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自然流产患者蜕膜组织疾病特异蛋白的初步筛选与鉴定

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重庆医学 2010年第21期39卷 2861-2863,F0002页

作者：陈倩谭彬王应雄黎刚胡建刚余秋波重庆医科大学生殖生物学研究室 400016

目的建立早期自然流产蜕膜组织和早期正常蜕膜组织双向电泳图谱,并观察两者之间蛋白表达的差异。方法采用双向电泳技术分离蜕膜组织蛋白,利用专用软件分析所得差异明显蛋白并使用免疫组化和Western blotting验证双向电泳结果。结果成功... 详细信息

目的建立早期自然流产蜕膜组织和早期正常蜕膜组织双向电泳图谱,并观察两者之间蛋白表达的差异。方法采用双向电泳技术分离蜕膜组织蛋白,利用专用软件分析所得差异明显蛋白并使用免疫组化和Western blotting验证双向电泳结果。结果成功建立了早期自然流产蜕膜组织和早期正常蜕膜组织双向电泳图谱,并鉴定出9个差异显著的蛋白。结论 9个差异显著的蛋白的功能主要涉及绒毛外滋养细胞的侵袭、自然流产蜕膜组织血管的重建以及蜕膜细胞的凋亡等方面,为进一步研究自然流产发病机制和治疗手段奠定了基础。

关键词：自然流产蜕膜蛋白质组学

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燃煤型氟中毒患者血化学元素含量的变化

重庆医科大学学报 2013年第10期38卷 1214-1218页

作者：闫菊钟朝晖王应雄雍开文张茂忠晏维重庆医科大学公共卫生与管理学院流行病学教研室重庆400016 重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物学研究室重庆400016 重庆市地质矿产勘查开发局地质科技信息处重庆401121 重庆市地质矿产勘查开发局川东南地质大队地球化学勘查院重庆400038 重庆市疾病预防控制中心地方病与寄生虫病预防控制所重庆400042

目的:探讨血锌(Zinc,Zn)、钙(Calcium,Ca)、铜(Copper,Cu)、镁(Magnesium,Mg)、铁(Ferrum,Fe)含量与燃煤污染型地方性氟中毒(燃煤型氟中毒)发病的关联,寻找行之有效的抗氟元素。方法:采取分层整群随机抽样方法,在病区和非病区共选取250... 详细信息

目的:探讨血锌(Zinc,Zn)、钙(Calcium,Ca)、铜(Copper,Cu)、镁(Magnesium,Mg)、铁(Ferrum,Fe)含量与燃煤污染型地方性氟中毒(燃煤型氟中毒)发病的关联,寻找行之有效的抗氟元素。方法:采取分层整群随机抽样方法,在病区和非病区共选取250例儿童及90例成人进行1∶2配对病例-对照研究,对研究对象进行空腹静脉抽血及收集即时尿液,原子吸收光谱仪测研究对象血Zn、Ca、Cu、Mg、Fe含量及氟离子选择电极法测尿氟含量。结果:巫山儿童血Zn含量为外对照组(78.82±11.40)μmol/L>内对照组(73.39±8.99)μmol/L>病例组(69.01±6.98)μmol/L;奉节儿童血Zn含量也为外对照组(78.82±11.40)μmol/L>内对照组(77.66±12.03)μmol/L>病例组(72.76±10.87)μmol/L;巫山成人血Zn含量也为外对照组(101.21±11.91)μmol/L>内对照组(97.92±11.51)μmol/L>病例组(91.13±10.29)μmol/L(P均小于0.05)。巫山、奉节儿童血Cu、Fe含量均为外对照组大于病例组及内对照组(P均小于0.01)。巫山、奉节儿童及巫山成人尿氟含量为病例组大于内、外对照组(P均小于0.01)。奉节病例组血Zn(72.76±10.87)μmol/L、Ca(1.82±0.19)mmol/L及尿氟(0.83±0.37)mg/L含量大于巫山病例组血Zn(69.01±6.98)μmol/L、Ca(1.41±0.12)mmol/L及尿氟(0.65±0.33)mg/L含量;奉节内对照组血Zn(77.66±12.03)μmol/L、Ca(1.85±0.23)mmol/L及尿氟(0.53±0.23)mg/L含量也大于巫山内对照组血Zn(73.39±8.99)μmol/L、Ca(1.45±0.21)mmol/L及尿氟(0.43±0.18)mg/L含量;血Zn、尿氟P均小于0.05;血Ca P值均小于0.01。结论:除主要致病元素氟外,两县燃煤型氟中毒发病与机体Zn、Ca、Cu、Fe含量关系密切,患者血Zn含量降低,两县儿童体内Cu、Fe含量水平较低;随着病区严重程度增加,病区人群血Zn、Ca含量减少。

关键词：燃煤污染型地方性氟中毒血化学元素

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子宫蜕膜白血病抑制因子基因表达研究

重庆医科大学学报 2002年第3期27卷 241-242,246页

作者：黎刚王应雄重庆医科大学遗传优生教研室重庆400016

目的:探讨白血病抑制因子(LIF)基因在人类妊娠早期蜕膜组织的表达情况。LIF方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应()技术,对例正常妊娠早期妇女子宫蜕膜进行检测。RT-PCR36LIFmRNA结果:例蜕膜组织均有较强表36LIFmRNA达,平均表达水平为1.31... 详细信息

目的:探讨白血病抑制因子(LIF)基因在人类妊娠早期蜕膜组织的表达情况。LIF方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应()技术,对例正常妊娠早期妇女子宫蜕膜进行检测。RT-PCR36LIFmRNA结果:例蜕膜组织均有较强表36LIFmRNA达,平均表达水平为1.314±。0.457结论:人基因表达可能同早期胚胎发育和妊娠维持有关。

关键词：基因表达白血病抑制因子蜕膜

Mmu-miR-24对小鼠着床期子宫内膜基质细胞和蜕膜细胞的调节作用

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重庆医科大学学报 2017年第8期42卷 959-964页

作者：杨洋吴梦云李荣王应雄刘学庆重庆医科大学公共卫生与管理学院生殖生物研究室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016

目的:探讨mmu-mi R-24在小鼠子宫内膜基质细胞和蜕膜细胞中的作用。方法:收集妊娠第1、4、5、6天(D1、D4、D5、D6)的小鼠子宫;分离小鼠基质细胞,体外激素人工诱导蜕膜化。实时定量PCR(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)、原位杂交(i... 详细信息

目的:探讨mmu-mi R-24在小鼠子宫内膜基质细胞和蜕膜细胞中的作用。方法:收集妊娠第1、4、5、6天(D1、D4、D5、D6)的小鼠子宫;分离小鼠基质细胞,体外激素人工诱导蜕膜化。实时定量PCR(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)、原位杂交(in situ hybridization,ISH)以及蛋白印迹(Western blot)检测mmu-mi R-24及相应因子的表达。采用脂质体2000转染mmumi R-24模拟物(mimics)及抑制物(inhibitor)模型上调或下调mmu-mi R-24表达后,检测细胞凋亡与细胞周期。结果:mmumi R-24在D1高表达,且表达量高于D4(P=0.003)。mmu-mi R-24在D4的腔上皮、腺上皮及少量基质细胞中表达,而在妊娠第5天着床点(D5implantation site,D5IS)及妊娠第6天着床点(D6IS)的蜕膜区表达,且D5IS的表达量高于第5天着床旁(D5interimplantation site,D5IIS)的表达量,但无统计差异(P=0.094)。在基质细胞中,mimics干扰后,S期的细胞数降低(P=0.000),增殖因子PCNA表达降低,总凋亡细胞数目增加(P=0.042),凋亡因子BAX表达增高;通过inhibitor干扰后,G1期细胞数降低(P=0.005),S期与G2期细胞数有所升高(P=0.075,P=0.054),PCNA表达增多,晚期凋亡细胞数目减少(P=0.009),BAX表达降低。在蜕膜细胞中,mimics干扰后,与对照组相比,G1期细胞数升高(P=0.002),S期细胞数降低(P=0.000),PCNA表达降低,晚期凋亡细胞数目增加(P=0.025),BAX表达增多;inhibitor干扰后,与对照组相比,S期细胞数升高(P=0.026),PCNA表达增多;晚期凋亡细胞数目减少(P=0.006),BAX表达降低。结论:在胚胎植入前,mmu-mi R-24的低表达可促进基质细胞的增殖;在胚胎植入期,mmu-mi R-24的高表达可促进蜕膜细胞凋亡,有利于妊娠的维持。

关键词： mmu-miR-24 胚胎植入蜕膜化细胞凋亡细胞增殖

功能蛋白O-GlcNAc糖基化修饰调控绒毛膜癌细胞的转移

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中国细胞生物学学报 2013年第7期35卷 922-927页

作者：屈茹楠琚娜娜吴明军赵德璋王应雄杨竹于超重庆医科大学生命科学研究院重庆400016

为研究氧连接N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)糖基化修饰调控人绒毛膜癌细胞(JAR)迁移的分子机制,首先采用siRNA和酶特异性抑制剂作用细胞,构建O-GlcNAc修饰总蛋白低表达和高表达的细胞模型;利用Transwell方法... 详细信息

为研究氧连接N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)糖基化修饰调控人绒毛膜癌细胞(JAR)迁移的分子机制,首先采用siRNA和酶特异性抑制剂作用细胞,构建O-GlcNAc修饰总蛋白低表达和高表达的细胞模型;利用Transwell方法及黏附实验比较细胞迁移及与血管内皮细胞黏附能力的变化;并通过免疫共沉淀技术检测重要的功能蛋白β-catenin的O-GlcNAc程度,从而分析蛋白转录翻译后调控对肿瘤细胞迁移影响的分子机制。结果表明,增加JAR细胞中O-GlcNAc修饰水平可促进细胞迁移及与血管内皮细胞的黏附活性,且O-GlcNAc修饰作用的靶蛋白β-catenin的糖基化水平也显著增加。当下调细胞中O-GlcNAc蛋白修饰水平,其迁移及黏附能力随之下降。表明O-GlcNAc修饰参与了绒毛膜癌细胞转移的调控。

关键词： O-GlcNAc 绒毛膜癌细胞迁移黏附 β-catenin

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复发性流产患者子宫蜕膜基因表达谱

中国细胞生物学学报 2013年第4期35卷 450-459页

作者：张娟娟何俊琳刘学庆陈雪梅王应雄丁裕斌重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学实验室重庆400016

从基因组角度分析复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者子宫蜕膜异常表达基因,为寻找不明原因RSA可能的发生机制及筛选特异性标志分子提供实验依据。分离RSA患者和正常早孕妇女的子宫蜕膜,提取RNA标记后用于表达谱芯片杂... 详细信息

从基因组角度分析复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者子宫蜕膜异常表达基因,为寻找不明原因RSA可能的发生机制及筛选特异性标志分子提供实验依据。分离RSA患者和正常早孕妇女的子宫蜕膜,提取RNA标记后用于表达谱芯片杂交,生物信息学分析芯片数据,RT-PCR验证芯片结果。结果显示,与正常对照相比较,RSA患者蜕膜中共发现差异表达基因1 656个,其中上调基因1 184个,下调基因472个。基因功能分类显示差异表达基因涉及多个生物学过程和功能,包括代谢、细胞与细胞间作用、生殖、发育、外来刺激应激、细胞增殖、补体激活等。信号通路分析显示,8个信号通路可能参与了RSA的发生,包括FoxO家族(FoxO family signaling)和Akt介导Class I PI3K(Class I PI3K signaling events mediated by Akt)等信号通路。半定量PCR验证表达谱芯片中RSA患者蜕膜异常表达基因,与正常对照相比较,DKK1、GADD45A和GNLY基因表达显著上调,而DLK1的表达则显著下调,结果与基因芯片的结果有较好的一致性。RSA患者子宫蜕膜基因表达谱发生显著改变,这与RSA的发生密切相关。

关键词：复发性流产子宫蜕膜基因表达谱

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HeLa 细胞染色体着丝粒点变异研究

肿瘤 1997年第3期17卷 151-153页

作者：王应雄刘学庆翁亚光何俊琳郑增淳重庆医科大学遗传优生教研室

目的探讨染色体着丝粒点（Ｃｄ）的变异与ＨｅＬａ瘤细胞染色体非整倍性畸变的关系。方法用Ｃｄ分析技术研究ＨｅＬａ细胞染色体Ｃｄ的变异。结果ＨｅＬａ细胞染色体Ｃｄ缺失率为２．１０％、Ｃｄ迟滞复制率为０．２３％；与正常人胚胎... 详细信息

目的探讨染色体着丝粒点（Ｃｄ）的变异与ＨｅＬａ瘤细胞染色体非整倍性畸变的关系。方法用Ｃｄ分析技术研究ＨｅＬａ细胞染色体Ｃｄ的变异。结果ＨｅＬａ细胞染色体Ｃｄ缺失率为２．１０％、Ｃｄ迟滞复制率为０．２３％；与正常人胚胎绒毛细胞染色体Ｃｄ相比较，ＨｅＬａ细胞Ｃｄ缺失显著升高，而Ｃｄ迟滞复制没有显著性差异。结论ＨｅＬａ细胞染色体非整倍性畸变可能主要源于Ｃｄ缺失，而Ｃｄ迟滞复制则为非主要的。

关键词： HeLa细胞染色体畸变着丝粒点非整倍体内复制