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梅毒螺旋体重组蛋白Tp0100和Tp1016表达及其诊断价值初步评估

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梅毒螺旋体重组蛋白Tp0100和Tp1016表达及其诊断价值初步评估

作者：王斯倩南华大学

学位级别：硕士

研究背景:梅毒是一种慢性系统性性传播疾病,其病原体为梅毒螺旋体(Tp)。梅毒发病数在我国有逐年上升趋势,但仍无有效疫苗特异性防治,及早实验室诊断梅毒是防控梅毒的重要措施,以血清学方法检测抗体为主。近年来,基于Tp重组蛋白诊断抗原... 详细信息

研究背景:梅毒是一种慢性系统性性传播疾病,其病原体为梅毒螺旋体(Tp)。梅毒发病数在我国有逐年上升趋势,但仍无有效疫苗特异性防治,及早实验室诊断梅毒是防控梅毒的重要措施,以血清学方法检测抗体为主。近年来,基于Tp重组蛋白诊断抗原的梅毒血清学方法成为梅毒实验室诊断的主流,但目前此类方法在早/晚期梅毒诊断及梅毒治疗效果的判定方面仍然存在一定缺陷,仍需寻找其他诊断抗原。前期研究表明,Tp的硫氧还原蛋白Tp0100和碱性膜蛋白Tp1016能与不同感染阶段的梅毒患者血清及Tp感染兔血清反应,有潜在的临床梅毒诊断价值。目的:建立基于重组蛋白Tp0100和Tp1016的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,初步评估这两种重组蛋白在梅毒血清诊断中的临床应用价值,为筛选新的梅毒血清学诊断抗原提供实验依据。方法:(1)构建重组载体p ET28a-Tp0100和p ET28a-Tp1016,经鉴定后转化入*** BL21(DE3)表达菌中,用不同浓度的IPTG诱导表达Tp0100和Tp1016,经Ni-NTA柱纯化,用免疫印迹法(WB)鉴定纯化蛋白与Tp感染兔血清反应的特异性及免疫反应性;(3)建立基于两种重组蛋白的ELISA方法,检测不同时期的梅毒血清(340例)、交叉血清(180例)、体检血清(80例),将结果用SPSS和Graph Pad Prism统计学软件分析,同时与密螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)和甲苯胺红不加热反应素试验(TRUST)检测结果比较,评价Tp0100和Tp1016作为梅毒血清诊断和疗效判断的潜在价值。结果:(1)经PCR扩增出的基因片段大小约为615bp和1038bp,与预期大小一致;构建的质粒载体测序经Blast比对,证实基因序列为目的基因序列;(2)诱导表达的蛋白分子大小分别为22k Da(Tp0100)和39k Da(Tp1016),WB结果显示这两种蛋白均能被Tp感染兔血清特异性识别;(3)以TPPA法的检测结果为金标准,Tp0100-ELISA与Tp1016-ELISA的ROC曲线下面积分别为0.99与0.869,可见Tp0100-ELISA法诊断效果较好,而Tp1016-ELISA法则相对较差;用SPSS软件计算Tp0100-ELISA和Tp1016-ELISA的cut-off值,两种方法的敏感度分别为97.35%和75%,特异度分别为98.46%和79.61%,与TPPA法的符合率分别为97.83%和77%;(6)不同时期梅毒血清与阴性血清(体检正常及交叉血清)的OD值有一小部分交叉重叠,说明存在灰区;(7)将治疗前后TRUST的滴度变化分别与Tp0100-ELISA和Tp1016-ELISA的OD值变化比较,TRUST的滴度变化水平与Tp0100-ELISA法OD值的变化呈正相关,相关系数为0.807(P0.05,差异无显著性)。结论:Tp0100有望作为梅毒血清学诊断和疗效判断的抗原;Tp01016不适宜单独作为梅毒血清学诊断抗原。

关键词：梅毒螺旋体 Tp0100 Tp1016 ELISA 血清学诊断

水泥-乳化沥青厂拌冷再生技术在昌九高速公路技术改造工程中的应用研究

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公路交通科技（应用技术版） 2008年第S2期4卷 16-19页

作者：孙斌胡宗林王斯倩江西赣粤高速公路股份有限公司江西南昌330025 江西省高等级公路管理局质量监督站江西南昌330009

2007年昌九高速公路技术改造工程在全国首次大面积应用厂拌冷再生技术于高等级公路上基层,文章以此为应用实例阐述了厂拌冷再生技术从设计、施工到质量评定和性能观测等一系列内容。事实证明冷再生混合料具有较高的力学性能,完全能够满... 详细信息

2007年昌九高速公路技术改造工程在全国首次大面积应用厂拌冷再生技术于高等级公路上基层,文章以此为应用实例阐述了厂拌冷再生技术从设计、施工到质量评定和性能观测等一系列内容。事实证明冷再生混合料具有较高的力学性能,完全能够满足高等级路面上基层的性能要求。

关键词：厂拌冷再生结构设计柔性基层

基于路网级检测数据的高速公路长期抗滑性能研究

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公路交通科技（应用技术版） 2018年第12期14卷 54-57页

作者：祝谭雍许兵王斯倩卜胤江西省高速公路养护工程技术研究中心江西南昌330025 江西省高速公路投资集团有限责任公司江西南昌330025

通过统计高速公路新建及养护历史数据,分析沥青路面抗滑性能与运营时间、收费数据的关系,基于收费数据提出了累计交通量指数表征累计交通量大小,计算回归了AC-13、微表处、ECA-10超薄罩面、就地热再生等路表结构层的横向力系数随累计交... 详细信息

通过统计高速公路新建及养护历史数据,分析沥青路面抗滑性能与运营时间、收费数据的关系,基于收费数据提出了累计交通量指数表征累计交通量大小,计算回归了AC-13、微表处、ECA-10超薄罩面、就地热再生等路表结构层的横向力系数随累计交通量指数的衰减规律。结果表明:AC-13上面层与微表处在长期交通荷载作用下抗滑性能呈现两阶段衰减规律,对数函数拟合曲线反映衰减过程先急后缓; ECA-10超薄罩面由于应用时间不长,抗滑性能衰减尚未达到稳定。基于线性回归的横向力系数衰减规律看,抗滑性能AC-13最好,微表处和就地热再生次之,ECA-10超薄罩面抗滑性能相对薄弱,说明ECA-10超薄罩面在施工过程中要重点控制抗滑指标。

关键词：长期抗滑性能横向力系数路面行驶质量指数衰减规律回归分析

基于冷再生上基层的半刚性基层柔性化转换研究

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公路交通科技（应用技术版） 2008年第S2期4卷 49-53页

作者：孙斌江涛胡宗林王斯倩江西赣粤高速公路股份有限公司江西南昌330025 江西省高等级公路管理局质量监督站江西南昌330009

通过对长寿命沥青路面结构的分析和冷再生沥青混合料材料组成的研究,确定了冷再生路面结构和冷再生沥青混合料的配合比,并铺筑了试验路。试验路的路面结构分析和通车验证表明,采用冷再生上基层技术对已损坏的半刚性基层沥青路面进行维修... 详细信息

通过对长寿命沥青路面结构的分析和冷再生沥青混合料材料组成的研究,确定了冷再生路面结构和冷再生沥青混合料的配合比,并铺筑了试验路。试验路的路面结构分析和通车验证表明,采用冷再生上基层技术对已损坏的半刚性基层沥青路面进行维修,一方面解决了原路面结构半刚性基层的疲劳开裂问题,另一方面冷再生路面结构在满足了长寿命沥青路面设计要求的同时,还具有较好的高温稳定性能。

关键词：沥青路面维修冷再生上基层长寿命沥青路面半刚性基层疲劳寿命

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乳化沥青再生基层配合比设计及性能验证

公路交通科技（应用技术版） 2008年第S2期4卷 4-6,12页

作者：王斯倩胡美珍杨能羽张睿江西省高等级公路管理局质量监督站江西南昌330006

乳化沥青冷再生技术在高等级公路柔性基层的应用目前尚不成熟,文章阐述了以乳化沥青为再生剂的冷再生混合料配合比设计方法,并以昌九高速公路面层铣刨料为材料,进行了实例设计,通过检验再生混合料的水稳性、高温稳定性、低温抗裂性等指... 详细信息

乳化沥青冷再生技术在高等级公路柔性基层的应用目前尚不成熟,文章阐述了以乳化沥青为再生剂的冷再生混合料配合比设计方法,并以昌九高速公路面层铣刨料为材料,进行了实例设计,通过检验再生混合料的水稳性、高温稳定性、低温抗裂性等指标,证明冷再生混合料具有较高的力学性能,应用于高等级公路的上基层是完全可行的。

关键词：乳化沥青 RAP 冷再生混合料

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碳纤维发热桥面热量耗散分析

中外公路 2020年第5期40卷 311-315页

作者：卜胤周昌王斯倩朱俊江西省高速公路养护工程技术研究中心江西南昌330133 江西省交通科学研究院

利用碳纤维发热线加热融化桥面冰雪对保障车辆安全通行具有重要的意义。为了解决桥梁内置碳纤维发热线设计理论不足的问题,该文分析了桥面热能交换过程,提出采用综合换热系数表征潜热通量与对流换热量,成型C50水泥混凝土+AC-20沥青混凝... 详细信息

利用碳纤维发热线加热融化桥面冰雪对保障车辆安全通行具有重要的意义。为了解决桥梁内置碳纤维发热线设计理论不足的问题,该文分析了桥面热能交换过程,提出采用综合换热系数表征潜热通量与对流换热量,成型C50水泥混凝土+AC-20沥青混凝土+SMA-13沥青混凝土大板试件进行室内温升试验模拟碳纤维发热桥面的加热过程,基于能量守恒定律研究了碳纤维发热桥面的热量耗散机理。研究结果表明:对流换热和潜热是影响碳纤维发热桥面热量耗散的主要方式;温度对碳纤维发热桥面融雪化冰影响作用最大,风速次之,冰层厚度影响作用最小。根据桥面综合换热系数,同时考虑不同地区桥梁所处的气候环境和应急通行需求,可以经济合理地设计出桥面内置碳纤维发热线的布设方案。

关键词：碳纤维发热桥面热量耗散融雪化冰综合换热系数

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昌九高速公路沥青路面裂缝成因及处治技术

交通建设与管理 2014年第12X期 17-19页

作者：王斯倩仇凡江西省天驰高速科技发展有限公司江西南昌330103

裂缝是高速公路的主要病害形式,裂缝处治是高速公路养护的重要内容之一。通过工程实例积极探讨裂缝成因,并根据工程实践,提出一些预防措施和处理方法。

关键词：沥青路面裂缝处治 TDC

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高速公路路面的养护和病害维修

交通世界 2015年第22期 38-39页

作者：仇凡王斯倩江西省天驰高速科技发展有限公司江西南昌330000

在高速公路运营过程中,随着车流量及承载的逐渐加大,路面病害不断产生,进而影响高速公路的正常运行,带来交通安全隐患。对高速公路路面病害进行阐述,分析病害原因,为病害治理、路面维修和养护提供合理建议。

关键词：高速公路路面病害维修养护

NovaChip超薄磨耗层在江西高速公路养护工程中的应用

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交通建设与管理 2014年第11X期 183-185,188页

作者：王斯倩舒澄江西省天驰高速科技发展有限公司江西南昌330103

NovaChip超薄磨耗层是使用特种改性乳化沥青和间断级配热拌沥青混合料,并采用专用设备施工的一种薄层罩面技术,它作为一种快捷有效的路面修复方式和预防性养护技术,近年越来越受到重视。结合工程实例,围绕NovaChip超薄磨耗层的材料设计... 详细信息

NovaChip超薄磨耗层是使用特种改性乳化沥青和间断级配热拌沥青混合料,并采用专用设备施工的一种薄层罩面技术,它作为一种快捷有效的路面修复方式和预防性养护技术,近年越来越受到重视。结合工程实例,围绕NovaChip超薄磨耗层的材料设计、施工工艺及应用效果进行详细介绍和探讨,为更好地指导今后的养护工作开展了系统研究。

关键词：超薄磨耗层高黏改性沥青同步摊铺高速公路养护