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NTG和UV复合诱变米曲霉A·O-2原生质体选育米蛋白分解菌的研究

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中国酿造 1993年第6期12卷 13-17页

作者：曾莹王常高湖北工学院武汉430068

以米曲霉A·0—2原生质体为对象,采用NTG和UV作为诱变剂进行单因子和多因子复合诱变处理,在以米渣为主要原料的固体培养基上培养,选育出中性蛋白酶活力较高,生长快,易于培养的变异株N—4.原料配比为:米渣:麦麸:=2:1;培养时间为48小时;... 详细信息

以米曲霉A·0—2原生质体为对象,采用NTG和UV作为诱变剂进行单因子和多因子复合诱变处理,在以米渣为主要原料的固体培养基上培养,选育出中性蛋白酶活力较高,生长快,易于培养的变异株N—4.原料配比为:米渣:麦麸:=2:1;培养时间为48小时;培养温度为30℃的培养条件下,变异株N—4的中性蛋白酶活力最高、与出发菌株A·O—2相比,中性蛋白酶活力提高32.6%。

关键词： NTG 诱变米曲霉米蛋白分解菌

蚕蛹功能酱油酿制研究(Ⅰ)——生产菌株的诱变选育

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中国酿造 2001年第6期20卷 13-16页

作者：王常高干信湖北工学院生物工程系武汉430068

文中研究利用UV、DES及Co60 -γ对栖土曲霉进行多因子复合诱变处理 ,在以蚕蛹为主要原料的固体培养基上进行培养 ,选育出了一株生长繁殖速度快、孢子丰富且蛋白酶活高的变异菌株DC -7。其蛋白酶活达 86 2 8 9u/g (干曲 ) ,较出发菌株AS ... 详细信息

文中研究利用UV、DES及Co60 -γ对栖土曲霉进行多因子复合诱变处理 ,在以蚕蛹为主要原料的固体培养基上进行培养 ,选育出了一株生长繁殖速度快、孢子丰富且蛋白酶活高的变异菌株DC -7。其蛋白酶活达 86 2 8 9u/g (干曲 ) ,较出发菌株AS 3 374酶活 40 12 3u/g (干曲 )提高了 115 %。此外 ,其遗传稳定性也较好。

关键词：生产菌株诱变选育蚕蛹酱油酿制

磷脂酶C对ADP诱导的兔、人血小板肌动蛋白聚合的抑制作用

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中国药理学通报 2004年第7期20卷 754-757页

作者：王常高杨芳干信陈明锴陈涛中国科学院武汉病毒研究所湖北武汉430071 湖北工业大学湖北武汉430064 武汉大学人民医院湖北武汉430060

目的　测定磷脂酶C(PLC)对ADP诱导的兔、人血小板肌动蛋白聚合的的影响 ,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法　取家兔和健康成人的PRP分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理 ,以ADP诱导激活 ,采用Triton抽提液提取和SDS P... 详细信息

目的　测定磷脂酶C(PLC)对ADP诱导的兔、人血小板肌动蛋白聚合的的影响 ,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法　取家兔和健康成人的PRP分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理 ,以ADP诱导激活 ,采用Triton抽提液提取和SDS PAGE分离出肌动蛋白 ,再以分光光度法分别测定其肌动蛋白相对含量。结果　家兔血小板经生理盐水处理后的肌动蛋白相对含量为 1 6 82±0 319。而经生理盐水、ASA 6 6 8μmol·L-1、PLC 5、10、15、2 0和 2 5U·ml-1各组处理 ,并以ADP激活的血小板 ,测得的肌动蛋白相对含量分别为 2 4 5 0± 0 5 6 2 ,1 0 89± 0 32 2 ,1 72 7± 0 4 4 2 ,1 4 5 0± 0 32 4 ,1 16 1± 0 30 6 ,0 85 7± 0 2 4 2和0 6 92± 0 187。以生理盐水组作为对照 ,各处理组血小板肌动蛋白聚合的抑制率I(% )分别为 5 5 5 5 ,2 9 5 1,4 0 82 ,5 2 6 1,6 5 0 2 ,71 76。人血小板经生理盐水处理后的肌动蛋白相对含量为 1 35 8± 0 376。而经生理盐水、ASA 6 6 8μmol·L-1、PLC 5、10、15、2 0和 2 5U·ml-1各组处理并以ADP激活后的血小板 ,测得的肌动蛋白相对含量分别为2 4 4 5± 0 75 0 ,1 0 96± 0 344 ,1 70 5± 0 5 0 7,1 4 37±0 4 16 ,1 16 5± 0 35 5 ,0 84 5± 0 2 5 7?

关键词： PLC 血小板肌动蛋白抑制作用抗血小板聚集

磷酯酶C对人血小板细胞质游离钙离子浓度的影响

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中国药理学通报 2004年第1期20卷 37-40页

作者：杨芳王常高干信陈明锴王近芬陈涛中国科学院武汉病毒研究所武汉430071 湖北工业大学武汉430064 武汉大学人民医院武汉430060 湖北省地质职工医院武汉430072

目的　测定磷酯酶C(phospholipaseC ,简称PLC ,下同 )对静息状态和激活状态下人血小板胞质游离钙离子浓度的影响 ,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法　将健康成人的洗涤血小板用荧光指示剂Fura 2 /AM进行负载 ,分别用生理... 详细信息

目的　测定磷酯酶C(phospholipaseC ,简称PLC ,下同 )对静息状态和激活状态下人血小板胞质游离钙离子浓度的影响 ,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法　将健康成人的洗涤血小板用荧光指示剂Fura 2 /AM进行负载 ,分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理荧光负载后的血小板 ,采用双波长荧光分光光度法分别测定经过不同处理后的血小板在静息状态和以ADP为诱导剂时的激活状态下的胞质游离钙离子浓度 [Ca2 + ]i。结果　以健康成人血为样品时 ,经生理盐水、ASA 334μmol·L-1、2 5、3 75、5、10和 2 0UPLC·ml-1处理后的血小板 ,在静息状态下测得的胞质游离 [Ca2 + ]i 浓度 (nmol·L-1)分别为15 2 5 5± 15 0 7,131 6 3± 15 5 8,14 0 2 7± 12 0 3,139 4 8± 1 73,12 1 11± 9 5 8,116 6 2± 15 96和 10 7 2 0± 17 0 7,而以ADP为诱导剂激活血小板后测得的胞质游离 [Ca2 + ]i(nmol·L-1)分别为 90 2 6 2± 94 74 ,6 87 99± 6 2 86 ,810 99± 72 37,70 1 73± 2 1 37,4 2 9 6 7± 71 5 9,342 82± 4 4 86和 2 6 3 2 7± 2 5 4 6。以生理盐水作为对照 ,ASA 334μmol·L-1、2 5、3 75、5、10和 2 0UPLC·ml-1剂量组对激活状态下血小板胞质 [Ca2 + ]i 的抑制率I(% )分别为 2 5

关键词：磷酯酶C 人血小板胞质游离钙荧光测定

磷脂酶C对血小板粘附性及表面膜GpIb的影响

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2005年第7期33卷 5-8页

作者：王常高瞿永华陈涛湖北工业大学生物工程学院湖北武汉430068 武汉工业学院医学院湖北武汉430023 中国科学院武汉病毒研究所湖北武汉430071

采用旋转玻球法测定了磷脂酶C(PLC)经十二指肠给药后对家兔血小板粘附性的影响,同时利用竞争性酶联免疫法测定了PLC对人血小板表面膜糖蛋白Ib(GpIb)分子数的影响。结果表明,PLC冻干辅料及100和200U/kg的PLC对家兔血小板粘附率无明显影响... 详细信息

采用旋转玻球法测定了磷脂酶C(PLC)经十二指肠给药后对家兔血小板粘附性的影响,同时利用竞争性酶联免疫法测定了PLC对人血小板表面膜糖蛋白Ib(GpIb)分子数的影响。结果表明,PLC冻干辅料及100和200U/kg的PLC对家兔血小板粘附率无明显影响,而400～1000U/kgPLC对血小板粘附率具有明显的影响。PLC冻干辅料对人血小板表面膜GpIb分子数没有明显影响,而每mL血浆(PRP)中加入0.5,1.0和2.0U的PLC对人血小板表面GpIb分子数可产生明显影响。

关键词：磷脂酶C 血小板粘附率 GpIb

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PLC对人血小板GPIb的作用

中国药理学通报 2003年第6期19卷 626-628页

作者：陈明锴宋建华王常高孙松柏陈涛武汉大学人民医院武汉430060 中国科学院武汉病毒研究所武汉433071 湖北工业大学生物工程系武汉430064

目的应用竞争性酶联免疫定量检测磷酯酶C(PLC)对人血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)量的变化,探讨用药后抑制血小板粘附作用的机制。方法用竞争性酶联免疫药盒测定并绘制标准曲线图;取健康人血制备洗涤血小板,将其分为4组:①生理盐水组;②PLC 0... 详细信息

目的应用竞争性酶联免疫定量检测磷酯酶C(PLC)对人血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)量的变化,探讨用药后抑制血小板粘附作用的机制。方法用竞争性酶联免疫药盒测定并绘制标准曲线图;取健康人血制备洗涤血小板,将其分为4组:①生理盐水组;②PLC 0.5 U组;③PLC 1.0U组;④PLC 2.0 U组,分别替代药盒中标准IgG(IgG-ST)进行实验,酶标仪上测OD_(492)值,共实验6人次,依据OD_(492)值在标准曲线图和Eocel软件求出GPIb的量及用t值检测它们之间的相关性。结果用生理盐水、PLC0.5 U、1.0 U和 2.0 U组的OD_(492)值和GPIb数量(ng)分别为0.768±0.078、1.103±0.118、1.367±0.102、2.055±0.453和134.669±13.144、101.838±9.879、82.632±5.354、73.183±14.740。PLC 1.0 U和2.0 U组与生理盐水组比差异有显著性(P0.05)。结论 PLC减少GPIb的量,从而抑制血小板粘附性,这也可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一。

关键词：磷酯酶C 血小板膜糖蛋白Ⅰb 竞争性酶联免疫法

PLC对ADP诱导的兔血小板cAMP的影响

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中国药理学通报 2005年第1期21卷 45-48页

作者：王常高杨芳陈明锴干信何东平陈涛中国科学院武汉病毒研究所湖北工业大学生物工程学院湖北武汉430068 武汉工业学院食品科学与工程学院武汉大学人民医院湖北工业大学生物工程学院

目的　测定磷酯酶C(phospholipaseC,简称PLC,下同)对ADP诱导的兔血小板cAMP的影响,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法　取家兔的PRP,除去红细胞,分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理,以ADP诱导激活,采用三氯醋酸法制... 详细信息

目的　测定磷酯酶C(phospholipaseC,简称PLC,下同)对ADP诱导的兔血小板cAMP的影响,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法　取家兔的PRP,除去红细胞,分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理,以ADP诱导激活,采用三氯醋酸法制备血小板cAMP,再用放射免疫分析法分别测定cAMP含量。结果　家兔血小板经生理盐水处理后的cAMP含量为 ( 20 16±0 91 ) pmol/109platelets,而经生理盐水、ASA668μmol·L-1、5、10、15、20和25UPLC·ml-1各组处理,并以ADP激活的血小板,测得的cAMP含量分别为 13 85±1 14, 16 27±0 36, 18 74±0 55,19 80±0 52, 20 49±0 43, 22 55±0 61和 24 24±0 85(pmol/109 platelets)。以生理盐水作为对照,ASA668μmol·L-1、5、10、15、20和 25UPLC·ml-1剂量组对激活状态下血小板cAMP的含量有增加的作用,增加率 (% )分别为17 47, 35 31, 42 96, 47 94, 62 82, 75 02。结论　PLC使得ADP激活后的兔血小板cAMP水平提高(P<0 01),且呈剂量依赖性,表明PLC具有提高血小板中cAMP水平的作用。这可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一。

关键词： PLC 血小板 cAMP 抗血小板聚集

磷酯酶C抗血小板功能的研究Ⅰ——对血小板聚集率和粘附率的作用

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中国药理学通报 2003年第10期19卷 1107-1111页

作者：陈涛宋建华陈明锴王歆王常高孙松柏中国科学院武汉病毒研究所武汉430071 武汉大学人民医院武汉430060 湖北省药检高等专科学校医学检验系武汉430060 湖北工业大学生物工程系武汉430064

目的　通过研究PLC对家兔血小板粘附率和聚集率的作用 ,以探讨PLC对血小板功能的影响。方法　家兔麻醉后 ,经十二指肠给予阴性对照辅料 ,阳性对照ASA和 6种剂量的PLC ,于给药前及给药后 1、2、4h颈动脉取血测定以ADP、AA、Collagen为诱... 详细信息

目的　通过研究PLC对家兔血小板粘附率和聚集率的作用 ,以探讨PLC对血小板功能的影响。方法　家兔麻醉后 ,经十二指肠给予阴性对照辅料 ,阳性对照ASA和 6种剂量的PLC ,于给药前及给药后 1、2、4h颈动脉取血测定以ADP、AA、Collagen为诱导剂时的血小板聚集率 ,同时用玻球法测定血小板的粘附率。结果　PLC 10 0、 2 0 0IU·kg-1对家兔血小板粘附率无明显影响。PLC 4 0 0～ 10 0 0IU·kg-1可显著地降低血小板粘附率 ,并呈现一定的剂量效应依赖关系。同一剂量PLC组给药后 1、2、4h时相比P <0 0 5。PLC10 0～ 10 0 0IU·kg-16种剂量组在用ADP、AA、Collagen诱导时 ,均可显著地抑制血小板聚集 ;与阴性对照辅料组相比P <0 0 5 ,与阳性对照组相比 ,在ADP诱导时 ,10 0IU·kg-1组的抑制较弱 (P <0 0 5 ) ,而 80 0、10 0 0IU·kg-1组的抑制较强 (P <0 0 5 ) ,并呈一定的剂量效应和时间效应关系 ;而在AA诱导时 ,PLC各组在给药后 2、4h时的抑制率与ASA的相当 ,无明显剂量效应依赖关系 ,而有一定的时间效应关系 ;在Collagen诱导时 ,PLC各组的抑制作用均弱于ASA(P<0 0 5 ) ,无明显的剂量效应依赖关系 ,而有一定的时间效应关系。结论　①PLC经十二指肠给药 ,10 0、2 0 0IU·kg-1对家兔血小板粘附性无明显影响 ,而

关键词：磷酯酶C 血小板聚集率粘附率

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磷酯酶C对家兔血小板聚集和超微结构的影响

中国药理学通报 2003年第2期19卷 146-149页

作者：宋建华陈明锴王常高孙松柏陈涛中国科学院武汉病毒研究所武汉430071 武汉大学人民医院武汉430060 湖北工业大学武汉430064

目的　应用电镜研究磷酯酶C(phospholipaseC ,PLC)对家兔血小板聚集和超微结构的影响 ,以探讨用药后PLC抗血小板聚集作用的机制。方法　家兔颈动脉插管取血 ,制备PRP ,将其分为 4组 :①空白对照组 ;②生理盐水组 ;③ 0 5UPLC组 ;④ 2 ... 详细信息

目的　应用电镜研究磷酯酶C(phospholipaseC ,PLC)对家兔血小板聚集和超微结构的影响 ,以探讨用药后PLC抗血小板聚集作用的机制。方法　家兔颈动脉插管取血 ,制备PRP ,将其分为 4组 :①空白对照组 ;②生理盐水组 ;③ 0 5UPLC组 ;④ 2 5UPLC组。 2～ 4组分别用ADP诱导聚集 ,测出其聚集抑制率 ,各组分别制成超薄切片样品进行电镜观察、摄片。结果　 0 5、2 5UPLC明显抑制血小板聚集反应 ,聚集抑制率分别为 86 0 3 %± 12 6%和 82 47%±5 49% ;0 5UPLC抑制血小板形成伪足 ,α颗粒和致密颗粒较多 ,OCS管腔较小 ,其超微结构较生理盐水组变化小 ;2 5UPLC处理血小板的形态结构和超微结构与空白对照组无差异 ,血小板呈圆形或椭圆形 ,边缘光滑 ,无伪足样突起 ,α颗粒、致密颗粒、OCS等正常分布于胞质中。结论　PLC明显抑制ADP诱导的血小板聚集反应及其超微结构的改变。

关键词：磷酯酶C 血小板超微结构抗血小板聚集作用