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大口黑鲈G6pc和Gck的原核表达、抗体制备及饲料淀粉水平对其表达的影响

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水生生物学报 2024年

作者：夏如孙皓王康伟莫丁瑞黄正何远法林仕梅陈拥军西南大学水产学院水产科学重庆市市级重点实验室淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室

葡萄糖-G6P (葡萄糖-6-磷酸)间相互转化的失调被认为是肉食性鱼类糖耐受能力低下的重要原因,但这一现象是否适用于大口黑鲈尚不明晰。为深入研究营养因子调控大口黑鲈葡萄糖稳态的分子机制,研究成功克隆并构建了大口黑鲈葡萄糖-6-磷酸... 详细信息

葡萄糖-G6P (葡萄糖-6-磷酸)间相互转化的失调被认为是肉食性鱼类糖耐受能力低下的重要原因,但这一现象是否适用于大口黑鲈尚不明晰。为深入研究营养因子调控大口黑鲈葡萄糖稳态的分子机制,研究成功克隆并构建了大口黑鲈葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6pc)和葡萄糖激酶(Gck)截短序列的重组质粒载体,转化至Escherichia coli Rosetta感受态细胞并以1 mmol/L IPTG (异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)、16℃诱导表达过夜,在细胞破碎后的上清中得到了大量表达。通过GST-tag亲和层析的方法纯化得到高纯度的G6pc和Gck截短重组蛋白后,将其分别与弗氏佐剂乳化成免疫原,免疫KM小鼠5次,成功制备具有高特异性和高效价的多克隆抗体(G6pc和Gck抗体的效价分别大于1:3000和1:10000)。Westen blot检测发现大口黑鲈G6pc和Gck蛋白主要分布在肝脏中,免疫荧光染色显示G6pc的阳性信号定位于细胞核周围,而Gck的阳性信号散布整个细胞。8周养殖实验结束后,随饲料淀粉水平以6%的梯度从8%增加到20%,大口黑鲈肝脏中糖酵解和糖原合成关键酶编码基因的表达及Gck水平逐渐升高,但糖异生和糖原分解关键酶编码基因的表达及G6pc水平仅在14%淀粉水平时被抑制,意味着在高淀粉水平(20%)下大口黑鲈肝脏中葡萄糖-G6P间的相互转化发生了无效循环。综上所述,研究成功制备了大口黑鲈G6pc和Gck特异性识别的多克隆抗体,探明了饲料淀粉水平对其表达的影响,为深入研究G6pc和Gck在大口黑鲈葡萄糖稳态维持过程中的重要作用奠定了基础。

关键词：葡萄糖-6-磷酸酶葡萄糖激酶原核表达多克隆抗体大口黑鲈

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我国低空经济产业发展现状、问题及对策研究

产业创新研究 2024年第15期 49-51页

作者：王康伟惠州工程职业学院广东惠州516000

低空经济是低空飞行活动与产业融合的新型经济形态,创新要素集中,具有高科技、高效能、高质量等特征,符合新发展理念,是我国战略性新兴产业,是新质生产力的典型代表。进入21世纪20多年间,各国政府高度重视空天领域开发,共同推动全球低... 详细信息

低空经济是低空飞行活动与产业融合的新型经济形态,创新要素集中,具有高科技、高效能、高质量等特征,符合新发展理念,是我国战略性新兴产业,是新质生产力的典型代表。进入21世纪20多年间,各国政府高度重视空天领域开发,共同推动全球低空经济产业迅猛发展。我国作为全球最大的低空经济市场,产业发展动能澎湃。低空经济正在成为我国经济增长的新引擎。

关键词：低空经济产业发展新质生产力

金川三矿区巷道围岩松动圈厚度的确定及支护试验

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矿业研究与开发 2024年第1期44卷 125-131页

作者：王康伟王文杰张鹏强朱大铭武汉科技大学资源与环境工程学院湖北武汉430081 镍钴资源综合利用国家重点实验室甘肃金昌市737100 金川镍钴研究设计院有限责任公司甘肃金昌市737100 金川集团股份有限公司三矿区甘肃金昌市737100

巷道松动圈厚度是确定合理支护参数的重要依据。针对巷道顶板松动圈测试困难的问题,以金川三矿区1330m水平分段巷道为研究对象,首先采用超声波法对巷道帮部围岩进行松动圈测试;其次根据测试结果,采用黄金分割法对Hoek-Brown强度准则中... 详细信息

巷道松动圈厚度是确定合理支护参数的重要依据。针对巷道顶板松动圈测试困难的问题,以金川三矿区1330m水平分段巷道为研究对象,首先采用超声波法对巷道帮部围岩进行松动圈测试;其次根据测试结果,采用黄金分割法对Hoek-Brown强度准则中的单轴抗压强度σc、H-B常数mi、地质强度指标GSI及岩体扰动参数D进行参数反演;然后结合三矿区实测地应力,采用Hoek-Brown强度准则及参数反演结果计算出巷道顶板围岩松动圈的厚度;最后对三矿区1330m水平不同类型围岩松动圈进行分类,根据分类结果提出不同的支护参数,并进行了现场支护试验,巷道支护效果良好。研究结果为巷道围岩松动圈的确定提供了新的方法和技术支撑。

关键词：巷道支护围岩松动圈超声波法黄金分割法正交试验

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累及大血管的腹膜后肿瘤处理策略探讨

中国肿瘤临床 2024年第2期51卷 98-102页

作者：屈国伦曲兴龙张洪强王洪波王康伟彭帅(综述) 陈勇(审校) 复旦大学附属肿瘤医院闵行分院肿瘤外科上海市201100 复旦大学附属肿瘤医院骨及软组织外科

腹膜后肿瘤(retroperitoneal tumor,RPT)发病较为隐匿,出现症状时肿瘤往往体积较大,多侵犯周围组织与脏器,尤其是腹腔重要血管,是RPT手术主要难点。累及大血管RPT的处理常被很多外科医生视为禁区,但手术仍是目前治疗该病唯一有效的方法... 详细信息

腹膜后肿瘤(retroperitoneal tumor,RPT)发病较为隐匿,出现症状时肿瘤往往体积较大,多侵犯周围组织与脏器,尤其是腹腔重要血管,是RPT手术主要难点。累及大血管RPT的处理常被很多外科医生视为禁区,但手术仍是目前治疗该病唯一有效的方法,累及大血管RPT的处理决策是提高肿瘤手术切除率的关键。因此,术前对肿瘤累及血管程度的评估,术中对血管重建技术的应用对于肿瘤完整切除至关重要。术前应用影像学检查了解RPT与腹腔大血管之间的关系、浸润情况,手术中良好的术野为处理和控制血管出血创造了有利条件;累及大血管RPT在完整切除时,需要对一些重要的血管进行修复与重建,自体血管的使用技术已日益成熟,人工血管和补片的应用也为手术创造了条件。术前评估、手术策略、术后管理对肿瘤外科医生在累及大血管RPT的患者治疗过程中起着至关重要的作用。

关键词：腹膜后肿瘤累及大血管策略

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长江江豚迁地保护需要注意的几个问题

南京师大学报（自然科学版） 2024年第2期47卷 91-98页

作者：王康伟周开亚陈敏敏糜励于道平安庆师范大学生命科学学院安徽安庆246133 南京师范大学生命科学学院江苏南京210023 铜陵淡水豚国家级自然保护区管理局安徽铜陵244001

迁地保护是保护生物学的重要手段之一,把小型鲸类从长江干流迁入故道,是中国在世界上首创的保护措施.本文回顾了30年来长江江豚(Neophocaena asiaeorientalis)的迁地保护历史,结合已有的研究成果和实践经验,对半自然水域中的水文环境、... 详细信息

迁地保护是保护生物学的重要手段之一,把小型鲸类从长江干流迁入故道,是中国在世界上首创的保护措施.本文回顾了30年来长江江豚(Neophocaena asiaeorientalis)的迁地保护历史,结合已有的研究成果和实践经验,对半自然水域中的水文环境、食物资源和日常管理的共性问题进行讨论与分析.这些建议旨在引起管理部门的重视,加强科学研究,确保迁地保护更好的发展.

关键词：长江江豚迁地保护水动力渔业资源半自然水域

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广东海洋经济发展现状、问题及对策

大众投资指南 2024年第12期 54-56页

作者：王康伟朱燕平陈康惠州工程职业学院

近年来，广东全面推进海洋强省建设，构建了科学高效的海洋经济发展格局，在打造海上新广东上取得新突破。但对照我国要求全面建设海洋强省的新要求，广东还存在一定差距。新时期全力推动广东海洋经济高质量发展，应以更加国际和宏观的... 详细信息

近年来，广东全面推进海洋强省建设，构建了科学高效的海洋经济发展格局，在打造海上新广东上取得新突破。但对照我国要求全面建设海洋强省的新要求，广东还存在一定差距。新时期全力推动广东海洋经济高质量发展，应以更加国际和宏观的视野、创新和改革思维，面向更广阔的南海，构建海洋命运共同体，增强资本市场支撑和优化港产城整体布局，为海洋强国建设做出更大的贡献。

关键词：广东海洋强省海洋经济海洋产业海洋城市

72例屏障切除术治疗四肢软组织肉瘤的切缘及疗效评估

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中国癌症杂志 2024年第3期34卷 293-298页

作者：屈国伦张如明陈勇曲兴龙张洪强王洪波王康伟彭帅复旦大学附属肿瘤医院闵行分院肿瘤外科上海200240 复旦大学附属肿瘤医院骨软组织外科复旦大学上海医学院肿瘤学系上海200032

背景与目的:四肢软组织肉瘤(soft tissue sarcoma,STS)是一类常见的恶性肿瘤,外科手术切除是其主要的治疗方法,而屏障概念的提出,让我们认识到自然屏障对STS的阻挡作用,寻找可以作为屏障作用的组织,进行以该组织屏障外围作为手术切缘的... 详细信息

背景与目的:四肢软组织肉瘤(soft tissue sarcoma,STS)是一类常见的恶性肿瘤,外科手术切除是其主要的治疗方法,而屏障概念的提出,让我们认识到自然屏障对STS的阻挡作用,寻找可以作为屏障作用的组织,进行以该组织屏障外围作为手术切缘的整块切除,从而保证很高的切缘阴性率并获得良好的局部控制效果。本研究旨在探讨屏障切除术治疗四肢STS的可行性、安全性及患者预后。方法:对2013年12月—2016年9月在复旦大学附属肿瘤医院闵行分院肿瘤外科行四肢STS屏障切除术且切缘进行取材的72例患者进行回顾性分析,72例患者手术均在术前行磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)或计算机体层成像(computed tomography,CT)进行设计,于肿瘤所在解剖位置向外找到生理屏障或至少3 cm距离,并在此屏障外或3 cm距离以外进行整块切除。分析术后病理学切缘、国际骨与软组织肿瘤协会(musculoskeletal tumor society,MSTS)评分及术后并发症对患者的影响,评估患者1和3年的无局部区域复发生存(locoregional recurrencefree survival,LRFS)率和肉瘤特异性生存(sarcoma-specific survival,SSS)率,并对影响因素进行分析。本研究经复旦大学附属肿瘤医院伦理委员会审核通过(编号:1212117-12&1212117-12-1301)。结果:全部病例切缘均为阴性,1和3年的LRFS率分别为98.2%和93.8%,1和3年的SSS率分别为98.4%和94.2%。平均MSTS评分术前为28.3分,术后为25.5分。手术并发症1~2级20例,3级1例,无4~5级并发症。结论:基于临床、影像学和病理学三者相结合,包含肿瘤切除和功能重建的屏障切除术应用于STS的外科治疗,具有较好的可行性和安全性,切缘可靠,局部控制较满意。

关键词：软组织肉瘤屏障切缘保肢手术

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构造地质学虚拟仿真实验设计与实现

实验室科学 2024年第4期27卷 51-55,59页

作者：唐亮余养里陈伟王康伟西南石油大学计算机与软件学院四川成都610500 西南石油大学地球科学与技术学院四川成都610500 通威太阳能(成都)有限公司四川成都610500

由于构造地质学研究的对象为各种构造现象,其具有形成过程长期性、变形条件复杂性、变形过程不可逆性及实验室难以完全还原等特征,使得在构造地质学的教学和学习过程中,理论知识和实践观察中的构造现象仅以结果呈现,制约了学生对断层、... 详细信息

由于构造地质学研究的对象为各种构造现象,其具有形成过程长期性、变形条件复杂性、变形过程不可逆性及实验室难以完全还原等特征,使得在构造地质学的教学和学习过程中,理论知识和实践观察中的构造现象仅以结果呈现,制约了学生对断层、褶皱等构造现象形成过程的认识,造成学生无法有效吸收构造地质理论知识并触类旁通应用于构造实践。采用虚拟仿真实验方法是开展该类实验教学和工程实践技能训练的有效途径。以西南石油大学“构造地质学”这门课程的实验教学资源建设为例,介绍其教学资源应用案例、教学体系建设与实现。

关键词：构造地质学虚拟仿真教学体系实验教学

饲料蛋白和淀粉水平对大口黑鲈生长、饲料利用和肝脏健康的影响

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饲料蛋白和淀粉水平对大口黑鲈生长、饲料利用和肝脏健康的影响

作者：王康伟西南大学

学位级别：硕士

近年来,随着人工配合饲料的技术突破与推广,大口黑鲈(Micropterus salmoides)的养殖区域和养殖规模迅速扩张,养殖产量迅速攀升,在2020年我国大口黑鲈的养殖总产量就已超过60万吨。虽然全程饲料养殖技术日益成熟,但在养殖中、后期,摄食... 详细信息

近年来,随着人工配合饲料的技术突破与推广,大口黑鲈(Micropterus salmoides)的养殖区域和养殖规模迅速扩张,养殖产量迅速攀升,在2020年我国大口黑鲈的养殖总产量就已超过60万吨。虽然全程饲料养殖技术日益成熟,但在养殖中、后期,摄食配合饲料极易导致大口黑鲈肝脏病变。饲料淀粉水平是影响大口黑鲈肝脏健康最主要的因素,当淀粉超过10%左右就会诱导肝损伤,但其潜在机制仍然未知。大口黑鲈代谢性肝损伤推动了其饲料淀粉水平下行,低淀粉饲料中过高的蛋白水平除导致成本上升外,亦可能加剧大口黑鲈肝脏的代谢负担。因此,本论文旨在研究饲料蛋白和淀粉水平对大口黑鲈的生长、饲料利用、血浆(清)生化和肝脏健康的影响,并借助转录组分析探究了高淀粉饲料诱导大口黑鲈肝损伤的潜在机制,主要研究内容如下:1.投喂低蛋白高淀粉饲料对大口黑鲈生长、饲料利用、血浆生化及肝细胞炎症和凋亡的影响本实验配制了两组等脂等能的饲料,分别为高蛋白低淀粉组(P49S9,含48.8%蛋白和9.06%淀粉)和低蛋白高淀粉饲料(P42S18,含42.4%蛋白和18.2%淀粉)。将初始体重为4.65 g的大口黑鲈幼鱼随机分到6个循环水玻璃缸(体积为250 L)中,每个处理组设置3个重复,每个重复分配25尾鱼。养殖试验的周期为8周,投喂模式为表观饱食投喂。结果表明,尽管P42S18组通过增加摄食率以尽可能满足其蛋白需求,但P42S18组的饲料效率和生长性能仍低于P49S9组。过碘酸希夫反应(PAS)染色显示,投喂低蛋白高淀粉饲料会促进大口黑鲈肝脏糖原累积,其原因可能与糖原分解酶(糖原脱支酶,gde)的表达下调有关。摄食低蛋白高淀粉饲料的大口黑鲈肝脏脂肪水平较低,这可能是与脂蛋白酯酶(反映甘油三酯合成,上调)和二酰基甘油酰基转移酶(反映甘油三酯分解,下调)调节的肝脏甘油脂代谢改变有关。虽然空腹血浆葡萄糖水平相当,但P42S18组葡萄糖耐受能力比P49S9组要差。苏木精-伊红染色法(H&E)和TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色结果表明,投喂低蛋白高淀粉饲料会破坏大口黑鲈肝细胞结构完整性,并诱导炎症反应和细胞凋亡。KEGG富集分析表明,上调的差异表达基因主要富集在AGE(高级糖化终末产物)/RAGE(AGE受体)、Toll-like receptor和Apoptosis信号通路中。转录组分析显示,投喂低蛋白高淀粉饲料可能通过促进AGEs在大口黑鲈肝脏中累积,与RAGE结合并激活PI3K/Akt信号途径。Akt的激活诱导NF-κB转位到细胞核,促进肿瘤坏死因子-α(tnf-α)和白细胞介素-8(il-8)的释放,这些炎症因子可通过Toll-like receptor信号传导途径诱导T细胞刺激和自然杀伤细胞趋化作用。除了介导炎症和免疫反应,TNF-α信号转导可通过TNF受体(TNF-R1)途径参与介导细胞凋亡,上调半胱天冬氨酸特异性蛋白酶8(caspase 8)和细胞色素c(cytc)的表达。综上所述,本实验结果表明,投喂低蛋白高淀粉饲料可通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路诱导大口黑鲈肝细胞炎症反应和凋亡发生。2.饲料淀粉水平对大口黑鲈生长性能、饲料利用、血清生化和肝脏健康的影响本试验配制了三组不同淀粉水平的饲料,分别为低淀粉组(LC,8.13%淀粉)、中淀粉组(MC,14.1%淀粉)和高淀粉组(HC,20.1%淀粉)。将初始体重为6.37±0.07 g的大口黑鲈幼鱼随机分到9个循环水玻璃缸(体积为250 L)中,每个处理组设置3个重复,每个重复分配20尾鱼。养殖试验的周期为8周,采用表观饱食投喂模式。结果表明,虽然HC组的饲料效率上升,但与LC组相比,HC组的摄食率和生长性能下降。随着饲料淀粉水平增加,大口黑鲈肝脏糖原含量逐渐上升,这可能是HC组肝体比增加的原因。H&E、Masson和TUNEL染色表明,投喂高淀粉饲料会破坏大口黑鲈肝细胞结构的完整性,诱导炎症反应、细胞凋亡及纤维化。KEGG富集分析表明,与LC组相比,HC组的差异表达基因主要富集在Apoptosis、Toll-like receptor、NOD-like receptor和Hedgehog信号通路中。转录组分析显示,高淀粉饲料通过PI3K/Akt/NF-κB信号轴促进促炎趋化因子因子(干扰素诱导蛋白,ip-10)和促炎因子(白细胞介素-8,il-8)的释放,进而诱导肝脏炎症反应。凋亡信号在HC组产生后,通过Hedgehog信号通路激活了GliA/Gli信号轴,导致细胞外基质蛋白(I型胶原蛋白,col1a1)增加,促进肝星状细胞的活化而诱导肝脏纤维化。高淀粉饲料通过Fas-L/Fas/FADD信号通路活化了caspase 8,进而诱导大口黑鲈肝细胞凋亡。此外,在Apoptosis信号通路中的存活因子

关键词：大口黑鲈高淀粉饲料高蛋白饲料生长性能肝脏健康