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不同来源的人血清白蛋白对1-磷酸鞘氨醇的结合运载作用研究

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中国输血杂志 2024年第5期37卷 524-533页

作者：刘卿赵娅菲徐俊程露黄雨薇杜晞李长清王宗奎马莉中国医学科学院输血研究所四川成都610052 上海莱士血液制品股份有限公司上海201404

目的研究不同来源的人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)对1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)的结合运载作用。方法以人血浆来源HSA(plasma derived HSA,pHSA)和基因重组HSA(recombinant HSA,rHSA)样本为研究对象,首先利用LC-MS/MS技术,比较分析上述样本中S1P含量的差异;其次,在生理浓度条件下,向HSA样本中直接添加S1P进行负载处理,比较不同来源的HSA对S1P结合作用;在无血清培养条件下,将不同来源HSA样本与HUVEC细胞进行共培养,分析不同处理组的细胞培养上清中S1P含量的变化,比较不同来源的HSA对细胞中S1P的运载作用。利用表面等离子体共振SPR技术分析不同来源HSA与S1P分子的相互作用情况并计算其亲和力大小。利用AutoDock Vina软件和Molprophet平台,对HSA和S1P进行分子对接分析,并预测HSA中S1P的关键结合口袋域。结果S1P含量检测结果显示,所有pHSA样本中均含有一定水平的S1P(3.31±0.03~30.35±0.07)μg/L,且不同厂家生产的pHSA样本中的S1P含量差异显著(P<0.001);然而所有rHSA样本中均未检测出S1P。负载处理结果显示,不同来源HSA对S1P的结合作用存在显著差异(P<0.001),且rHSA对S1P平均负载量约为pHSA的2倍(ΔC_(rHSA)=801.75±142.45μg/L vsΔC_(pHSA)=461.94±85.73μg/L;P<0.001,t=5.006)。共培养处理结果显示,所有HSA样本处理组与HUVEC细胞共培养处理6h后上清中的S1P浓度均明显升高,而空白对照组上清中S1P浓度无变化;处理6 h、12 h和24 h后各处理组间上清中S1P浓度均存在显著差异(P<0.001)。SPR分析结果显示,与rHSA相比,pHSA与S1P之间的亲和力更高(KD_(pHSA-S1P):2.38E-06,KD_(rHSA-S1P):3.72E-06)。分子对接分析和结合口袋预测发现,HSA与S1P的关键结合口袋可能位于HSA分子的IB亚结构域。结论不同来源的HSA对S1P均具有一定的结合运载作用,但这种作用差异具有统计学意义,与HSA分子的IB亚结构域存在关联。

关键词：人血清白蛋白人血浆来源基因重组 1-磷酸鞘氨醇结合运载

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糖尿病致栓性因素的研究进展

医学研究杂志 2023年

作者：龙茜王宗奎李长清张容中国医学科学院北京协和医学院输血研究所

糖尿病（diabetes mellitus，DM）患者的代谢紊乱打破了凝血、抗凝和纤溶系统的平衡，导致以凝血抗凝功能异常和纤溶功能低下为特征的血栓形成前状态。多数DM患者处于血栓前状态，由此引发的心血管并发症是其主要死亡原因。凝血、抗凝... 详细信息

糖尿病（diabetes mellitus，DM）患者的代谢紊乱打破了凝血、抗凝和纤溶系统的平衡，导致以凝血抗凝功能异常和纤溶功能低下为特征的血栓形成前状态。多数DM患者处于血栓前状态，由此引发的心血管并发症是其主要死亡原因。凝血、抗凝和纤溶系统失衡在糖尿病患者血栓形成过程中发挥着重要作用，基于此，本文就糖尿病疾病进展过程中凝血、抗凝和纤溶系统变化进行综述，以期为糖尿病致栓性研究提供参考，同时也为其血栓防治提供新思考。

关键词：糖尿病致栓性研究进展综述

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动力换挡变速箱的运动分析

机械 1989年第6期16卷 19-22页

作者：王宗奎四川齿轮厂设计科

本文对日本小松公司的D85A-18推土机的动力换挡行星变速箱进行了简要的运动分析,推证了变速箱各行星排组成构件的运动参数的计算公式。为行星排各组成部件的强度计算和寿命校核提供了基本公式,为其他动力换挡变速箱的运动分析提供了方便。

关键词：变速箱运动分析动力换档推土机

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人血浆蛋白C浓缩物的研制

人血浆蛋白C浓缩物的研制

作者：王宗奎北京协和医学院

学位级别：硕士

目的探索建立一种串联离子交换层析和固定化金属螯合亲和层析从Cohn氏法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法4℃条件下,Cohn氏法组份Ⅳ用磷酸盐缓冲液按1：10（w/v）的比例搅拌抽提5h,离心（... 详细信息

目的探索建立一种串联离子交换层析和固定化金属螯合亲和层析从Cohn氏法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法4℃条件下,Cohn氏法组份Ⅳ用磷酸盐缓冲液按1：10（w/v）的比例搅拌抽提5h,离心（6500g,4℃） 40min,上清液依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤,按1：10（w/w）比例加入3.3%的TNBP和11%的Tween-80,缓慢搅拌.6h（24℃）。超滤透析后,再通过串联离子交换层析和固定化金属螯合亲和层析,对蛋白C进行纯化。通过SDS-PAGE鉴定蛋白C的纯度;通过Western Blot鉴定蛋白C的特异性;用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;通过WHO国际标准指定的发色底物法和凝固法（一期法）测定蛋白C活性。结果在有机溶剂/去污剂病毒灭活过程中,0.1mol/L的组氨酸和2.5%的人血清白蛋白能使蛋白C的活性保持在85%以上。纯化的蛋白C在SDS-PAGE图谱上呈现一条62kD左右的蛋白带,Western Blot检测显阳性。经过离子交换层析,蛋白C的活性回收率为（48.19±9.22）%,纯化倍数为（3.75±0.56）倍;固定化金属螯合亲和层析后,蛋白C活性回收率为（59.61±5.59）%,纯化倍数为（36.79±3.72）倍;经过两步层析后,蛋白C总活性回收率为（28.77±9.45）%,纯化倍数为（136.64±6.82）倍,比活性为（11.70±0.89）IU/mg. 结论组氨酸和人血清白蛋白可以作为有机溶剂／去污剂灭活脂包膜病毒过程中蛋白C的一种很有效的保护剂。串联离子交换层析和固定化金属螯合亲和层析可以从Cohn氏法组份Ⅳ中获得比活性较高的蛋白C浓缩物,能显著降低成本,实现血浆的综合利用。

关键词： Cohn氏法组份Ⅳ 蛋白C 固定化金属螯合亲和层析廉价

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粉土地基上群井井点降水试验研究

粉土地基上群井井点降水试验研究

作者：王宗奎北京交通大学

学位级别：硕士

随着大量高层建筑和市政工程的不断建设,对于地下空间的利用越来越广泛,同时大量的基坑工程也随之产生,基坑降水问题就成为工程中的一大难题。对于渗透性较差的弱透水层中的饱和水和含水层界面残留水,采用常规的降水方法很难疏干,这就... 详细信息

随着大量高层建筑和市政工程的不断建设,对于地下空间的利用越来越广泛,同时大量的基坑工程也随之产生,基坑降水问题就成为工程中的一大难题。对于渗透性较差的弱透水层中的饱和水和含水层界面残留水,采用常规的降水方法很难疏干,这就会对基坑工程的施工安全和施工进度造成很大的影响。本文针对渗透性较差的地层,提出了真空井点降水方法,将真空技术与管井降水技术有机的结合在一起,能够较为有效和经济的解决弱透水层的排水问题。本文在真空负压原理的基础上分析了真空降水的渗流场特征和降水机理。通过对粉土地基上的群井现场试验方法,进一步探讨了在真空降水过程中地下水的渗流特征,比如地下水位随时间的变化、地下水位在水平和垂直方向的变化过程以及水位恢复情况等。并且通过对几种降水方案的比较,对井点深度、间距和布置方式等影响群井降水效果的因素进行了分析,为更好的选择群井参数提供了参考。本文通过对现场抽水前后的土样进行了土性测试试验,研究了真空降水方法对粉土土性物理性质的影响。在试验分析的基础上,本文还探讨了群井干扰降水的计算方法并且给出了相应的计算公式。为了选择更优化的降水方案,本文介绍了“大井”法和有限单元法两种井群的优化方法。

关键词：粉土地基群井地下水位真空降水

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数学医院

数学医院

静注人免疫球蛋白对奥沙利铂诱导小鼠脾脏/肠道损伤的救治作用

1983年

作者：臧龙光李毓佩王宗奎

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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中国输血杂志 2023年第4期36卷 279-284页

作者：覃余燕袁欣张巍王宗奎李长清中国医学科学北京协和医学院输血研究所四川成都610052 四川省血液安全与血液替代国际科技合作基地

目的探讨静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobuin,IVIG)对奥沙利铂诱导的化疗损伤小鼠的救治效果。方法将6~8周龄的野生型雄性BALB/c小鼠51只,随机均分为:1)空白对照组;2)化疗组(腹腔注射奥沙利铂);3)干预组(注射奥沙利铂后给予IV... 详细信息

目的探讨静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobuin,IVIG)对奥沙利铂诱导的化疗损伤小鼠的救治效果。方法将6~8周龄的野生型雄性BALB/c小鼠51只,随机均分为:1)空白对照组;2)化疗组(腹腔注射奥沙利铂);3)干预组(注射奥沙利铂后给予IVIG)。通过外周血细胞计数、解剖学、HE(苏木精-伊红)染色、PAS(过碘酸雪夫)染色及Luminex等方法研究各组小鼠的外周血细胞组成、脾指数、脾脏和肠道的病理学特征、结肠炎症因子水平等,分析IVIG对奥沙利铂诱导的化疗损伤的救治效果。结果与空白对照组相比,化疗组小鼠外周血中的白细胞数量(109/L)(2.45±0.51 vs 0.75±0.27,P<0.0001)和血小板数量(109/L)(1249.00±100.04 vs 347.55±110.33,P<0.0001)显著减少,淋巴细胞比例(75.37%±7.30%vs 62.57%±12.09%,P<0.001)明显下降,脾指数显著降低(P<0.0001),结肠中的杯状细胞减少(P<0.05)、促炎因子TNF-α和IFN-γ(P<0.01)升高、抗炎因子IL-10和IL-13(P<0.05)降低。与化疗组相比,IVIG干预则明显增加了小鼠外周血中的白细胞数量(109/L)(0.75±0.27 vs 1.11±0.30,P<0.05)和血小板数量(109/L)(347.55±110.33 vs 698.49±182.86,P<0.0001),提高了淋巴细胞比例(62.57%±12.09%vs 71.40%±9.08%,P<0.05),脾指数也明显升高(P<0.0001),增加了小鼠结肠中杯状细胞的数量(P<0.01),降低促炎因子TNF-α的水平(P<0.05)、升高抗炎因子IL-10和IL-13(P<0.05)的水平。结论在奥沙利铂诱导的化疗损伤小鼠中,IVIG能够减轻小鼠的造血系统、脾脏和肠道损伤,提示IVIG可用于改善奥沙利铂在肿瘤患者化疗中引起的机体损伤。

关键词：静注人免疫球蛋白奥沙利铂化疗损伤炎症

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蛋白C、蛋白S的研究与应用

中国输血杂志 2010年第4期23卷 322-326页

作者：王宗奎林方昭肖小璞李长清中国医学科学院输血研究所四川成都610081

蛋白C(protein C, PC)抗凝系统是机体内重要的抗凝系统,主要由PC,蛋白S(protein S, PS),蛋白C抑制物(proteinC inhibitor, PCI)和血栓调节蛋白(thrombomodulin, TM)组成[1],在血液凝固和纤溶过程起着重要的平衡作用.PC是PC系统最主要的... 详细信息

蛋白C(protein C, PC)抗凝系统是机体内重要的抗凝系统,主要由PC,蛋白S(protein S, PS),蛋白C抑制物(proteinC inhibitor, PCI)和血栓调节蛋白(thrombomodulin, TM)组成[1],在血液凝固和纤溶过程起着重要的平衡作用.PC是PC系统最主要的组成成分,是体内重要的抗凝因子,其抗凝活性占全血的20%—30%,体外只要达到0.2μg/ml即可引起明显的抗凝效应,直接影响凝血与抗凝血机制的平衡[1, 2],而PC的生理功能又与PS密切相关,故我们综合有关资料对PC抗凝系统中的PC,PS做一介绍

关键词：蛋白C 蛋白S 抗凝系统活化的蛋白C

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从Cohn法组份Ⅳ中分离纯化人血浆蛋白C

中国输血杂志 2010年第5期23卷 355-360页

作者：王宗奎林方昭肖小璞谢亦武李长清中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610081 China Biologic Products Inc.

目的探索建立1种串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法 ,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法 4℃条件下,将Cohn法组份Ⅳ用PBS缓冲液抽提5h,离心(6500g)40min,上清液依次用0.45μm和... 详细信息

目的探索建立1种串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法 ,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法 4℃条件下,将Cohn法组份Ⅳ用PBS缓冲液抽提5h,离心(6500g)40min,上清液依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤后,超滤透析;再通过串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析,对蛋白C进行纯化。通过SDS-PAGE鉴定蛋白C的纯度;用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;通过WHO指定的发色底物法和凝固法(一期法)测定蛋白C活性。结果纯化的蛋白C在SDS-PAGE图谱上呈现1条62kD左右的蛋白带;经过离子交换层析,蛋白C的活性回收率为(48.19±9.22)%,纯化倍数为(3.75±0.56)倍;固相化金属螯合亲和层析后,蛋白C活性回收率为(59.61±5.59)%,纯化倍数为(36.79±3.72)倍;蛋白C总活性回收率为(28.77±9.45)%,纯化倍数为(136.64±6.82)倍,比活性为(11.70±0.89)IU/mg。结论串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析可以从Cohn法组份Ⅳ中获得比活性较高的蛋白C浓缩物。

关键词： Cohn法组份Ⅳ 蛋白C 分离纯化亲和层析,固相化金属螯合比活性