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氧化苦参碱对慢性染砷大鼠肝损伤的影响

环境与健康杂志 2024年第7期41卷 579-583页

作者：王楠兰田继贵鲁杨曲子晗周倩倩王惠群贵州医科大学公共卫生与健康学院营养与食品卫生学系贵州贵阳550025 贵州省食品营养与健康工程研究中心贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室

目的探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对砷暴露大鼠肝损伤的影响。方法将64只成年健康清洁级SD雄性大鼠按体重随机分为4组,分别为正常对照(去离子水)组、亚砷酸钠染毒组和低、高剂量OMT干预组,每组16只。采用经口灌胃方式进行亚砷酸钠... 详细信息

目的探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对砷暴露大鼠肝损伤的影响。方法将64只成年健康清洁级SD雄性大鼠按体重随机分为4组,分别为正常对照(去离子水)组、亚砷酸钠染毒组和低、高剂量OMT干预组,每组16只。采用经口灌胃方式进行亚砷酸钠染毒,每天1次,每周6 d;连续染毒16周后,每组选取8只大鼠,正常对照组和亚砷酸钠用去离子水灌胃,而低、高剂量OMT干预组分别以25、50 mg/kg的OMT溶液灌胃,每天1次,连续4周。分别于染砷16周和OMT干预4周后,检测大鼠血清、尿、肝脏的砷含量和血清中的谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力及肝组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、透明质酸(HABP1)、Ⅳ型胶原(COL-IV)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度以及α-SMA的蛋白表达。结果砷染毒和OMT干预后,亚砷酸钠染毒组和各剂量OMT干预组大鼠的体重均低于正常对照组;OMT干预后,高剂量OMT干预组大鼠的体重较亚砷酸钠染毒组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。砷染毒和OMT干预后,亚砷酸钠染毒组和各剂量OMT干预组大鼠肝、血和尿中的砷含量均高于正常对照组;OMT干预后,高剂量OMT干预组大鼠的肝砷和血砷均低于亚砷酸钠染毒组,各剂量OMT干预组大鼠的尿砷含量均高于亚砷酸钠染毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。砷染毒和OMT干预后,亚砷酸钠染毒组和各剂量OMT干预组大鼠血清中ALT和AST活力均高于正常对照组;OMT干预后,各剂量OMT干预组大鼠的ALT活力均低于亚砷酸钠染毒组,高剂量OMT干预组大鼠AST活力低于亚砷酸钠染毒组,差异均有统计学意义(P<0.05)。砷染毒后,亚砷酸钠染毒组和各剂量OMT干预组大鼠肝组织HABP1、COL-IV、α-SMA的浓度均高于正常对照组;OMT干预后,各剂量OMT干预组大鼠肝组织COL-IV和α-SMA的浓度均低于亚砷酸钠染毒组,且高剂量OMT干预组大鼠肝组织HABP1的浓度低于亚砷酸钠染毒组,差异均有统计学意义(P<0.05)。砷染毒和OMT干预后,亚砷酸钠染毒组和各剂量OMT干预组大鼠肝组织TGF-β1浓度均高于正常对照组;OMT干预后,而高剂量OMT干预组大鼠的TGF-β1表达低于亚砷酸钠染毒组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 OMT能够增加尿砷排除,并对慢性砷暴露导致的肝损伤有明显的改善作用。

关键词：砷中毒氧化苦参碱肝损伤

microRNA-23a对氟暴露大鼠成骨肉瘤细胞成骨活性的影响及靶基因验证

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环境与健康杂志 2019年第9期36卷 753-758页

作者：杨璐珲陈宣好卢明丽王楠兰韦艳贵州医科大学公共卫生学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学公共卫生学院营养与食品安全教研室

目的探讨miR-23a对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞成骨活性的影响并验证其靶基因。方法体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23a的激动剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),再以0、80μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后利用实时荧光定量PCR(q... 详细信息

目的探讨miR-23a对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞成骨活性的影响并验证其靶基因。方法体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23a的激动剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),再以0、80μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-23a、Ⅰ型胶原(COL1)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA的表达水平;培养96 h后利用免疫蛋白印记法(Western blot)检测COL1、OPN、Runx2蛋白的表达水平;体外培养人胚胎肾细胞(293T),利用双荧光素酶报告基因法验证miR-23a可能的靶基因。结果与空白对照组相比,NaF组UMR-106细胞miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达水平明显升高(P0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达明显降低(P0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组COL1、OPN、Runx2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与过表达组比较,过表达+NaF组OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),COL1、Runx2变化不显著;与抑制组比较,抑制+NaF组COL1、OPN、Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。过表达miR-23a后的293T细胞中双特异性磷酸酶5(DUSP5 mRNA)和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),抑制mi R-23a后DUSP5表达水平均明显升高(P<0.05);双荧光素酶报告确定DUSP5为miR-23a的靶基因。结论miR-23a能促进染氟UMR-106细胞中成骨活性基因的表达;DUSP5是miR-23a的靶基因。

关键词：氟化物大鼠成骨肉瘤细胞(UMR-106) miR-23a 成骨活性双特异性磷酸酶5

microRNA-23a对染氟成骨肉瘤细胞外调节蛋白激酶通路的影响

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环境与健康杂志 2020年第3期37卷 189-194页

作者：杨璐珲卢明丽陈宣好王楠兰韦艳贵州医科大学公共卫生学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学公共卫生学院营养与食品安全教研室

目的探究miR-23a对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞外调节蛋白激酶(ERKs)通路的影响。方法体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23a的激动剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),再以0、80μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后利用实时荧光定量PCR... 详细信息

目的探究miR-23a对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞外调节蛋白激酶(ERKs)通路的影响。方法体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23a的激动剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),再以0、80μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ERKs通路关键因子细胞外信号调节激酶(ERK)、血清效应因子(SRF)、c-fos mRNA的表达水平;培养48 h后利用免疫蛋白印记法(Western blot)检测ERKs通路关键因子ERK、ETS样蛋白1(Elk-1)、SRF、c-fos蛋白的表达水平。结果与空白对照组比较,NaF组ERK、SRF、c-fos的mRNA和蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(P0.05);转染mi R-23a抑制剂后,与Inhibitor NC组相比,抑制组miR-23a、ERK、SRF、c-fos mRNA表达水平降低(P<0.05),ERK、Elk-1、SRF、c-fos蛋白表达水平降低(P<0.05);转染miR-23a激动剂联合NaF作用下,与过表达组比较,过表达+NaF组ERK、SRF、cfos mRNA表达水平升高(P<0.05),ERK、Elk-1、c-fos蛋白表达水平升高(P<0.05);转染mi R-23a抑制剂联合NaF作用下,与抑制组比较,抑制+NaF组ERK、c-fos mRNA表达水平升高(P<0.05),ERK、SRF、c-fos蛋白表达水平上升(P<0.05)。结论miR-23a能激活染氟UMR-106细胞ERKs通路途径。

关键词： miR-23a 细胞外调节蛋白激酶(ERKs)通路细胞外信号调节激酶(ERK)

氟化钠对小鼠成骨细胞MC3T3-E1凋亡的影响

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环境与职业医学 2017年第4期34卷 330-336页

作者：王楠兰雷露敖全陈密吴彦秋张华韦艳贵州医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室贵州贵阳550004

[目的]探讨高浓度氟化钠(Na F)致小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞凋亡的影响。[方法]以不同剂量Na F染毒MC3T3-E1细胞,分别培养24和48 h,用CCK-8法测定细胞存活率,明确后续实验作用浓度及时间。0、1×10~3、2×10~3、3×10~3μmol/L Na F染毒... 详细信息

[目的]探讨高浓度氟化钠(Na F)致小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞凋亡的影响。[方法]以不同剂量Na F染毒MC3T3-E1细胞,分别培养24和48 h,用CCK-8法测定细胞存活率,明确后续实验作用浓度及时间。0、1×10~3、2×10~3、3×10~3μmol/L Na F染毒小鼠成骨细胞MC3T3-E1,培养24、48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡;并用实时PCR测定Caspase-3和Caspase-8 m RNA的表达及采用免疫印迹法检测Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白的表达。[结果]CCK-8实验结果显示,随着Na F浓度增加,MC3T3-E1细胞的存活率均随着Na F染毒浓度的升高及染毒时间的延长而下调。1×10~3μmol/L时OD值低于对照组,存活率下降,差异有统计学意义(P<0.05)。1×10~3μmol/L Na F染毒48 h时OD值较24 h低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Na F作用24 h时,1×10~3μmol/L Na F染毒组中晚期细胞凋亡率无明显变化,其余各Na F染毒组各期细胞凋亡率均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着Na F染毒浓度的升高,MC3T3-E1细胞Caspase-3、Caspase-8 m RNA的表达水平呈上升趋势;且Na F染毒48 h后,除1×10~3μmol/L Na F染毒组的Cleaved PARP蛋白表达外,其余染毒组MC3T3-E1细胞Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP的蛋白表达水平上升(P<0.05)。[结论]在高浓度Na F诱导细胞凋亡过程中,Caspase介导的信号通路发挥着重要的作用。

关键词：氟化钠 MC3T3-E1细胞细胞凋亡 Caspase-3 Caspase-8

氟化钠对成骨细胞内Gs/Gi-AC-PKA信号途径的影响

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现代预防医学 2017年第9期44卷 1676-1680页

作者：王楠兰吴彦秋杨瑶曾贝贝张华韦艳贵州医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室

目的探讨氟化钠(NaF)对大鼠成骨骨肉瘤UMR-106细胞及小鼠MC3T3-E1成骨细胞内Gs/Gi-AC-PKA信号途径的影响。方法以不同剂量NaF染毒UMR-106和MC3T3-E1细胞,培养24 h,用CCK-8法测定细胞增殖活性;用qPCR和Western Blot分别测定刺激性G蛋白(S... 详细信息

目的探讨氟化钠(NaF)对大鼠成骨骨肉瘤UMR-106细胞及小鼠MC3T3-E1成骨细胞内Gs/Gi-AC-PKA信号途径的影响。方法以不同剂量NaF染毒UMR-106和MC3T3-E1细胞,培养24 h,用CCK-8法测定细胞增殖活性;用qPCR和Western Blot分别测定刺激性G蛋白(Stimulating adenylate cyclase g protein,Gs)、抑制性G蛋白(inhibitory adenylate cyclase g protein,Gi)、腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的mRNA和蛋白的表达水平。结果 UMR-106细胞和MC3T3-E1细胞NaF染毒后的存活率随NaF浓度增加而降低(P<0.05);不同剂量组之间,UMR-106细胞和MC3T3-E1细胞Gs、Gi mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),且随着染毒剂量的升高呈先升高后下降趋势;AC mRNA表达及蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05),且呈明显下调趋势;UMR-106细胞和MC3T3-E1细胞的PKA mRNA和蛋白的表达差异有统计学意义(P<0.05),且随着染毒剂量的增加而呈明显上升趋势。结论 Gs/Gi-AC-PKA信号途径在氟骨症的形成过程中可能发挥一定作用。

关键词：氟化钠 UMR-106细胞 ME3T3-E1细胞 Gs/Gi-AC-PKA信号通路

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氧化苦参碱对砷致大鼠脑组织氧化损伤的影响

环境与健康杂志 2018年第3期35卷 194-197,F0003页

作者：田继贵曲子晗鲁杨王楠兰王惠群贵州医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室

目的探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对砷暴露大鼠脑组织氧化损伤的影响。方法将64只健康成年清洁级雄性Wistar大鼠按体重随机分为4组,分别为正常对照(去离子水)组、亚砷酸钠染毒(5.0 mg/kg)组和低(25 mg/kg)、高剂量(50 mg/kg)氧化苦... 详细信息

目的探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对砷暴露大鼠脑组织氧化损伤的影响。方法将64只健康成年清洁级雄性Wistar大鼠按体重随机分为4组,分别为正常对照(去离子水)组、亚砷酸钠染毒(5.0 mg/kg)组和低(25 mg/kg)、高剂量(50 mg/kg)氧化苦参碱干预组,每组16只。亚砷酸钠染毒组和各剂量氧化苦参碱干预组采用经口灌胃的方式进行染毒,每天1次,每周6 d,连续染毒16周。适应性喂养1 d后,各剂量氧化苦参碱干预组采用经口灌胃方式进行染毒,每天1次,每周6 d,连续染毒8周;亚砷酸钠染毒组灌胃去离子水。分别于亚砷酸钠和氧化苦参碱染毒结束后,每组选择8只大鼠,检测脑组织总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)水平、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力和砷、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果在亚砷酸钠染毒及OMT干预结束后,亚砷酸钠染毒组和各剂量OMT干预组大鼠的脑砷含量均高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05)。在亚砷酸钠染毒及OMT干预结束后,与正常对照组比较,亚砷酸钠染毒组和各剂量OMT干预组大鼠脑组织T-SOD水平、GSH-Px活力均较低,而MDA含量均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。在OMT干预结束后,与亚砷酸钠染毒组比较,各剂量OMT干预组大鼠脑组织T-SOD水平、GSH-Px活力均较高,而MDA含量均较低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着OMT染毒剂量的升高,亚砷酸钠染毒大鼠脑组织T-SOD水平、GSH-Px活力均呈上升趋势,而MDA含量呈下降趋势。结论 OMT能有效地拮抗砷致大鼠脑组织的氧化损伤作用。

关键词：砷中毒氧化损伤氧化苦参碱

氟化钠对大鼠成骨肉瘤细胞UMR-106成骨活性标志物的影响

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现代预防医学 2018年第5期45卷 883-886+891页

作者：吴彦秋陈宣好代佑罡王楠兰韦艳贵州医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室贵州医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室

目的研究氟化钠(Na F)对大鼠成骨肉瘤细胞UMR-106成骨活性标志物的影响。方法体外培养的UMR-106细胞,分别以0,500,1 000,2 000μmol/L Na F处理24h、48h、72h。应用实时荧光定量PCR法检测各组碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、I型胶原蛋白... 详细信息

目的研究氟化钠(Na F)对大鼠成骨肉瘤细胞UMR-106成骨活性标志物的影响。方法体外培养的UMR-106细胞,分别以0,500,1 000,2 000μmol/L Na F处理24h、48h、72h。应用实时荧光定量PCR法检测各组碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、I型胶原蛋白(Col I)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)mRNA的表达;采用磷酸苯二钠法及蛋白免疫印迹法检测各组ALP活性和Col I、Runx2蛋白表达。结果 Na F处理UMR-106细胞24h后,各浓度Na F均能刺激BGP基因表达;与对照组比较,Na F浓度高于1 000μmol/L时,ALP、Runx2、BMP-2基因表达减弱;Na F处理72h后,500μmol/L组ALP、Runx2、BGP基因表达上调;Na F处理48h、72h后,当Na F浓度高于1000μmol/L时,ALP、Runx2、BMP-2表达及Ⅰ型胶原的合成随着Na F浓度的增高,抑制作用逐渐增强。UMR-106细胞及细胞培养液中ALP活性在24h 2 000μmol/L组及48h,72h 1 000μmol/L组明显升高,随着Na F浓度的升高,UMR-106细胞Col I蛋白的表达呈下降趋势。Runx2蛋白在2 000μmol/L组降低,差异有统计学意义。结论氟化钠对成骨肉瘤UMR-106细胞成骨活性具有双向作用,与氟化钠剂量及细胞因子间联合作用有关。

关键词：氟化钠 UMR-106细胞成骨活性标志物

凯里红酸汤对大鼠肠道脂肪酸吸收和紧密连接蛋白的调控

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中国酿造 2021年第5期40卷 129-133页

作者：曲子晗王楠兰杨红梅周倩倩王惠群贵州医科大学营养与食品卫生学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州省食品营养与健康工程研究中心贵州贵阳550025

通过灌胃摄入的方式观察贵州凯里红酸汤对高脂血症大鼠模型的小肠上皮脂肪酸吸收蛋白和紧密连接蛋白的调控作用。摄入凯里红酸汤期间测量大鼠的体质量和血脂,摄入11周后测定大鼠小肠上皮的脂肪酸转位酶CD36(FAT/CD36)、脂肪酸转运蛋白(F... 详细信息

通过灌胃摄入的方式观察贵州凯里红酸汤对高脂血症大鼠模型的小肠上皮脂肪酸吸收蛋白和紧密连接蛋白的调控作用。摄入凯里红酸汤期间测量大鼠的体质量和血脂,摄入11周后测定大鼠小肠上皮的脂肪酸转位酶CD36(FAT/CD36)、脂肪酸转运蛋白(FATP4)、紧密连接相关蛋白Occludin和紧密连接跨膜蛋白ZO-1的表达。结果表明,在高脂血症大鼠模型中,酸汤干预使大鼠的体质量和血脂显著降低(P<0.05),CD36和FATP4表达水平显著降低(P<0.05),ZO-1表达水平显著升高(P<0.05),其水平更接近于正常条件下喂养的阴性组大鼠。酸汤可以抑制大鼠体质量增长,恢复被高脂膳食破坏的小肠上皮紧密连接结构,减少肠道长链脂肪酸的吸收,改善大鼠高脂血症的状况。

关键词：凯里红酸汤高脂血症小肠上皮紧密连接脂质代谢

microRNA-96-5p对染氟成骨肉瘤细胞c-Jun氨基末端激酶通路的影响

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环境与健康杂志 2018年第10期35卷 857-862页

作者：陈宣好杨璐珲代佑罡吴彦秋王楠兰韦艳贵州医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学系贵州贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州医科大学公共卫生学院营养与食品安全学教研室

目的探讨miR-96-5p对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路的影响。方法将处于对数生长期的UMR-106细胞分别转染mi R-96-5p反义寡核苷酸(anti-miRNA oligonucleotide,AMO)、过表达质粒以达到抑制和过表达作用,再以0(对照)、2 000μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后通过实时荧光定量PCR检测miR-96-5p及JNK通路上各因子基因的变化;培养48 h后,采用蛋白免疫印迹法检测JNK通路上各因子蛋白的变化。结果与无氟对照组相比,氟染毒组UMR-106细胞mi R-96-5p、天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase-3)mRNA表达水平升高(P<0.05),cAMP直接活化交换蛋白(exchange protein directly activated by cAMP,Epac)mRNA表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05);转染mi R-96-5p质粒后,与质粒对照组相比,质粒+NaF组UMR-106细胞miR-96-5p mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);转染AMO后,与AMO对照组相比,AMO+NaF组UMR-106细胞mi R-96-5p mRNA表达水平升高,Epac和caspase-3 mRNA表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与无氟对照组相比,氟染毒组UMR-106细胞腺苷酸环化酶6(Adenylate Cyclase 6,AC6)、Epac、p-JNK蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与质粒对照组相比,质粒+NaF组UMR-106细胞AC6、Epac、天冬氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase 9,caspase-9)蛋白表达水平均下降,而p-JNK、磷酸化Jun癌基因(Jun oncogene,c-Jun)、细胞色素C(cytochrome C,cyt C)和非活化caspase-3蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);转染AMO后,与AMO对照组相比,AMO+NaF组UMR-106细胞AC6、Epac、caspase-9、p-JNK蛋白表达均下降,p-c-Jun、cyt C和非活化caspase-3蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 mi R-96-5p可能促进染氟UMR-106细胞JNK通路磷酸化,从而介导细胞凋亡。

关键词：氟化钠成骨肉瘤细胞 microRNA-96-5p c-Jun氨基末端激酶通路