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基于TLR4/MyD88/TRIF通路探讨芪参合剂对耐药肺炎克雷伯菌脓毒症大鼠的固有免疫调节机制

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中国免疫学杂志 2021年第2期37卷 161-166页

作者：王宜艳陈伟上海中医药大学附属龙华医院上海200032

目的:基于TLR4/MyD88/TRIF通路探讨芪参合剂对耐药肺炎克雷伯菌脓毒症大鼠的固有免疫调节机制。方法:将40只SD大鼠随机分成空白组、模型组、芪参合剂组及TAK242组,气管注射耐药肺炎克雷伯菌复制脓毒症大鼠模型,造模后6 h,空白组和模型... 详细信息

目的:基于TLR4/MyD88/TRIF通路探讨芪参合剂对耐药肺炎克雷伯菌脓毒症大鼠的固有免疫调节机制。方法:将40只SD大鼠随机分成空白组、模型组、芪参合剂组及TAK242组,气管注射耐药肺炎克雷伯菌复制脓毒症大鼠模型,造模后6 h,空白组和模型组灌胃给予生理盐水,芪参合剂组灌胃给予芪参合剂,TAK242组腹腔注射给予TAK242,1次/d,干预3 d后收集标本,检测BALF炎症因子水平及血清生化指标。RT-PCR、Western blot及免疫组化方法观察芪参合剂对肺组织中TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达的影响,ELISA法观察芪参合剂对肺组织中TNF-α、IL-6、MIP-2、CXCL1水平的影响。结果:与空白组相比,模型组大鼠BALF中TNF-α、IL-6水平及血清生化指标明显升高(P<0.05),肺组织中TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB p65 mRNA及蛋白水平明显升高(P<0.05),肺组织中炎症因子(TNF-α、IL-6、MIP-2、CXCL1)水平明显升高(P<0.05)。芪参合剂和TAK242均可显著下调TLR4信号通路中TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB p65 mRNA和蛋白水平(P<0.05),同时显著下调炎症因子(TNF-α、IL-6、MIP-2、CXCL1)水平(P<0.05)。结论:芪参合剂和TAK242作用效果相似,均可显著下调TLR4信号通路中TLR4、MyD88、TRIF、NF-κB p65的蛋白水平和mRNA水平,减轻炎症因子释放,从分子生物学水平阐明了芪参合剂的固有免疫调节机制可能与抑制TLR4信号通路的过度活化有关。

关键词：脓毒症肺炎克雷伯菌芪参合剂固有免疫 TLR4通路 TAK242

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短蛸体表及粘液性免疫机制的研究

短蛸体表及粘液性免疫机制的研究

作者：王宜艳山东师范大学

学位级别：硕士

自2004年3月至2007年2月,以我国南北沿海广泛分布的短蛸(Octopus ocellatus)为研究对象,采用组织学、组织化学和生物化学技术,对短蛸外套膜、足、鳃和消化系统等与外界海水密切接触的组织器官的免疫屏障机制进行了初步研究。以阿新兰... 详细信息

自2004年3月至2007年2月,以我国南北沿海广泛分布的短蛸(Octopus ocellatus)为研究对象,采用组织学、组织化学和生物化学技术,对短蛸外套膜、足、鳃和消化系统等与外界海水密切接触的组织器官的免疫屏障机制进行了初步研究。以阿新兰和过碘酸雪夫氏反应(AB-PAS)染色法显示了短蛸外套膜、足、鳃和消化系统各器官中的粘液细胞,并对粘液细胞的类型和分布规律进行研究。根据AB-PAS显色结果的不同,将其粘液细胞分为I-IV 4种类型,分别为PAS反应阳性、AB反应阴性、呈红色、主要含中性粘多糖的I型粘液细胞;AB反应阳性、PAS反应阴性、呈蓝色、主要含酸性粘多糖的Ⅱ型粘液细胞;AB和PAS反应均为阳性、分别呈紫红色和蓝紫色的Ⅲ型和Ⅳ型粘液细胞。短蛸外套膜外上皮、腕外上皮和漏斗内外上皮均含有丰富的粘液细胞,外套膜4种粘液细胞均有,以Ⅲ和Ⅳ型为主,背面粘液细胞的密度小于腹面的。腕上皮皱褶处粘液细胞密度较大,其它大部分区域密度较小,以Ⅱ型细胞为主,另有少量Ⅲ和Ⅳ型细胞;吸盘外上皮有大量粘液细胞,也以Ⅱ型为主;漏斗内外上皮粘液细胞密度较大,基部以Ⅱ型为主,其它部位以Ⅲ型为主。鳃丝上皮无粘液细胞,鳃轴上皮含少量Ⅰ型粘液细胞,但整个鳃丝和鳃轴上皮均含AB或PAS反应阳性物质。短蛸食道、嗉囊和胃无粘液细胞分布,但其中的护膜、粘膜层、粘膜下层及肌肉层中均含大量呈红色的中性粘多糖阳性物质,肝胰脏腺管上皮也无粘液细胞,但上皮中及腺管腔中也有大量中性粘多糖阳性物质。口膜、口球、胃盲囊、肠、直肠、肛门侧瓣、前唾液腺和后唾液腺均有粘液细胞分布,口膜外上皮内粘液细胞较多,多为Ⅱ型,胃盲囊侧褶基部粘液细胞较多,以Ⅰ型细胞最多;侧褶中部小褶上的粘液细胞全为Ⅱ型;侧褶游离端粘液细胞则全为Ⅰ型;肠、直肠和肛门侧瓣粘膜上皮内均有大量粘液细胞,多为Ⅱ型;前、后唾液腺内均存在大量粘液细胞,其中前唾液腺中多为Ⅰ型和Ⅲ型,后唾液腺中Ⅳ型最多。粘液细胞的类型和分布与其所在部位执行的功能有密切的联系。采用组织化学方法显示了短蛸外套膜、足、消化系统和鳃等组织器官中2种水解酶——酸性磷酸酶(ACP)和非特异性酯酶(NSE)及2种氧化酶——过氧化物酶(POD)和酚氧化酶(PO)。2种水解酶组化显示结果有许多共性,外套膜外上皮、腕外上皮、漏斗内外上皮、鳃丝和鳃轴上皮、整个消化管粘膜上皮、唾液腺、肝脏腺小管和输出管上皮均为ACP和NSE阳性或强阳性反应;各器官结缔组织阳性要弱一些,但其中均有阳性或强阳性物质分散分布;各器官的肌肉组织也为阳性反应。POD在各器官的阳性要弱一些,阳性物质的分布规律与2种水解酶相似。PO的分布规律明显不同,各器官的上皮几乎均为阴性反应,阳性物质只在结缔组织中存在。食道、嗉囊和胃的护膜4种酶显示结果也不同,食道和嗉囊的护膜为NSE极强阳性反应,胃护膜呈NSE阳性;食道和嗉囊的护膜呈POD强阳性,而胃护膜为极弱阳性,但胃粘膜上皮细胞外有厚度约为7-15μm的POD强阳性物质带;食道、嗉囊和胃的护膜为ACP和PO阴性反应。采用生化方法检测了短蛸体表分泌的粘液及部分器官(外套膜外上皮、鳃、食道、嗉囊、胃、胃盲囊、肠)匀浆液中的ACP、NSE和POD活力水平,在粘液和上述器官中均检测到了3种酶的活性,ACP活力以鳃为最强,POD和NSE活力水平以外套膜为最高;酶活力最弱的器官在ACP为胃盲囊、在NSE为食道,在POD为鳃;粘液中3种酶的活力水平在8种样品中均处于中等水平。本实验结果表明,短蛸体表粘液和皮肤可通过ACP和NSE的水解作用、POD-H2O2-卤化物杀菌体系的作用及粘多糖的作用等多种途径水解和杀灭入侵的病原微生物而起到很好的免疫屏障功能;与外界海水和病原微生物接触密切的鳃和消化系统各器官的上皮等组织也均有很好的免疫防御功能;在体表免疫防御功能中,PO应不起直接作用。

关键词：短蛸粘液外套膜鳃消化器官免疫头足类

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芝罘湾长竹蛏肥满度的研究

海洋湖沼通报 1995年第3期 63-68页

作者：孙虎山王宜艳烟台师范学院烟台教育学院

本文以1990－1993年烟台芝罘湾自然生长的长竹蛏为材料，对其船满度进行了研究。研究结果表明：长竹蛏一年有一个肥满期，一个消瘦期。5月至11月较肥，肥满指数（1）为57．3－93．7，12月至翌年4月较瘦，肥满指数（1）为47．2－56．6。... 详细信息

本文以1990－1993年烟台芝罘湾自然生长的长竹蛏为材料，对其船满度进行了研究。研究结果表明：长竹蛏一年有一个肥满期，一个消瘦期。5月至11月较肥，肥满指数（1）为57．3－93．7，12月至翌年4月较瘦，肥满指数（1）为47．2－56．6。二龄蛏肥满度最高。由肥满指数推断，长竹蛏一年有一个繁殖期，为6月中旬至8月中旬。

关键词：长竹蛏肥满度芝罘湾

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栉孔扇贝神经节结构的显微观察

中国水产科学 2007年第3期14卷 390-396页

作者：孙虎山王宜艳鲁东大学生命科学学院鲁东大学生命科学学院山东烟台264025

采用甲苯胺蓝、嗜银和铅苏木素3种组织学染色方法分别对栉孔扇贝(Chlamys farreri)神经节进行显微观察。结果表明,甲苯胺蓝染色法效果最好,神经细胞和神经纤维均着色较深,与背景反差较大。神经干及神经索中无神经元胞体,仅有沿神经索方... 详细信息

采用甲苯胺蓝、嗜银和铅苏木素3种组织学染色方法分别对栉孔扇贝(Chlamys farreri)神经节进行显微观察。结果表明,甲苯胺蓝染色法效果最好,神经细胞和神经纤维均着色较深,与背景反差较大。神经干及神经索中无神经元胞体,仅有沿神经索方向分布的神经纤维。神经节包括:1对彼此分离的脑侧神经节、1对连接在一起的足神经节和左右2神经节完全愈合而成的脏神经节。各神经节均由表面的神经节被膜、周边的胞体层和中央纤维网构成,胞体层分层现象不明显,神经元胞体根据其大小大致可分为直径15-36μm的大型细胞和5-15μm的小型细胞,胞体发出的突起均进入中央神经纤维网。脑侧神经节胞体层明显分脑神经节(CG)和侧神经节(PG)2区,CG区中神经元胞体主要分布于前端和外侧面,而PG区中神经元胞体则主要分布于外侧面;大型细胞较多,小型细胞很少。足神经节表层神经元胞体无分区分布的现象;大型细胞较少,而小型细胞较多。脏神经节相对较复杂,神经元胞体数目多,胞体层分区明显,分为:2个前叶,1个后叶,2个侧叶和2个嗅检叶;前叶和后叶中大型细胞较多,小型细胞较少;侧叶和嗅检叶中仅有小型细胞,而无大型细胞。

关键词：栉孔扇贝神经节中枢神经系统显微结构组织学

中国蛤蜊神经系统的初步观察──介绍一种贝类神经解剖的好材料

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生物学通报 1997年第4期32卷 41-42页

作者：王宜艳孙虎山山东省烟台教育学院 264001 山东省烟台师范学院 264025

软体动物门一般以河蚌为代表动物，而河蚌等大多数贝类的神经节多为无色或浅白色，与其周围的组织差别不甚明显，因此，神经系统的解剖观察成为软体动物解剖实验中的一个难点。我们在实验中发现，中国蛤蜊（MactraChinensisPhilippi）... 详细信息

软体动物门一般以河蚌为代表动物，而河蚌等大多数贝类的神经节多为无色或浅白色，与其周围的组织差别不甚明显，因此，神经系统的解剖观察成为软体动物解剖实验中的一个难点。我们在实验中发现，中国蛤蜊（MactraChinensisPhilippi）的神经节较大，呈鲜艳的橙黄色，明显区别于周围的组织，易解剖、易观察，且其他结构也较典型，在河蚌中可观察到的结构亦可在中国蛤蜊中清楚地观察到。在动物学实验中多次采用，效果很好。因此，中国蛤蜊是一种贝类解剖尤其是神经系统解剖的好材料。中国蛤蜊广泛分布于我国北部沿海，埋栖于潮间带中下区的沙中，生长快、栖息密度高，肉味鲜美，是一种重要的采捕对象。个体较大，大者壳长60mm，壳高43mm。离水后存活时间长，且两贝壳常常张开很大，因此，活体解剖时很易将解剖器从两壳腹面中间合缝处平行插入，将壳撑开，然后将解剖刀伸入外套膜与贝壳间，切断前、后闭壳肌，揭开左贝壳，其内部结构便可暴露。若不用活体解剖，可将活体蛤软投入沸水中一烫，立即捞起，然后放入5％～10％的福尔马林液中固定后去掉左壳后，便可清楚地看到前后闭壳肌、伸足肌、收足肌、水管附着肌、外套膜和足等构造。小心地去掉左侧外套膜，暴露外套腔和其...

关键词：软体动物蛤蜊神经系统贝类解剖

基于中医传承辅助系统的治疗中风病古方用药规律分析

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中国实验方剂学杂志 2015年第21期21卷 197-201页

作者：王宜艳滕晶山东中医药大学济南250014

目的:基于中医传承辅助系统(V2.0)软件,探讨《中华医典》中收载的所有治疗中风的古方用药规律,包括药性规律、常用药物、药对及新方组合等,以期为中风病的治疗提供思路和方法。方法:收集并筛选《中华医典》光盘中历代治疗中风的内服方剂... 详细信息

目的:基于中医传承辅助系统(V2.0)软件,探讨《中华医典》中收载的所有治疗中风的古方用药规律,包括药性规律、常用药物、药对及新方组合等,以期为中风病的治疗提供思路和方法。方法:收集并筛选《中华医典》光盘中历代治疗中风的内服方剂,录入中医传承辅助系统软件,运用软件的数据挖掘方法,寻找高频药物、药类、药对等,探讨治疗中风病药物配伍规律,以方测证,从中总结古方治疗中风之病因病机。结果:根据方剂纳入与排除标准,共筛选出符合方剂617首,涉及中药320味,数据统计结果显示,在治疗中风的常用药物中,以风药为主,其中排名前10的高频药物为防风、川芎、甘草、肉桂、当归、天麻、附子、麻黄、天南星、羌活;药对以川芎与防风最为常见;关联规则显示"它药->防风"的关联规律,并得出13首治疗中风的新方。结论:根据分析得出古代医家在治疗中风时,重视对风药的配伍使用,并以辨证论治为指导,辅以开窍、活血、化痰之法,可以为临床治疗中风提供参考。

关键词：中风病方剂用药规律中医传承辅助系统

过氧化氢诱导紫彩血蛤排放精卵及其胚胎发育的研究

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水产科学 1992年第9期11卷 10-13页

作者：孙虎山王宜艳烟台师范学院生物系 264000 烟台教育学院生物系

采用浓度为0.1～10‰的H_2O_2海水处理紫彩血蛤,能诱导其排放精卵,排放率为60%～80%,其中H_2O_2浓度在0.5%～1‰之间时效果较好,排放率高达80%,并且诱导排放时间较短。文章还叙述了紫彩血蛤胚胎发育过程中性腺、精子、卵子以及胚胎发育... 详细信息

采用浓度为0.1～10‰的H_2O_2海水处理紫彩血蛤,能诱导其排放精卵,排放率为60%～80%,其中H_2O_2浓度在0.5%～1‰之间时效果较好,排放率高达80%,并且诱导排放时间较短。文章还叙述了紫彩血蛤胚胎发育过程中性腺、精子、卵子以及胚胎发育各期的形态。

关键词：紫彩血蛤催产胚胎发育过氧化氢

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栉孔扇贝鳃和唇瓣过氧化物酶活性

中国水产科学 2004年第6期11卷 513-518页

作者：王宜艳孙虎山孙修勤李光友国家海洋局第一海洋研究所国家海洋局第一海洋研究所山东烟台 264025 山东青岛 266061 烟台师范学院生命科学学院

采用组织化学、电镜细胞化学和分光光度技术对栉孔扇贝(Chlamys farreri)鳃和唇瓣内的过氧化物酶(EC1.***.1.7;POD)进行研究,以探讨扇贝的鳃和唇瓣在免疫防御中的作用。组织化学显示,鳃轴、鳃丝和唇瓣上皮细胞均呈POD强阳性,结缔组织呈... 详细信息

采用组织化学、电镜细胞化学和分光光度技术对栉孔扇贝(Chlamys farreri)鳃和唇瓣内的过氧化物酶(EC1.***.1.7;POD)进行研究,以探讨扇贝的鳃和唇瓣在免疫防御中的作用。组织化学显示,鳃轴、鳃丝和唇瓣上皮细胞均呈POD强阳性,结缔组织呈弱阳性;病毒感染后酶活力逐步增强。电镜细胞化学定位表明,鳃和唇瓣上皮细胞内有数量和大小不等的POD强阳性颗粒,阳性颗粒多为圆形,直径为150-220 nm;次级溶酶体也呈POD强阳性;内质网和空泡膜等细胞内膜系统以及细胞表面的微绒毛和纤毛呈POD弱阳性。结缔组织中部分血细胞呈POD强阳性。鳃轴上皮细胞内POD高电子密度阳性颗粒较少,而低电子密度阳性颗粒较多;主鳃丝上皮细胞内POD阳性颗粒较少,普通鳃丝上皮细胞内POD高电子致密阳性颗粒和呈POD强阳性的次级溶酶体均较多;唇瓣上皮细胞内POD阳性颗粒较鳃的略少。生化测定显示,鳃轴的POD酶活力最高,鳃丝次之,唇瓣最低;病毒感染24 h后,各部分的酶活力均显著增强。栉孔扇贝鳃和唇瓣内大量的POD可在抵抗病原微生物感染方面发挥重要的作用。

关键词：栉孔扇贝鳃唇瓣过氧化物酶

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扁玉螺血细胞体外凝结影响因子的研究

安徽农业科学 2007年第17期35卷 5169-5170页

作者：姜莹英孔令瑶王宜艳鲁东大学生命科学学院山东烟台264025

以扁玉螺(Neverita didyma)血淋巴为试验材料,比较研究不同保存温度、时间及血细胞浓度与其血细胞凝结的关系。结果表明:血淋巴中血细胞的凝结程度随样品放置时间延长而呈现先升高后降低的变化规律,20℃条件下以放置20 min组的细胞凝结... 详细信息

以扁玉螺(Neverita didyma)血淋巴为试验材料,比较研究不同保存温度、时间及血细胞浓度与其血细胞凝结的关系。结果表明:血淋巴中血细胞的凝结程度随样品放置时间延长而呈现先升高后降低的变化规律,20℃条件下以放置20 min组的细胞凝结度最高。血细胞的凝结程度随血细胞浓度的升高而明显上升,细胞浓度为0.5×106个/ml的血淋巴样品20℃放置20 min后,91%的血细胞单独存在;而细胞浓度为7.6×106个/ml时,单个存在的血细胞仅有35%。血细胞的凝结程度随温度的降低而下降。

关键词：扁玉螺血细胞细胞凝结