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骨髓基质细胞条件液联合神经干细胞移植对帕金森病大鼠行为认知功能的影响:效果优于单纯神经干细胞移植吗?

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第19期14卷 3465-3470页

作者：顾平张忠霞王彦永崔冬生耿媛王铭维河北省脑老化与认知神经科学实验室河北省石家庄市050031 河北医科大学第一医院神经内科河北省石家庄市050031

背景：将骨髓基质细胞和神经干细胞分别单独移植于帕金森病模型鼠脑内已取得良好效果,但尚未见联合移植的报道。目的：观察骨髓基质细胞条件液与神经干细胞联合移植对帕金森病模型大鼠行为认知功能的影响,并与单纯神经干细胞移植效果进... 详细信息

背景：将骨髓基质细胞和神经干细胞分别单独移植于帕金森病模型鼠脑内已取得良好效果,但尚未见联合移植的报道。目的：观察骨髓基质细胞条件液与神经干细胞联合移植对帕金森病模型大鼠行为认知功能的影响,并与单纯神经干细胞移植效果进行比较。方法：用Neurobasal＋B27培养3~6代的骨髓基质细胞24h后,收集并离心上清液,即为骨髓基质细胞条件液。体外分离培养大鼠神经干细胞后,行BrdU标记。55只大鼠随机取8只作为正常组,剩余47只采用立体定向仪单侧黑质致密部和腹侧被盖区注射6-羟基多巴胺建立帕金森病动物模型。32只造模成功,随机分为3组,选取右侧纹状体两个坐标点为移植点,单纯神经干细胞组每点注入神经干细胞悬液5μL,联合组每点注入神经干细胞悬液＋骨髓基质细胞条件液5μL,模型组不注入任何液体。观察帕金森病大鼠旋转行为的改变,通过水迷宫试验对大鼠认知功能进行评价,免疫组织化学染色检测黑质区酪氨酸羟化酶蛋白的表达及移植区BrdU的表达。结果与结论：与模型组比较,移植后1~8周单纯神经干细胞组、联合组大鼠旋转次数均显著减少（P〈0.01）,移植后第4,8周单纯神经干细胞组、联合组大鼠逃避潜伏期均明显缩短（P〈0.05）,在平台象限的游泳时间百分比、游泳距离百分比、穿越平台次数均明显增加（P〈0.05）;后2组间各指标比较均无明显差异（P〉0.05）。移植后第8周,各组大鼠6-羟基多巴胺注射侧黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元和神经纤维表达基本缺失;单纯神经干细胞组、联合组移植区可见一定数量的BrdU阳性细胞表达,多数位于针道附近,部分细胞沿胼胝体迁移。提示骨髓基质细胞条件液与神经干细胞联合移植能改善帕金森病模型大鼠的旋转行为和认知能力,与单纯神经干细胞纹状体移植的效果基本相似。

关键词：帕金森病行为认知移植骨髓基质细胞条件液神经干细胞

骨髓基质细胞条件培养液诱导神经干细胞分化的信号转导机制

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细胞生物学杂志 2009年第3期31卷 424-428页

作者：马芹颖温雅顾平王彦永王铭维崔冬生刘力河北医科大学第一医院神经内科石家庄050031 河北省脑老化与认知神经科学实验室石家庄050031

研究MAPK信号转导通路在骨髓基质细胞条件培养液诱导神经干细胞分化中的作用及机制。用骨髓基质细胞条件培养液培养神经干细胞,并在培养体系中加入MAPK信号转导通路抑制剂PD98059(ERK1/2通路抑制剂)、SB203580(p38通路抑制剂)和genistin... 详细信息

研究MAPK信号转导通路在骨髓基质细胞条件培养液诱导神经干细胞分化中的作用及机制。用骨髓基质细胞条件培养液培养神经干细胞,并在培养体系中加入MAPK信号转导通路抑制剂PD98059(ERK1/2通路抑制剂)、SB203580(p38通路抑制剂)和genistin(JNK通路抑制剂),7天后经免疫荧光染色鉴定其后代中神经元和星形胶质细胞的比例,并将骨髓基质细胞条件培养液进行蛋白质微阵列检测。结果发现与对照组相比,PD98059和SB203580组神经干细胞分化为神经元比例降低,而星形胶质细胞比例增高,蛋白质微阵列测检发现骨髓基质细胞条件培养液中含有IL-4、IL-6、LIX和TNF-α4种细胞因子。研究结果显示骨髓基质细胞分泌的IL-4、IL-6、LIX和TNF-α4种细胞因子可能通过ERK1/2和p38信号转导通路调节神经干细胞的分化。

关键词： MAPK信号转导通路神经干细胞骨髓基质细胞细胞因子蛋白质微阵列分析

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骨髓基质细胞分泌蛋白的蛋白质质谱分析

解剖学报 2010年第1期41卷 60-64页

作者：马芹颖顾平王彦永王铭维崔冬生温雅刘力河北医科大学第一医院神经内科石家庄050031 河北省脑老化与认知神经科学实验室石家庄050031

目的通过Shotgun蛋白质组学分析,初步检测骨髓基质细胞(BMSCs)条件液中可能含有的蛋白质。方法将BMSCs条件液混匀后经超滤浓缩分为大于5kD和小于5kD两部分,并培养神经干细胞(NSCs),观察其后代中神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的比... 详细信息

目的通过Shotgun蛋白质组学分析,初步检测骨髓基质细胞(BMSCs)条件液中可能含有的蛋白质。方法将BMSCs条件液混匀后经超滤浓缩分为大于5kD和小于5kD两部分,并培养神经干细胞(NSCs),观察其后代中神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的比例,鉴定出能调节NSCs分化的部分,并进行Shotgun蛋白质组学分析。结果BMSCs条件液分子量大于5kD的部分可以调节NSCs向神经元和少突胶质细胞方向分化,这部分条件液先经过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)发现大部分蛋白集中在14kD以上,将蛋白条带酶解以后,经Shotgun分析共鉴定到456种蛋白质,其中154个相似蛋白质,17个假想蛋白质,56个未知蛋白质,剩余的229个蛋白质中大多为细胞骨架蛋白、分泌蛋白、信号转导蛋白、酶类和转运蛋白等。结论BMSCs分泌的多种蛋白质对NSCs的分化起调节作用,明确了BMSCs条件液中可能含有的成分。

关键词：骨髓基质细胞神经干细胞 Shotgun蛋白质组学分析

超选择动脉内溶栓治疗急性脑梗死46例疗效观察

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山东医药 2009年第15期49卷 67-68页

作者：张振清王铭维顾平孙秀巧王彦永王培芝河北医科大学第一医院河北石家庄050031 河北省脑老化与认知神经科学实验室

目的评价超选择性动脉溶栓治疗急性期脑梗死的疗效及安全性。方法对46例发病6 h内的急性脑梗死患者给予尿激酶超选择性动脉内溶栓治疗,分别于溶栓前,溶栓后24 h、14 d、3个月行NIHSS评分,3个月时行改良Rankin评分(mRS)。结果造影发现闭... 详细信息

目的评价超选择性动脉溶栓治疗急性期脑梗死的疗效及安全性。方法对46例发病6 h内的急性脑梗死患者给予尿激酶超选择性动脉内溶栓治疗,分别于溶栓前,溶栓后24 h、14 d、3个月行NIHSS评分,3个月时行改良Rankin评分(mRS)。结果造影发现闭塞38例,溶栓后血管再通33例(完全再通21例,部分再通12例);溶栓后各时间点NIHSS评分均明显下降(P均<0.05),3个月时mRS评分≤3分者28例;其间颅内出血2例,死亡3例。结论超选择性动脉内溶栓能提高闭塞血管再通率,改善患者预后。

关键词：急性脑梗死尿激酶动脉溶栓

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帕金森病患者血、尿β_2微球蛋白变化

临床荟萃 2007年第17期22卷 1233-1235页

作者：崔冬生顾平王彦永刘力耿媛郭记宏河北医科大学第一医院河北省脑老化与认知神经科学实验室河北医科大学第一医院神经内科河北石家庄050031

目的测定帕金森病患者血、尿β2微球蛋白的变化，了解是否存在肾功能的损害。方法收集病史资料；采用放射免疫分析方法，对84例帕金森患者和87例健康对照组的血β2微球蛋白及41例帕金森患者和40例健康对照的尿β2微球蛋白进行检测；... 详细信息

目的测定帕金森病患者血、尿β2微球蛋白的变化，了解是否存在肾功能的损害。方法收集病史资料；采用放射免疫分析方法，对84例帕金森患者和87例健康对照组的血β2微球蛋白及41例帕金森患者和40例健康对照的尿β2微球蛋白进行检测；同时比较发病1～5年、6～10年和10年以上帕金森患者血、尿β2微球蛋白结果。结果帕金森病患者血β2微球蛋白显著高于健康对照组[（2．41±0．85）mg／L vs（1．92±0．36）mg／L，P〈0．01]；帕金森患者尿β2微球蛋白显著高于健康对照组[（20．73±12．46）μg／h VS（9．22±3．59）μg／h，P〈0．013；发病1～5年、6～10年帕金森患者血β2微球蛋白分别为（2．66土0．76）mg／L、（3．41±1．20）mg／L，后者显著高于前者（P=0．000）。发病1～5年、6～10年帕金森患者尿β2微球蛋白分别为（17．8±7．41）μg／h、（28．42±10．51）μg／h，后者亦显著高于前者（P=0．000）。结论帕金森患者血、尿β2微球蛋白均增高，提示可能存在肾功能损害，并且损害程度可能与病程呈正相关。

关键词：帕金森病 β2微球蛋白放射免疫测定

重复经颅磁刺激对帕金森模型小鼠纹状体VMAT-2和SYN表达的影响

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第三军医大学学报 2008年第4期30卷 322-325页

作者：王全懂董巧云顾平王彦永刘静王铭维河北医科大学第一医院神经内科河北省脑老化与认知神经科学重点实验室石家庄050017

目的探讨重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic,rTMS)对帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)模型鼠纹状体多巴胺(dopamine,DA)含量及Ⅱ型单胺囊泡转运体(vesicular monoamine transporter-2,VMAT-2)和突触体素(synaptophysin,SYN)表达的影响。方法65只雄性C57BL/6J小鼠随机分为:对照组、PD模型组、假磁刺激组、rTMS-1组、rTMS-2组,每组13只。小鼠皮下注射MPTP(***-1,每小时注射1次,注射4次)复制帕金森病模型,重复经颅磁刺激干预,利用高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)测定纹状体DA含量;免疫组织化学染色检测VMAT-2和SYN的表达变化,并借助图像分析系统对其进行定量分析。结果rTMS-1组和rTMS-2组纹状体DA含量较对照组明显减少(P<0.01),但显著高于PD模型组和假磁刺激组(P<0.01);rTMS-1组和rTMS-2组纹状体VMAT-2和SYN表达均明显少于对照组且显著高于PD模型组和假磁刺激组,其免疫反应产物校正光密度值(COD)均显著低于对照组(P<0.05),并显著高于PD组和假磁刺激组(P<0.05),TMS-1组和rTMS-2组间无显著差异。结论rTMS可诱导PD鼠纹状体区DA释放增加,并使VMAT-2和SYN表达上调。

关键词：重复经颅磁刺激多巴胺纹状体 SYN VMAT-2

转染VMAT_2基因的CHO细胞抵抗多巴胺毒性作用的研究

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山东大学学报（医学版） 2007年第2期45卷 149-151页

作者：王铭维顾平刘力王彦永崔冬生河北医科大学第一医院神经内科河北石家庄050031 河北省脑老化与认知神经科学实验室河北石家庄050031

目的：探讨囊泡单胺转运体（vesicular monamine transporter-2，VMAT2）对多巴胺（dopamine，DA）毒性的抵抗作用。方法：采用细胞免疫荧光染色法测定VMAT2基因在转染的CHO细胞（VMAT2-CHO）中的表达：MTF比色法检测不同浓度DA作用下... 详细信息

目的：探讨囊泡单胺转运体（vesicular monamine transporter-2，VMAT2）对多巴胺（dopamine，DA）毒性的抵抗作用。方法：采用细胞免疫荧光染色法测定VMAT2基因在转染的CHO细胞（VMAT2-CHO）中的表达：MTF比色法检测不同浓度DA作用下的野生型CHO（WT-CHO）和VMAT2-CHO细胞存活率；应用ELISA法DA检测试剂盒测定细胞内DA的水平；采用活性氧检测试剂盒测定细胞内活性氧的水平。结果：VMAT2-CHO细胞内有较强的特异性荧光表达，主要定位在核周区域，胞浆中也有散在的荧光；0．25～0．4mmol／L DA作用72h，VMAT2-CHO细胞存活率显著高于WT-CHO细胞（P〈0．05）；0．4mmol／L DA作用于WT-CHO和VMAT2-CHO细胞24h，VMAT2-CHO细胞内DA为（199．33±15．155）ng／mi，显著高于WT-CHO细胞（141．4±8．784）ng／ml（P〈0．01）；而细胞内活性氧（ROS）水平则由（144．490±5．295）U／106 cells增加至WT-CHO细胞的（217．895±15．885）U／10^6cells（P〈0．01）。结论：转染VMAT2的CHO细胞对DA引起的毒性有显著的抵抗作用。

关键词：囊泡单胺转运蛋白2 多巴胺活性氧中国仓鼠卵巢细胞

MPTP对快速老化小鼠SAMP8学习记忆能力及黑质多巴胺神经元的影响

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第二军医大学学报 2008年第11期29卷 1337-1340页

作者：苑振云顾平籍文强崔冬生刘力王彦永耿媛王铭维河北医科大学第一医院急诊科石家庄050031 河北省脑老化与认知神经科学实验室石家庄050031 河北医科大学第一医院神经内科石家庄050031

目的:探讨1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)对SAMP8小鼠空间学习和记忆能力及黑质多巴胺神经元的影响。方法:采用雄性3个月龄SAMP8小鼠皮下注射MPTP(36mg/kg),连续5d。对照组皮下注射生理盐水(NS,36ml/kg)。用Morris水迷宫测试小... 详细信息

目的:探讨1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)对SAMP8小鼠空间学习和记忆能力及黑质多巴胺神经元的影响。方法:采用雄性3个月龄SAMP8小鼠皮下注射MPTP(36mg/kg),连续5d。对照组皮下注射生理盐水(NS,36ml/kg)。用Morris水迷宫测试小鼠的寻找平台潜伏期及搜索策略。免疫组织化学观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性多巴胺能神经元变化。结果:MPTP小鼠黑质致密部TH免疫反应阳性神经元数目明显少于对照组(P<0.01)。Morris水迷宫实验表明MPTP小鼠寻找平台潜伏期较对照组明显延长(P<0.01),在目标象限(第Ⅰ象限)游泳时间比对照组明显降低(P<0.01),在对侧象限(第Ⅳ象限)游泳时间比对照组明显升高(P<0.05),搜寻策略较对照组变差。结论:MPTP可造成SAMP8小鼠黑质多巴胺神经元损伤,并出现空间学习记忆能力下降。

关键词： MPTP SAMP8 多巴胺能神经元学习记忆

丰富环境对快速老化小鼠SAMP8情感的影响

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第四军医大学学报 2009年第20期30卷 2231-2234页

作者：苑振云顾平刘力崔冬生刘静王彦永耿媛朱爱萍马琳王铭维河北医科大学第一医院急诊科河北医科大学河北省脑老化与认知神经科学实验室河北石家庄050031 河北医科大学第一医院神经内科

目的:探讨丰富环境对快速老化小鼠SAMP8情感的影响.方法:3mo龄SAMP8小鼠和3mo龄SAMR1小鼠随机分为丰富环境组(n=16)和标准环境组(n=10),饲养3mo后用高架十字迷宫实验评测小鼠的情感改变.用RT-PCR方法检测小鼠海马脑源性神经生长因子(BD... 详细信息

目的:探讨丰富环境对快速老化小鼠SAMP8情感的影响.方法:3mo龄SAMP8小鼠和3mo龄SAMR1小鼠随机分为丰富环境组(n=16)和标准环境组(n=10),饲养3mo后用高架十字迷宫实验评测小鼠的情感改变.用RT-PCR方法检测小鼠海马脑源性神经生长因子(BDNF)的表达.结果:丰富环境组小鼠进入开放臂次数比例(OE%)及在开放臂停留的时间(OT%)比例均明显高于标准环境组(P<0.01).丰富环境组海马BDNFmRNA的表达明显高于标准环境组(P<0.01).结论:丰富环境能提高SAMP8小鼠海马BDNFmRNA的表达,并对SAMP8小鼠的精神行为具有干预作用,降低SAMP8小鼠的焦虑行为.

关键词：丰富环境快速老化小鼠P8 高架十字迷宫脑源性神经生长因子情感