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宝乐果粉对人Vγ9Vδ2-T细胞抗肿瘤活性的调控及其机制研究

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宝乐果粉对人Vγ9Vδ2-T细胞抗肿瘤活性的调控及其机制研究

作者：王敏珍暨南大学

学位级别：硕士

[目的]目前已有的体外扩增体系已经无法满足免疫细胞疗法日益发展的需求。如何通过优化常规扩增方法,提高体外扩增抗肿瘤免疫细胞的数量以及质量,成为当下免疫治疗研究中的热点问题。本课题拟研究天然产物——研究宝乐果粉对人外周血单... 详细信息

[目的]目前已有的体外扩增体系已经无法满足免疫细胞疗法日益发展的需求。如何通过优化常规扩增方法,提高体外扩增抗肿瘤免疫细胞的数量以及质量,成为当下免疫治疗研究中的热点问题。本课题拟研究天然产物——研究宝乐果粉对人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)活性的影响以及对体外扩增的Vγ9Vδ2-T细胞抗肿瘤活性的影响,并探究其可能的作用机制。[方法]取健康志愿者静脉血,使用密度梯度法分离PBMC,用不同浓度的宝乐果粉液对人PBMC干预处理,随后使用CCK-8法来检测宝乐果粉的细胞毒作用;再通过CCK-8法研究宝乐果粉联合IL-2对PBMC的影响;通过免疫磁珠阴选法,从新鲜分离的PBMC中富集出CD3T淋巴细胞,并用流式细胞仪检测其分选的纯度,同时检测了CD4T,CD8T淋巴细胞的百分率,通过加入CD3/CD28Dynabeads刺激CD3T淋巴细胞,通过加入不同浓度的宝乐果粉刺激CD3T淋巴细胞,72h后用流式细胞仪检测CD4T,CD8T淋巴细胞百分比的变化;另外,为了检测宝乐果果粉对人Vγ9Vδ2-T细胞的免疫调控功能,我们用帕米膦酸盐(Pamidronate,PAM)联合IL-2体外扩增PBMC中的Vγ9Vδ2-T细胞,并设置不同浓度的宝乐果粉对Vγ9Vδ2-T细胞的体外扩增进行干预。扩增期间中不同时间点,使用流式细胞仪检测Vγ9Vδ2-T细胞在体外扩增体系中的百分率以及细胞绝对数目;为了评估宝乐果果粉对Vγ9Vδ2-T细胞抗肿瘤活性功能的调控,我们将各组经不同浓度果粉培养的Vγ9Vδ2-T细胞与CFSE标记的K562按10:1效靶比共孵育6小时后,随后经PI染色,用流式细胞仪检测CFSE标记的K562细胞中PI所占的百分率,即为Vγ9Vδ2-T细胞杀伤K562的效率;为了深入研究宝乐果粉对Vγ9Vδ2-T细胞抗肿瘤活性调控的具体研究杀伤分子机制,我们将共在孵育后检测Vγ9Vδ2-T细胞的免疫表型及细胞因子分泌情况水平。[结果]宝乐果粉对人免疫细胞无毒性,且在浓度为10μg/mL时能够显著促进细胞增殖水平;使用10μg/mL宝乐果粉联合50IU/mL IL-2作用于PBMC,在第9天,IL-2处理组与10μg/mL宝乐果粉联合IL-2处理组,细胞增殖的水平具有显著差异;免疫磁珠法阴选分离出CD3T淋巴细胞,细胞纯度可高达99%。联合使用CD3/CD28抗体刺激的同时,并加入不同浓度的宝乐果粉对细胞进行处理,我们发现不同浓度宝乐果粉干预CD4T与CD8T淋巴细胞百分率无明显差异。但加了宝乐果粉的组别有CD8T淋巴细胞的百分比相对上调,CD4T淋巴细胞的百分率相对下调的趋势;PAM联合IL-2可用于体外扩增Vγ9Vδ2-T细胞;不同浓度的宝乐果粉培养Vγ9Vδ2-T细胞的过程发现,虽然Vγ9Vδ2-T细胞在扩增的百分率上没有差异,细胞绝对数量在扩增过程的前20天无明显差异,但扩增至第25天,第30天时,各处理组细胞数量均呈现下降趋势,但加入100μg/mL宝乐果粉培养的组别下降的趋势较慢,与对照组具有显著差异。用100μg/mL宝乐果粉处理Vγ9Vδ2-T细胞30天后,Vγ9Vδ2-T细胞与K562共孵育6h后,检测K562的死亡率,发现未使用宝乐果粉处理组中,Vγ9Vδ2-T细胞对K562的杀伤率为13.43%±1.8%,而使用宝乐果处理的Vγ9Vδ2-T细胞对K562的杀伤率为31.18%±3.6%,说明用宝乐果粉处理后K562靶细胞的死亡率提高了近18%;测宝乐果粉处理扩增30天后的Vγ9Vδ2-T细胞表面和胞内分子标志。我们发现宝乐果粉对Vγ9Vδ2-T细胞细胞表面分子TRAIL、FasL、NKG2D,以及胞内的溶解颗粒物质均无显著影响,但颗粒酶B表达升高,Fas表达降低;将经宝乐果粉处理的扩增30天后Vγ9Vδ2-T细胞纯化后与K562细胞按照1:1的比例共培养12h后,结果显示宝乐果粉处理组与PBS对照组相比较后,我们发现宝乐果粉处理组Vγ9Vδ2-T细胞分泌至细胞培养上清中的细胞效应因子的水平有显著性差异,比如,INF-γ、TNF-α、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素以及颗粒溶解素(Granulysin)。[结论]宝乐果粉对人PBMC无细胞毒性,且在一定浓度范围可促进PBMC的体外增殖;宝乐果粉有促进CD3T淋巴细胞向CD8T淋巴细胞的方向分化的趋势;在100μg/mL宝乐果粉浓度作用下,Vγ9Vδ2-T细胞在体外培养的时间能够延长,且能通过分泌较高水平INF-γ、TNF-α、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素以及颗粒溶解素等效应因子来增强其抗肿瘤活性。

关键词：宝乐果 Vγ9Vδ2-T细胞帕米磷酸盐(Pamidronate,PAM) 抗肿瘤

大气PM_(2.5)暴露对人群2型糖尿病影响的研究进展

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环境与职业医学 2018年第2期35卷 137-142页

作者：王敏珍郑山兰州大学公共卫生学院甘肃兰州730000

近年来,PM_(2.5)污染对2型糖尿病的影响成为新的关注点。本文首先以队列研究为基础,阐述了大气PM_(2.5)暴露对2型糖尿病发病率和死亡率的影响;其次,以人群为基础,综述了大气PM_(2.5)对2型糖尿病患者相关理化指标影响的研究成果;然后,以... 详细信息

近年来,PM_(2.5)污染对2型糖尿病的影响成为新的关注点。本文首先以队列研究为基础,阐述了大气PM_(2.5)暴露对2型糖尿病发病率和死亡率的影响;其次,以人群为基础,综述了大气PM_(2.5)对2型糖尿病患者相关理化指标影响的研究成果;然后,以土地利用回归模型和卫星遥感技术为例,概述了大气PM_(2.5)的暴露评估方法 ;最后,提出了我国探索大气PM_(2.5)对2型糖尿病影响的研究局限性,特别是前瞻性队列研究的局限性,旨在为后续研究大气PM_(2.5)暴露对人群2型糖尿病的健康风险提供一些参考和依据。

关键词： PM2.5 2型糖尿病队列研究暴露评估

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科技社团与政府关系研究

科技社团与政府关系研究

作者：王敏珍华中科技大学

学位级别：硕士

科技社团作为学术类的非营利组织,是创新型国家建设的重要组成部分,深入研究科技社团与政府之间的关系,对于发挥科技社团的作用,服务创新性国家建设具有重要意义。本文把科技社团与政府的关系作为研究对象,对科技社团与政府关系的... 详细信息

科技社团作为学术类的非营利组织,是创新型国家建设的重要组成部分,深入研究科技社团与政府之间的关系,对于发挥科技社团的作用,服务创新性国家建设具有重要意义。本文把科技社团与政府的关系作为研究对象,对科技社团与政府关系的基本关系、功能关系和资源依赖关系进行了分析。发现当前我国科技社团与政府之间存在政府对科技社团的制约度高、科技社团的影响力有限、科技社团与政府的非对称性依赖关系显著等问题。形成科技社团与政府之间这种关系的原因是多方面的。首先是历史方面的原因使得政府的强势在这一领域表现得极为突出。其次是政府方面的原因。主要表现在法律保障上的不足、行政管理制度的严格、挂靠体制的存在、政府政策扶持的缺失以及职能转移的不到位等。再次是科技社团自身的原因。主要表现在科技社团内部治理结构不完善、资金能力不足、人力资源短缺、社团公信力不足等。再次是科技社团自身的原因。主要表现在科技社团内部治理结构不完善、资金能力不足、人力资源短缺、社团公信力不足等。针对目前科技社团与政府合作关系存在的问题,基于本文的分析路径,笔者从政府和科技社团的角度提出了创新科技社团与政府合作关系的思路。

关键词：科技社团政府关系

兰州市大气气态污染物与呼吸系统疾病日入院人数的时间序列分析

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卫生研究 2012年第5期41卷 771-775页

作者：王敏珍郑山王式功陶燕尚可政兰州大学大气科学学院兰州730000 兰州大学资源环境学院

目的探讨兰州市大气气态污染物NO2和SO2对呼吸系统疾病住院的健康效应。方法采用时间序列的半参数广义相加模型(GAM),在控制了时间的长期趋势、"星期几效应"及气象因子等混杂因素的影响后,分析2001-2005年兰州市大气NO2和SO2浓度与呼吸... 详细信息

目的探讨兰州市大气气态污染物NO2和SO2对呼吸系统疾病住院的健康效应。方法采用时间序列的半参数广义相加模型(GAM),在控制了时间的长期趋势、"星期几效应"及气象因子等混杂因素的影响后,分析2001-2005年兰州市大气NO2和SO2浓度与呼吸系统疾病入院人数的暴露-反应关系。结果大气NO2和SO2浓度对呼吸系统疾病入院人数具有不同程度的影响。单污染物模型中,NO2和SO2分别以滞后1天和0天对呼吸系统健康的影响最强。滞后1天NO2和无滞后SO2浓度增加一个四分位数间距时,呼吸系统疾病入院人数增加的相对危险度分别为:1.060(95%CI 1.046～1.074)和1.048(95%CI 1.031～1.065);女性和老年人为易感人群;2种污染物在秋冬季的作用比春夏季更明显。结论兰州市大气NO2和SO2浓度对呼吸系统疾病的日入院人数有影响。

关键词：空气污染二氧化氮二氧化硫呼吸系统疾病广义相加模型 (GAM)

ATP依赖性生物发光试验测定金黄色葡萄球菌对药物的敏感性

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中国图书评论 1989年第4期12卷 217-219页

作者：赵文明王敏珍

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分布式架空输电线路故障在线监测系统

电网技术 2007年第23期31卷 87-88页

作者：王敏珍祁树文长春工程学院吉林省长春市130012 长春供电公司吉林省长春市130010

介绍了应用于长春供电公司的架空输电线路故障在线监测系统的设计与实现,该系统是一种基于故障指示器技术和通用分组无线业务技术的输电线路故障在线监测系统。该系统可在故障发生后的几分钟内,在监控中心的监控画面上迅速显示故障的时... 详细信息

介绍了应用于长春供电公司的架空输电线路故障在线监测系统的设计与实现,该系统是一种基于故障指示器技术和通用分组无线业务技术的输电线路故障在线监测系统。该系统可在故障发生后的几分钟内,在监控中心的监控画面上迅速显示故障的时间、地点、相位、类型等信息。该系统的应用提高了故障查找的工作效率,缩短了停电时间。

关键词：分布式架空线路故障指示器在线监测系统电力系统

1951-2008年中国主要城市风效指数的时空变化趋势

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干旱区资源与环境 2012年第7期26卷 64-70页

作者：王敏珍郑山王式功尚可政兰州大学大气科学学院兰州大学气象环境与人体健康研究中心兰州730000

利用中国气象局提供的全国主要省会城市1951-2008年的逐日地面气象资料,分别计算历时58年的平均气温和风效指数(K)等,运用线性回归、Spearman秩相关和变化速率等分析气温和风效指数(K)的年代、季节以及空间分布的变化趋势。结果表明:1)1... 详细信息

利用中国气象局提供的全国主要省会城市1951-2008年的逐日地面气象资料,分别计算历时58年的平均气温和风效指数(K)等,运用线性回归、Spearman秩相关和变化速率等分析气温和风效指数(K)的年代、季节以及空间分布的变化趋势。结果表明:1)1951-2008年全国主要省会城市的年平均气温呈上升趋势,变化速率为0.3℃/10a。2)历时58年,年平均风效指数(K)也呈上升趋势,变化速率为10.8/10a。3)不同季节风效指数(K)的波动范围不同,其中冬季变化幅度最大,夏季最小。其空间分布在四季当中总体呈现南高北低的态势。

关键词：气候学温度风效指数变化趋势空间分布中国

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人群叶酸服用率及依从性研究进展

中华预防医学杂志 2010年第10期44卷 941-943页

作者：王敏珍郑山白亚娜兰州大学公共卫生学院流行病与卫生统计学研究所 730000

随着我国人口数量得到基本控制,提高出生人口素质已成为一个十分紧迫和重要的人口学问题,有效降低出生缺陷的发生是提高出生人口素质的关键环节.

关键词：依从性服用率出生人口素质叶酸人群人口数量出生缺陷人口学

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铁路配电网自闭贯通线路故障定位系统

电网技术 2009年第16期33卷 101-102页

作者：王敏珍李伟王玉刚长春工程学院吉林省长春市130012 沈阳铁路局吉林供电段吉林省吉林市132000

介绍了铁路配电网自闭贯通线路故障定位系统的设计与实现,该系统是一种基于故障指示器技术和通用分组无线业务技术的故障定位系统,可实现铁路配电网的故障检测、定位及故障类型判断等。故障发生时,在系统监控中心界面上迅速显示故障的... 详细信息

介绍了铁路配电网自闭贯通线路故障定位系统的设计与实现,该系统是一种基于故障指示器技术和通用分组无线业务技术的故障定位系统,可实现铁路配电网的故障检测、定位及故障类型判断等。故障发生时,在系统监控中心界面上迅速显示故障的时间、地点、相位、类型等信息。该系统的应用提高了故障查找的工作效率,缩短了停电时间。

关键词：铁路配电网自闭贯通输电线路故障定位系统故障指示器