）表达量降低,雄激素水平显著降低。研究表明,Gata4在雄性小鼠生殖器官发育与精子生成过程中具有重要功能。

关键词： Gata4 CRISPR/Cas9 基因敲除精子生成生殖发育

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他达拉非OAD方案治疗无性伴侣勃起功能障碍

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中华男科学杂志 2015年第1期21卷 90-92页

作者：李韬谢胜谢子平王万荣王澍弘欧阳海康照鹏谭艳湖北医药学院附属人民医院男科湖北十堰442000

阴茎勃起功能障碍（erectile dysfunction,ED）是最常见的成年男性性功能障碍疾病。研究表明,ED与生活方式、心血管疾病、心理等诸多因素相关,年龄是其中主要因素之一,随着社会压力增大和老龄化进程加快,预计到2025年全世界ED患者将超过... 详细信息

阴茎勃起功能障碍（erectile dysfunction,ED）是最常见的成年男性性功能障碍疾病。研究表明,ED与生活方式、心血管疾病、心理等诸多因素相关,年龄是其中主要因素之一,随着社会压力增大和老龄化进程加快,预计到2025年全世界ED患者将超过3.2亿[1]。其定义是持续（3个月以上）的不能获得足够的硬度或维持时间不足以完成满意性生活的阴茎勃起。涉及人群往往为已婚或有性伴侣的患者。

关键词：勃起功能障碍无性伴侣他达拉非 OAD

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量子点荧光标记技术与免疫组织化学染色检测泌尿系统肿瘤组织特异性抗原表达的效果比较

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广东医学 2014年第15期35卷 2372-2376页

作者：谢子平谭艳谢胜王万荣李韬欧阳海王澍弘康照鹏湖北医药学院附属人民医院男科湖北十堰442000

目的通过比较量子点(QDs)荧光标记技术与免疫组织化学(IHC)染色检测膀胱癌组织标本中CD44v6抗原和前列腺癌组织标本中前列腺干细胞抗原(PSCA)的效果,观察该标记技术的敏感性。方法采用QDs荧光标记技术和IHC染色检测80例膀胱癌组织中的CD... 详细信息

目的通过比较量子点(QDs)荧光标记技术与免疫组织化学(IHC)染色检测膀胱癌组织标本中CD44v6抗原和前列腺癌组织标本中前列腺干细胞抗原(PSCA)的效果,观察该标记技术的敏感性。方法采用QDs荧光标记技术和IHC染色检测80例膀胱癌组织中的CD44v6抗原和40例前列腺癌组织中PSCA的表达。结合肿瘤临床分期分级,评估两种标记方法得出的肿瘤分级。结果 CD44v6抗原在膀胱癌组织中的表达与肿瘤的分级(QDs:r=-0.345,P=0.002;IHC:r=-0.392,P<0.001)和分期(QDs:r=-0.243,P=0.03;IHC:r=-0.306,P=0.006)呈负相关,两种方法的Kappa值为0.931(P<0.001),说明两种标记方法对膀胱癌组织中CD44v6抗原的检测结果具有一致性。另外,PSCA在前列腺癌组织中的表达与肿瘤的Gleason评分(QDs:r=0.732,P<0.001;IHC:r=0.683,P<0.001)和分期(QDs:r=0.514,P=0.001;IHC:r=0.432,P=0.005)呈正相关,两种方法的Kappa值为0.874(P<0.001),说明两种标记方法对前列腺癌组织中PSCA的检测结果具有一致性。结论 QDs荧光标记具有良好的敏感性,该技术在泌尿系肿瘤研究领域具有广阔前景,为肿瘤诊治水平奠定了良好的基础。

关键词：量子点荧光标记膀胱癌前列腺癌

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显微镜下输精管交叉端侧吻合治疗无精子症1例报告

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中华男科学杂志 2018年第9期24卷 861-863页

作者：李行陈芳王顺德代宏李美材王澍弘龙腾博谢孟凌文家渝彭燕重庆三峡中心医院男性科重庆404000

无精子症作为引起男性不育症中常见的原因，目前外科处理方法分别以睾丸前、睾丸、睾丸后3种因素划分。睾丸前因素主要针对垂体及甲状腺等引起的病变，睾丸因素以精索静脉曲张及隐睾等病变为主，而睾丸后因素以输精管及附睾梗阻最为常... 详细信息

无精子症作为引起男性不育症中常见的原因，目前外科处理方法分别以睾丸前、睾丸、睾丸后3种因素划分。睾丸前因素主要针对垂体及甲状腺等引起的病变，睾丸因素以精索静脉曲张及隐睾等病变为主，而睾丸后因素以输精管及附睾梗阻最为常见。现对我院1例双侧附睾梗阻合并先天性右侧输精管发育异常引起的无精子症，行显微镜下输精管交叉端侧吻合术结果报告如下。

关键词：无精子症附睾梗阻显微镜下输精管交叉端侧吻合

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1999～2003年住院病人潜伏梅毒流行病学特征分析

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中国麻风皮肤病杂志 2005年第7期21卷 538-539页

作者：邓云华王澍弘周礼义华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤科武汉430030

对我院1999年1月～2003年12月住院病人中潜伏梅毒患者病历资料进行统计分析.以探讨我院1999～2003年住院病人中潜伏梅毒的流行病学特征.发现92例无症状TPPA阳性者中存在潜伏梅毒83例.潜伏梅毒患病人数逐年增多,男女之比为1:1.77.患者分... 详细信息

对我院1999年1月～2003年12月住院病人中潜伏梅毒患者病历资料进行统计分析.以探讨我院1999～2003年住院病人中潜伏梅毒的流行病学特征.发现92例无症状TPPA阳性者中存在潜伏梅毒83例.潜伏梅毒患病人数逐年增多,男女之比为1:1.77.患者分布于我院外科、妇产科等7个科室.潜伏梅毒患病率呈逐年上升趋势,女性患病率高于男性,女性多发于25～35岁,而男性多发于35～45岁.潜伏梅毒病例在住院患者中分布较广.因此,对存在高危因素的住院患者进行常规梅毒筛查试验是及早发现潜伏梅毒并防止其传播的有效防治措施之一.

关键词： 1999~2003年住院病人潜伏梅毒流行病学性行为疾病传播

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