检索结果-南通市图书馆

重组复制缺陷型腺病毒载体介导bFGF基因治疗大鼠缺血皮瓣的实验研究

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中华整形外科杂志 2007年第2期23卷 172-173页

作者：王伟曹洪扬汪春兰曹东升王帮河赵宇宁金龙徐州市第一医院整形美容科 221000 安徽省医科大学附属医院

近年来生长因子转基因在治疗皮瓣远端缺血领域表现出广阔的前景，我们的实验旨在探讨局部应用以重组复制缺陷型腺病毒为载体的碱性成纤维细胞生长因子（Ad-bFGF）因治疗，对大鼠缺血皮瓣生存的影响。

关键词：重组复制缺陷型腺病毒腺病毒载体介导缺血皮瓣基因治疗实验研究碱性成纤维细胞生长因子 bFGF 大鼠

腹壁下动脉穿支分布特点及扩张穿支皮瓣临床应用

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中华整形外科杂志 2009年第5期25卷 351-354页

作者：商子寅赵宇丁浩王帮河谢娟陈增红安徽医科大学第一附属医院整形外科合肥230022

目的探讨腹壁下动脉穿支的体表分布特点，及应用扩张后腹壁下动脉穿支皮瓣修复手部、前臂大面积瘢痕的临床效果。方法随机选取20例健康成人，应用多普勒血流探测仪探测双侧腹壁下动脉穿支，分析其在体表分布规律。临床应用扩张后腹壁下... 详细信息

目的探讨腹壁下动脉穿支的体表分布特点，及应用扩张后腹壁下动脉穿支皮瓣修复手部、前臂大面积瘢痕的临床效果。方法随机选取20例健康成人，应用多普勒血流探测仪探测双侧腹壁下动脉穿支，分析其在体表分布规律。临床应用扩张后腹壁下动脉穿支皮瓣治疗10例爪形手、前臂瘢痕挛缩畸形患者。结果20例成人，探测范围包括脐上至剑突的下1／3区域、脐下至耻骨联合的上2／3区域，探测出穿支点共425个，其中80％的点位于腹正中线旁1．1～5．8cm垂线之间。按照Rand分区法：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区穿支点所占百分比分别为26％、43％、30％，Ⅳ区穿支点罕见。近脐水平线穿支点较其他部位密集，左右两腹部穿支点排列不对称。临床应用10例，1例皮瓣远端出现血运障碍，经换药后愈合；余9例皮瓣全部成活良好。结论应用扩张后腹壁下动脉穿支皮瓣治疗手部大面积瘢痕，皮瓣切取面积大，较薄、不显臃肿，外观美观，是修复手部及前臂大面积瘢痕的一种较好的方法。

关键词：外科皮瓣软组织扩张术瘢痕

输卵管显微复通术中较大面积浆膜缺损的整形修复

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安徽医科大学学报 2008年第2期43卷 234-235页

作者：周志林汪春兰赵宇曹东升丁浩王帮河安徽医科大学第一附属医院整形外科合肥230022

目的探讨整形外科技术修复输卵管显微复通术中较大面积浆膜缺损的方法及临床效果。方法在绝育术后要求行输卵管显微复通术的患者中,对其中因采用Pom eroy改良法绝育术式而造成输卵管浆膜有较大面积缺损的56例患者,根据浆膜缺损面积的大... 详细信息

目的探讨整形外科技术修复输卵管显微复通术中较大面积浆膜缺损的方法及临床效果。方法在绝育术后要求行输卵管显微复通术的患者中,对其中因采用Pom eroy改良法绝育术式而造成输卵管浆膜有较大面积缺损的56例患者,根据浆膜缺损面积的大小分别采用Z成形、旋转浆膜瓣及腹膜游离移植3种不同的修复方法进行修复。结果经随访,56例患者行输卵管显微复通术后,复通率100%(56例),其中宫内受孕率85.7%(48例),异位妊娠率1.8%(1例),至今未受孕患者共7例,行输卵管造影检查显示管腔形态完整、通畅。结论根据整形外科修复原理,应用Z成形、旋转浆膜瓣及腹膜游离移植3种方法可修复输卵管浆膜较大面积的缺损,使输卵管解剖形态和生理功能得到最大限度的恢复,避免复通术后粘连,有效提高复孕率。

关键词：输卵管/外科学浆膜/损伤浆膜/外科学绝育逆转

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骨形态发生蛋白4转基因治疗大鼠的胫骨缺损

中国组织工程研究与临床康复 2007年第19期11卷 3778-3780页

作者：孙洋赵宇汪春兰丁浩王帮河程文丹安徽医科大学第一附属医院整形外科安徽省合肥市230022

目的:观察基因工程技术构建人骨形态发生蛋白4复制缺陷腺病毒的成骨效果。方法:实验于2006-03/08在安徽医科大学第一附属医院实验动物中心完成。实验分组:选取普通级雄性SD大鼠30只,体质量(200±10)g,全部动物胫骨上端部分分别造成8mm×... 详细信息

目的:观察基因工程技术构建人骨形态发生蛋白4复制缺陷腺病毒的成骨效果。方法:实验于2006-03/08在安徽医科大学第一附属医院实验动物中心完成。实验分组:选取普通级雄性SD大鼠30只,体质量(200±10)g,全部动物胫骨上端部分分别造成8mm×5mm长方形缺损。采用自身对照法,右侧骨缺损为实验组,左侧骨缺损为对照组。实验组植入人骨形态发生蛋白4复制缺陷腺病毒复合明胶海绵,对照组植入单纯明胶海绵。实验评估:术后分别于4,6,8周麻醉后处死10只动物,取材行X线、组织病理、免疫组织化学、透视电镜检查,观察成骨情况。结果:纳入30只大鼠,全部进入结果分析。①大鼠胫骨缺损X线、组织病理学检查结果:术后8周实验组和对照组骨缺损均得到修复,但实验组无论从成骨时间、成骨效果、新生骨量等方面都要优于对照组。其中各时间点实验组骨密度明显高于对照组,差异有显著性意义[4周:(95.91±16.33),(87.93±11.52);6周:(128.34±10.64),(102.41±9.81);8周:(138.36±10.49),(121.56±9.63);P<0.01]。各时间点实验组新生骨占骨缺损面积比明显高于对照组,差异有显著性意义[4周:(41.39±5.65)%,(26.58±5.62)%;6周:(80.35±7.25)%,(65.41±6.52)%;8周:(96.45±2.76)%,(82.22±7.30)%;P<0.01]②术后4周免疫组织化学染色结果:实验组软骨及骨痂内呈强阳性反应,而对照组骨痂内骨形态发生蛋白4表达微弱。结论:人骨形态发生蛋白4重组腺病毒具有良好的成骨活性,骨形态发生蛋白4直接转基因治疗能够加快骨缺损的修复。

关键词：骨形态发生蛋白质类基因疗法骨缺损

重组共表达质粒pIRES-hVEGF_(121)cDNA/hBMP-4在大鼠骨髓间充质干细胞中的共表达

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安徽医科大学学报 2007年第4期42卷 371-374页

作者：周志林汪春兰赵宇韩雷曹东升丁浩王帮河安徽医科大学第一附属医院整形外科合肥230022

目的观察重组共表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)后的共表达情况,为骨缺损的联合基因治疗奠定基础。方法使用全骨髓培养法分离、培养大鼠MSCs;重组共表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4经酶切鉴定后,... 详细信息

目的观察重组共表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)后的共表达情况,为骨缺损的联合基因治疗奠定基础。方法使用全骨髓培养法分离、培养大鼠MSCs;重组共表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4经酶切鉴定后,在脂质体介导下将其转入大鼠MSCs,提取总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和Western blot检测。结果重组共表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4成功转染至大鼠MSCs中,并获得有效表达。结论hVEGF121和hBMP-4在大鼠MSCs中获有效表达,为骨缺损的联合基因治疗奠定了基础。

关键词：骨形态发生蛋白质类/生物合成血管内皮生长因子类/生物合成间质干细胞/代谢基因表达

从Hep-2细胞克隆hFGF-2 cDNA及序列分析

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安徽医科大学学报 2005年第2期40卷 138-140页

作者：王帮河何金生汪春兰赵宇汪红俊曹东升安徽医科大学第一附属医院整形外科合肥230022 安徽医科大学免疫学教研室合肥230032

目的　从Hep 2细胞(人喉鳞癌细胞)克隆人的FGF 2cDNA,用于下一步构建携带hFGF 2cDNA的非复制型腺病毒载体。方法　设计和合成引物,提取Hep 2细胞的总mR NA,通过RT PCR扩增出目的cDNA,然后将其重组到pGEM TEasy载体中送测序分析。结果　... 详细信息

目的　从Hep 2细胞(人喉鳞癌细胞)克隆人的FGF 2cDNA,用于下一步构建携带hFGF 2cDNA的非复制型腺病毒载体。方法　设计和合成引物,提取Hep 2细胞的总mR NA,通过RT PCR扩增出目的cDNA,然后将其重组到pGEM TEasy载体中送测序分析。结果　经基因测序分析表明,从Hep 2细胞克隆的hFGF 2基因序列与已报告的序列,除在ATG后的第24位碱基发生无意突变外(由G→A),其他序列则完全一致。结论　从Hep 2细胞的总mRNA中成功克隆出hFGF 2的基因片段。

关键词：成纤维细胞生长因子2 克隆,分子序列分析,DNA DNA 互补

可表达骨形态发生蛋白-4的真核表达载体的构建与鉴定

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安徽医科大学学报 2006年第3期41卷 270-272页

作者：王兴宇汪春兰李栋梁赵宇王帮河何金生安徽医科大学第一附属医院整形外科合肥230022 安徽医科大学免疫学教研室合肥230032

目的构建含有骨形态发生蛋白(hBMP)-4的真核表达载体pcDNA3·1(+)/hBMP-4。方法将质粒pCS2(+)/hBMP-4用EcoRⅠ单酶双切获得目的基因片段,真核载体pcDNA3·1(+)用EcoRⅠ酶切线性化,对上述两种酶切产物分别回收纯化后进行连接,筛选出正确... 详细信息

目的构建含有骨形态发生蛋白(hBMP)-4的真核表达载体pcDNA3·1(+)/hBMP-4。方法将质粒pCS2(+)/hBMP-4用EcoRⅠ单酶双切获得目的基因片段,真核载体pcDNA3·1(+)用EcoRⅠ酶切线性化,对上述两种酶切产物分别回收纯化后进行连接,筛选出正确的转化子,并进一步转染COS-7细胞,提取总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和Western-blot检测。结果获得了含有目的基因片段的真核表达载体,酶切及基因测序提示构建正确,RT-PCR检测到目的基因的转录,Western-blot检测到hBMP-4蛋白表达。结论利用非定向克隆技术将目的基因转移至真核表达载体中,为进一步研究目的基因打下基础。

关键词：骨形态发生蛋白质类基因表达

腺病毒介导血管内皮生长因子基因促进大鼠随意皮瓣的早期断蒂

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中国临床康复 2006年第21期10卷 63-65页

作者：朱华锋汪春兰曹东升王帮河丁浩赵宇安徽医科大学第一附属医院整形外科安徽省合肥市230022

目的:探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣,对皮瓣早期断蒂的影响。方法:实验于2004-08/2005-09在安徽医科大学第一附属医院外科动物实验中心及中心实验室完成。健康SD雄性大鼠30只,随机分成3组:目的组、绿色荧光蛋... 详细信息

目的:探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣,对皮瓣早期断蒂的影响。方法:实验于2004-08/2005-09在安徽医科大学第一附属医院外科动物实验中心及中心实验室完成。健康SD雄性大鼠30只,随机分成3组:目的组、绿色荧光蛋白对照组、空白对照组,每组10只。所有实验大鼠背部设计2cm×6cm随意皮瓣,蒂位于髂脊水平。皮瓣形成后,术时即刻将磷酸盐缓冲液稀释的重组复制缺陷型腺病毒携带血管内皮细胞生长因子165基因溶液(目的组)、磷酸盐缓冲液稀释的重组复制缺陷型腺病毒携带绿色荧光蛋白溶液(荧光蛋白对照组)、磷酸盐缓冲液溶液(空白对照组)1mL注射到大鼠皮瓣内,给药后即刻以3-0丝线原位缝合,继续单笼饲养。所有实验大鼠皮瓣4d后断蒂,断蒂后7d观测皮瓣存活面积,取皮瓣远端存活区组织苏木精-伊红染色,光镜下观察组织学变化,免疫组织化学染色检测血管内皮细胞生长因子165表达情况,用CD34免疫组织化学染色计算血管密度。结果:①断蒂后7d,所有实验动物全部存活,皮瓣存活区与坏死区已经明确。②皮瓣存活率、皮瓣血管断面密度目的组和对照组之间差异有显著性犤皮瓣存活率:目的组为(98.8±1.5)%,荧光蛋白对照组为(78.3±2.5)%,空白对照组为(79.2%±2.4)%;皮瓣血管断面密度:目的组为(49.6±6.3)个/高倍视野,荧光蛋白对照组为(37.5±3.0)个/高倍视野,空白对照组为(39.5±3.0)个/高倍视野,P0.05)。③免疫组织化学染色各组均可见棕黄色颗粒沉积,目的组比对照组染色深。④组织学观察,目的组皮瓣真皮、肉芽及肌肉中可见大量毛细血管,而对照组较少。结论:应用重组复制缺陷型腺病毒携带血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣具有促进皮瓣早期断蒂的作用。

关键词：腺病毒科血管内皮生长因子基因疗法外科皮瓣

真核双表达载体pIRES-hVEGF_(121)cDNA/hBMP-4的构建与鉴定

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安徽医科大学学报 2007年第2期42卷 133-136页

作者：韩雷汪春兰赵宇何金生王帮河王兴宇杨兵周志林安徽医科大学第一附属医院整形外科合肥230022 安徽医科大学免疫学教研室合肥230032

目的构建人血管内皮生长因子(hVEGF121)和人骨形态发生蛋白-4(hBMP-4)的真核双表达质粒,转染COS-7细胞并表达。方法将hVEGF121 cDNA和hBMP-4通过非定向和定向克隆至真核双表达质粒pIRES中,重组质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4,经酶切鉴定... 详细信息

目的构建人血管内皮生长因子(hVEGF121)和人骨形态发生蛋白-4(hBMP-4)的真核双表达质粒,转染COS-7细胞并表达。方法将hVEGF121 cDNA和hBMP-4通过非定向和定向克隆至真核双表达质粒pIRES中,重组质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4,经酶切鉴定后,转染COS-7细胞,提取总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和Western blot检测。结果真核双表达载体pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4构建成功且hVEGF121cDNA和hBMP-4在COS-7细胞中得到了有效表达。结论hVEGF121和hBMP-4在COS-7细胞中成功表达,为进一步研究打下良好基础。

关键词：血管内皮生长因子类/遗传学骨形态发生蛋白质类/遗传学遗传载体基因表达