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一种具高活性的酪氨酸酶基因启动子片段的分离

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武汉大学学报（自然科学版） 1999年第2期45卷 233-237页

作者： AazazAbderrahmane 王戈林沈萍武汉大学生命科学学院

利用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＫＫ２３２－８为载体，经ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ完全消化后与ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ部分消化的嗜麦芽假单胞菌染色休ＤＮＡ进行体外连接，转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞，在含氨苄青霉素（Ａｐ... 详细信息

利用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＫＫ２３２－８为载体，经ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ完全消化后与ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ部分消化的嗜麦芽假单胞菌染色休ＤＮＡ进行体外连接，转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞，在含氨苄青霉素（Ａｐ）和氯霉素（Ｃｍ）的选择平板上筛选转化子．从随机挑选的５４株转化子中，获得一株抗氯霉素水平达１０００ｍｇ／Ｌ的转化子Ｅ．ｃｏｌｉＰＡＳＩ，所含重组质粒被命名为ｐＡＳＩ．经限制性酶切分析和杂交分析表明，ｐＡＳＩ质粒上插入了一段来源于嗜麦芽假单胞菌染色体的ＤＮＡ片段，其大小为１．４ｋｂ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明转化子Ｅ．ｃｏｌｉＰＡＳＩ在含Ｃｍ的培养基上，额外表达了一条２２×１０３的ＣＡＴ蛋白质带．将重组质粒ｐＷＳＹ上的嗜麦芽假单胞菌ｍｅｌ基因亚克隆到ｐＡＳＩ上１．４ｋｂ启动子功能片段下游，构建成Ｅ．ｃｏｌｉＡＷＳ工程菌株，使黑色素产率提高了７０．６％．

关键词：启动子酪氨酸酶基因黑色素嗜麦芽假单胞菌

嗜麦芽假单胞菌酪氨酸酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

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Acta Genetica Sinica 1999年第3期26卷 274-279页

作者：王戈林沈萍杨澜彭珍荣武汉大学生命科学学院武汉430072

酪氨酸酶基因（mel）编码的酪氨酸酶是合成黑色素的关键酶。用鸟枪法分离嗜麦芽假单胞菌（PseudomonasmaltophiliaAT18）的mel基因：以pUC18为载体，***101为受体菌，在加有一定量的Amp和L－tyr的酪素平板上筛选到分泌可溶性黑色素的转... 详细信息

酪氨酸酶基因（mel）编码的酪氨酸酶是合成黑色素的关键酶。用鸟枪法分离嗜麦芽假单胞菌（PseudomonasmaltophiliaAT18）的mel基因：以pUC18为载体，***101为受体菌，在加有一定量的Amp和L－tyr的酪素平板上筛选到分泌可溶性黑色素的转化子，所含重组质粒pWSY约700bp的外源DNA片段上携有mel基因，该片段无BamHI、HindIII、EcoRI、BclI等酶的识别位点。Southern杂交证实此片段确实来源于***。克隆片段的核酸序列分析鉴定ORF504为酪氨酸酶编码序列，SDS－PAGE电泳也显示工程菌HB101／pWSY额外表达一分子量约为18kD的蛋白，因此证明了这一蛋白是重组子表达的酪氨酸酶。

关键词： mel基因克隆表达酪氨酸酶基因

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酪氨酸酶基因工程菌产黑色素的发酵条件研究

中国医药工业杂志 1999年第4期30卷 150-154页

作者：王戈林宁华沈萍彭珍荣武汉大学生命科学学院武汉430072

研究了表达酪氨酸酶的基因工程菌（Ｅ．ｃｏｌｉＷＹ８）产黑色素的条件。ＷＹ８能在酪素平板上产生可溶性黑色素，在添加酪氨酸的液体ＬＢ培养基中的黑色素产率是基因来源菌—Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ的５ ... 详细信息

研究了表达酪氨酸酶的基因工程菌（Ｅ．ｃｏｌｉＷＹ８）产黑色素的条件。ＷＹ８能在酪素平板上产生可溶性黑色素，在添加酪氨酸的液体ＬＢ培养基中的黑色素产率是基因来源菌—Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ的５倍。用正交试验法找到适宜发酵产黑色素的培养基，对摇瓶装量、菌龄、底物浓度、发酵温度和ｐＨ等因素的影响作了进一步探讨。

关键词：工程菌酪氨酸酶黑色素发酵条件

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酪氨酸酶用于废水处理

环境科学与技术 1996年第3期 44-45,38页

作者：王戈林彭珍荣沈萍武汉大学生命科学学院

酪氨酸酶用于废水处理王戈林，彭珍荣，沈萍武汉大学生命科学学院武汉４３００７２消除环境污染，保护环境＿，是全球日益关注的问题，废水生化处理是目前国内外净化水源的主要技术之一，人们预计生物工程中规模最大的生物反应器将是废... 详细信息

酪氨酸酶用于废水处理王戈林，彭珍荣，沈萍武汉大学生命科学学院武汉４３００７２消除环境污染，保护环境＿，是全球日益关注的问题，废水生化处理是目前国内外净化水源的主要技术之一，人们预计生物工程中规模最大的生物反应器将是废水处理生物反应器。今天的化学工业高...

关键词：环境污染酪氨酸酶废水处理生物反应器

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固定化假单胞菌产L-多巴

武汉大学学报（自然科学版） 1998年第4期44卷 481-484页

作者：王戈林毛歆彭珍荣沈萍武汉大学生命科学学院

选择海藻酸钙和聚乙烯醇凝胶为固定化载体包埋假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．），以提高该菌以Ｌ－酪氨酸为底物生产Ｌ－多巴的效率．海藻酸钙和聚乙烯醇固定的假单胞菌分别将发酵周期缩短了８和１４ｈ．半连续发酵的结果表明... 详细信息

选择海藻酸钙和聚乙烯醇凝胶为固定化载体包埋假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．），以提高该菌以Ｌ－酪氨酸为底物生产Ｌ－多巴的效率．海藻酸钙和聚乙烯醇固定的假单胞菌分别将发酵周期缩短了８和１４ｈ．半连续发酵的结果表明，海藻酸钙和聚乙烯醇固定化细胞分别能重复使用５次和１４次，Ｌ－多巴生产效率比游离细胞分别提高了１６％和１６０％．聚乙烯醇固定化细胞经过热处理和在生理盐水中振荡处理可明显提高Ｌ－多巴的生产效率和产量。

关键词：固定化细胞多巴 L-多巴聚乙烯醇假单胞菌

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质粒对*** HB101生长影响的微量热研究

云南大学学报（自然科学版） 1999年第S3期21卷 361-362页

作者：刘义王戈林赵儒铭沈萍屈松生武汉大学生命科学学院武汉大学化学与环境科学学院湖北武汉430072

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链霉菌酪氨酸酶基因的克隆与表达

氨基酸和生物资源 1996年第4期18卷 39-43页

作者：王戈林沈萍武汉大学生命科学学院

本文综述了近年来对链霉菌酪氨酸酶基因的研究。由酪氨酸酶合成黑色素是链霉菌属各个种的共同特性，并受到酪氨酸酶基因的控制。链霉菌几个种的酪氨酸酶基因已克隆到，其产黑色素的特性使之作为重要的标记基因得以广泛应用，同时，该基... 详细信息

本文综述了近年来对链霉菌酪氨酸酶基因的研究。由酪氨酸酶合成黑色素是链霉菌属各个种的共同特性，并受到酪氨酸酶基因的控制。链霉菌几个种的酪氨酸酶基因已克隆到，其产黑色素的特性使之作为重要的标记基因得以广泛应用，同时，该基因在链霉菌的不同种及不同属的微生物中得到了高水平的表达。链霉菌酪氨酸酶基因表达调控的分子机制也得到较深入的研究。

关键词：链霉菌酪氨酸酶基因基因克隆基因表达