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利用分子标记辅助选择改良恢复系稻瘟病抗性的研究

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利用分子标记辅助选择改良恢复系稻瘟病抗性的研究

作者：裘烨湖南农业大学

学位级别：硕士

抗稻瘟病基因的利用是增强水稻抗稻瘟病性的有效途径,对保障粮食安全发挥了重要作用。亲本抗稻瘟病性的提高有利于强势优势组合的应用和推广。本试验利用抗稻瘟病基因Pi-d1和Pi-kh改良五个稻瘟病抗性较差的恢复系。通过杂交导入抗病基因... 详细信息

抗稻瘟病基因的利用是增强水稻抗稻瘟病性的有效途径,对保障粮食安全发挥了重要作用。亲本抗稻瘟病性的提高有利于强势优势组合的应用和推广。本试验利用抗稻瘟病基因Pi-d1和Pi-kh改良五个稻瘟病抗性较差的恢复系。通过杂交导入抗病基因,加代选择和自交稳定基因性状,同时在育种过程中利用与抗病基因紧密连锁的分子标记对有抗病基因的植株进行选择,最终获得纯合抗病的改良株系,并对改良恢复系进行田间鉴定,农艺性状和配组杂种优势鉴定,以此对改良株系进行评价。主要研究结果如下:1.选择了与目标基因紧密连锁并在亲本间具有良好的多态性的分子标记RM224和RM262,并以此获得了具有Pi-kh基因的2个改良恢复系TR2、TR4和具有Pi-d1抗病基因的4个改良恢复系DR3、DR4-1、DR4-2和DR1。2.通过田间鉴定,结果显示改良后的恢复系抗稻瘟病等级均达到抗级,对比受体亲本均得到了提高,但在穗颈瘟上抗性较弱。配制组合的抗稻瘟病结果表明抗稻瘟病基因Pi-d1和Pi-kh在杂交选育的恢复系抗性表达彻底。另外,在不同的不育系测交种背景下,它们也表现出较高的抗性水平,表明抗性基因对杂交水稻组合的稻瘟病抗性具有显著影响。3.在农艺性状上,改良恢复系对比原受体亲本部分性状得到改进。在杂种优势分析中,DR1所配组合的优势最为明显,单株产量性状超父优势平均为13.8%,竞争优势平均为1.0%。DR4-1恢复力较低,与三个不育系的结实率均低于70%。TR2,TR4配制的组合上在生育期上存在过长的问题。DR3虽然自交结实率低,但在配组利用中得到产量和农艺性状较优良的组合。4.在试验所使用的籼型和偏籼型的材料中,亲本间InDel标记距离在表型值和超标优势中,与株高、穗长和千粒重呈负相关,与总粒数、实粒数、结实率、有效穗和单株产量呈正相关。在超父优势中,亲本间InDel标记距离与株高、穗长、总粒数、实粒数和千粒重呈正相关,与结实率、有效穗和单株产量呈负相关。

关键词：恢复系稻瘟病抗性分子标记辅助育种杂种优势

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作业成本法在建筑装饰业的应用研究

作业成本法在建筑装饰业的应用研究

作者：傅烨南京理工大学

学位级别：硕士

随着社会经济的发展,我国的建筑装饰行业发展迅速,企业之间的竞争愈来愈激烈。并且在加入WTO的三年过渡期过后,中国建筑装饰市场逐渐对外打开,我国建筑装饰企业面临前所未有的机遇和挑战,投标报价在激烈的市场竞争中越来越低,使得原来... 详细信息

随着社会经济的发展,我国的建筑装饰行业发展迅速,企业之间的竞争愈来愈激烈。并且在加入WTO的三年过渡期过后,中国建筑装饰市场逐渐对外打开,我国建筑装饰企业面临前所未有的机遇和挑战,投标报价在激烈的市场竞争中越来越低,使得原来就很狭小的利润空间一缩再缩。施工企业要想在激烈的竞争中生存和发展,就必须改变过去粗放的管理模式,从加强自身的施工项目成本管理入手,降低工程成本,以提高企业经济效益。本文以作业成本法在建筑装饰企业的应用为研究对象,剖析建筑装饰企业成本管理的现状,通过对作业成本法理论的介绍,结合具体建筑装饰企业用作业成本法实施成本控制的实例分析,论述了在建筑装饰企业引入作业成本管理的成本控制思路,强调运用作业成本法对企业项目成本实施准确的核算,从而降低项目成本,改善企业的经济管理及提高企业的经济效益。

关键词：建筑装饰成本管理作业成本法

窄式阅读在城乡结合部高中英语阅读教学中的应用研究

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窄式阅读在城乡结合部高中英语阅读教学中的应用研究

作者：赵东烨辽宁师范大学

学位级别：硕士

阅读,作为获取信息的主要手段,同时也是高考分值最大的题型,越来越得到老师和学生们的重视。但是目前的高中学校(尤指城乡结合部的高中)的英语阅读教学仍存在很多问题,学生英语基础薄弱,英语成绩差,并逐渐丧失学习信心。窄式阅读作为一... 详细信息

阅读,作为获取信息的主要手段,同时也是高考分值最大的题型,越来越得到老师和学生们的重视。但是目前的高中学校(尤指城乡结合部的高中)的英语阅读教学仍存在很多问题,学生英语基础薄弱,英语成绩差,并逐渐丧失学习信心。窄式阅读作为一种有效的阅读方法,提倡读者反复阅读同一主题或者同一体裁文章来提升阅读水平。窄式阅读有助于学生积累同一主题的词汇和背景知识,从而降低阅读材料的难度,提升学生的阅读信心,有望改善基础薄弱学生的英语阅读成绩,优化阅读策略。本研究以图式理论和情感过滤假说为理论依据,将窄式阅读运用于高中英语阅读教学中,以教材中涉及的主题为基础,展开相同主题的窄式阅读。从呼和浩特市一所私立学校选取两个平行班的100名学生作为实验对象,进行为期16周的教学实验。通过教学实验主要回答以下三个问题:1.窄式阅读应用于高中英语阅读教学中对提升学生的阅读信心有何影响?2.窄式阅读应用于高中英语阅读教学中怎样提高学生的阅读成绩?3.窄式阅读应用于高中英语阅读教学中对改善学生的阅读策略有何影响?本研究主要采用文献综述法,问卷法,测试法及访谈法收集数据。笔者通过文献综述总结国内外关于窄式阅读的研究现状,从而为本研究指明方向。其次,笔者运用访谈法来了解实验班学生对窄式阅读应用于英语阅读教学的反馈,并通过学生对访谈问题的作答来分析学生的英语阅读信心有无增强,在实验前后分别设计了不同的访谈问题。前、后测主要用来验证窄式阅读对学生英语阅读成绩的影响,通过比较前、后测中的考试得分来验证实验班学生的英语阅读成绩是否提高。本研究也运用问卷法来调查被试者实验前后的阅读策略使用情况的变化,实验前后使用同一问卷。最后,本次实验数据应用SPS23.0软件分析,为后期分析和讨论实验结果做了充实的准备。研究表明:窄式阅读通过同一主题的反复训练,使学生积累更多相关的词汇和背景知识,扫清阅读障碍,消除学生的畏难心理,从而提升学生的阅读信心;其次,通过一学期窄式阅读,学生熟练地掌握了阅读步骤,养成了良好的阅读习惯,最终由窄到宽,阅读能力实现逐步提高,从而提高阅读成绩;与此同时,运用窄式阅读,并在阅读过程中进行阅读策略指导,能够有效的优化学生的阅读策略,其中对词汇策略,预测策略,情感策略以及反思和总结策略的使用频率均有明显提高。本研究通过实验证实了窄式阅读在高中英语阅读教学中的可行性,为未来的研究提供参考,但也存在一定的局限性。因此,笔者将做进一步研究。

关键词：窄式阅读英语阅读教学城乡结合部高中

体外诱导脂肪干细胞分化用于构建组织工程化肾脏的研究

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体外诱导脂肪干细胞分化用于构建组织工程化肾脏的研究

作者：张建烨山东大学

学位级别：硕士

研究背景:慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是一种严重威胁人类健康的全球性疾病,且近年来发病率有逐年增高的趋势。据统计,在我国终末期肾病(end stage renal diseases,ESRD)的患者约有十余万人之多,已经成为一个严重的社会问... 详细信息

研究背景:慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是一种严重威胁人类健康的全球性疾病,且近年来发病率有逐年增高的趋势。据统计,在我国终末期肾病(end stage renal diseases,ESRD)的患者约有十余万人之多,已经成为一个严重的社会问题。成人肾脏具有一定数量的肾单位,一旦受损很难再生。然而目前对于终末期肾病并没有理想有效的治疗方式,现今的治疗主要有两种:透析和肾脏移植。透析治疗严重影响着患者的生活质量,并且使患者家庭承担了巨大的经济负担。且长时间的透析会产生心血管疾病、骨病等多种并发症。肾脏移植是当前治疗ESRD最有效的治疗方法,但是供体短缺及严重的免疫排斥反应很大程度上限制了其广泛应用。因此,对于临床医生来说迫切地需要寻找一种新的治疗ESRD措施。肾脏再生的目的在于在建立一个具备完整肾脏结构和功能的人工肾脏,目前肾脏再生的策略主要有六种:囊胚互补,体外诱导肾脏类器官,后肾移植,成体肾脏干细胞,生物人工肾(bioartificial kidney,BAK)和脱细胞肾支架(decellularized kidney scaffold,DKS)。囊胚互补是指在sall1基因缺失的小鼠囊胚内通过显微注射外源性干细胞,使干细胞与囊胚共同发育并形成嵌合体,进而获得外源性干细胞来源的肾脏,该方法的优点在于细胞来源可自主选择并且可获得完整肾脏,但是由于外源干细胞和囊胚所产生的嵌合体存在严重的伦理问题,因此并不能成为理想的肾脏再生方法。肾脏类器官研究,干细胞是一种能够向各种细胞类型分化的细胞类型,通过向培养基中添加生长因子可以体外诱导多能干细胞向肾系分化,而后通过3D培养可以获得具有立体结构的肾脏类器官,期望通过细胞的自我组装成为组织器官。其缺点是缺乏血管供应,且分化效率较低。后肾移植是通过解剖获取胚胎期的后肾组织移植到肾衰动物体内,可以一定程度上缓解肾衰程度,后肾细胞处于肾脏前体细胞或肾脏祖细胞发育阶段,因此具有较高的多能性,并且免疫原性较低,但是因为需要使用胚胎肾脏进行移植,同样存在伦理问题,限制了临床应用。肾脏干细胞是成体干细胞中研究最晚的一类干细胞,理论上肾乳头为肾脏干细胞的壁龛,通过分离肾脏干细胞并在体外培养,可在培养分化出肾脏细胞,用于肾脏再生研究。但是目前对于肾脏干细胞的研究主要集中在发育中的胚胎肾。研究表明,肾脏干细胞来源于输尿管芽诱导的后肾间质,但当前对肾脏成体干细胞的分离技术尚不成熟,还有待深入研究。生物人工肾是将工程科学技术与再生医学相结合的装置,用以起到替代肾脏功能的作用,该技术能够一定程度上维持尿毒症患者在肾功能衰竭状态下的生存。干细胞结合肾脏脱细胞支架构建组织工程肾脏是一种实现肾脏再生的新方法,有望能够起到肾脏替代治疗的作用,因此成为近年来再生医学研究的热点课题之一。肾脏脱细胞支架技术是指将动物成体的肾脏组织经化学和物理方法去除原本肾脏中的自体细胞,剩余无免疫原性或低免疫源性的细胞外基质,将其作为生物材料用于构建组织工程支架,而后使用成体细胞或者干细胞灌注脱细胞支架使之再细胞化,经过一段时间的共培养获得具有一定功能的组织工程肾脏。脱细胞支架由于原本的供体细胞被洗脱因而免疫源性大大降低,并且保留了正常肾脏的结构和细胞外因子,有利于种子细胞在支架内的生长和分化。对于种子细胞的选择,正常肾脏中细胞种类较为复杂,难以选择一种或者几种成体细胞进行肾脏再生。近年来对干细胞的研究日益深入,干细胞具有多向分化且无限增殖的特性,能够在不同的环境条件下向不同的细胞类型分化,因此是一类比较理想的种子细胞类型。先前的研究中曾利用胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESCs)、脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)、大鼠后肾间质细胞等结合脱细胞支架进行肾脏再生研究,但是上述细胞均存在伦理问题而不能进一步应用于临床。脂肪干细胞(Adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)是一种易于获取、容易培养并且具有多项分化潜能的干细胞类型。脂肪干细胞来源于中胚层,在特异性生长因子和环境的影响下可以跨越胚层分化。间介中胚层(Intermediate mesoderm,IM)是中胚层阶段的一部分,其主要的分化方向为肾脏和性腺,是肾实质结构的来源。研究目的:本实验拟采用脂肪干细胞在体外环境下通过添加诱导因子诱导其分化为间介中胚层细胞,之后用于对肾脏脱细胞支架的再细胞化,从而构建有肾脏结构和部分功能的组织工程肾脏。研究方法:1.分离、培养原代ADSCs:取大鼠腹股沟脂肪垫脂肪,经过消化离心等步骤获取原代脂肪干细胞,传至第四代用于后续实验,通过光镜观察细胞形态,诱导成脂分化,14天后进行油红O染色,成

关键词：肾脏再生脱细胞支架脂肪间充质干细胞间介中胚层诱导分化

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望霞危岩破坏模式及其力学解译

重庆师范大学学报（自然科学版） 2018年第1期35卷 48-55页

作者：陈洪凯王圣娟重庆交通大学岩土工程研究所重庆400074

【目的】位于巫峡长江左岸的望霞危岩是长江三峡地区代表性板状危岩,对它破坏机制的研究,是揭示三峡地区边坡地貌演化的突破口,也是巫峡长江航道地质减灾的着力点。【方法】采用现场地质勘察、能量原理和突变理论方法,研究望霞危岩破坏... 详细信息

【目的】位于巫峡长江左岸的望霞危岩是长江三峡地区代表性板状危岩,对它破坏机制的研究,是揭示三峡地区边坡地貌演化的突破口,也是巫峡长江航道地质减灾的着力点。【方法】采用现场地质勘察、能量原理和突变理论方法,研究望霞危岩破坏模式并对它进行力学解译。【结果】望霞危岩呈板状,由硅质灰岩和泥质灰岩组成;危岩体后部主控结构面贯通段为串珠状溶蚀漏斗,充填大量松散土体,主控结构面锁固段上段为硬质灰岩、下段为软质泥页岩,引入水致弱化函数提出了主控结构面锁固段灰岩和泥页岩的本构模型;构建了望霞危岩力学模型;构建了座滑破坏模式危岩瞬时破坏平均速度的计算方法,据此得到望霞危岩破坏瞬间的平均速度为2.62m·s-1,推知危岩破坏瞬间危岩体底部的瞬时速度约为5.21m·s-1。【结论】望霞危岩的破坏模式属于座滑破坏,危岩瞬时破坏持续时间约2.3s,与实情吻合良好。研究成果可为分析三峡两岸危岩破坏问题提供重要参考借鉴。

关键词：望霞危岩破坏模式力学解译应变能计算板状危岩

水轮机式液力透平的两相流动性能分析及蜗壳改型研究

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水轮机式液力透平的两相流动性能分析及蜗壳改型研究

作者：庞烨西安理工大学

学位级别：硕士

液力透平能够用于回收工业流程中的余压能,是我国当前能源政策中重点开发的装备。在一些工业流程的余压能回收中,高压工质为气液两相混合物,此时要求液力透平能够在气液两相条件下高效稳定的运行。为揭示透平在两相工况下的气液相流动... 详细信息

液力透平能够用于回收工业流程中的余压能,是我国当前能源政策中重点开发的装备。在一些工业流程的余压能回收中,高压工质为气液两相混合物,此时要求液力透平能够在气液两相条件下高效稳定的运行。为揭示透平在两相工况下的气液相流动规律和能量转化机理,改善透平内部气相工质分布不均匀的现象,提高透平在两相工况下的能量回收效率,本文采用欧拉-欧拉粒子两相模型和SSTk-ω湍流模型对一水轮机式液力透平展开研究,探究了该模型在不同的气液两相工况下工作时的外特性能,研究了透平内部两相工质的流动规律,分析了透平内两相分离的机理以及透平做功能力随进口含气率下降的原因,提出了抑制蜗壳内气液分离的改型方案,并对方案效果进行了数值计算分析。研究结果表明,水轮机式液力透平在纯液工况工作时拥有90%的效率;随着透平入口工质中含气率的增加,透平的效率和输出功率明显下降,两相工质在蜗壳中的气液分离现象加剧,透平内部流场中的气相分布不均匀程度随之加剧,叶轮出口边的气相体积分数增大并产生气相聚集。与此同时,叶轮进口边发生回流,叶轮流道内吸力面的游涡变大,耗散的能量增大,压力面和吸力面压差降低,导致透平输出功率和效率降低。在蜗壳中蹭加隔板隔板之后,透平的效率和输出功率得到有效提高,当进口气相工质的体积分数为0.20时,可以平均提升透平的输出功率30kw,在中等流量工况时可以最高提高透平的效率4.1%。两相工质在蜗壳中分为两个部分运动,抑制了两相工质的分离,蜗壳四分之一管段中两相工质的含气率上升。蜗壳中气相的重新调整改善了叶轮的入口流场,使叶轮进口边压力面的压力变大,增大了叶片压力面和吸力面之间的压差。同时,蜗壳改型后透平的叶片吸力面漩涡小于未改型的模型,漩涡耗散的能量减少,透平的输出功率和效率都得到有效提高。

关键词：水轮机式液力透平气液两相流欧拉-欧拉粒子模型蜗壳改型性能分析

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以古代论说文培养高中生思辨能力的教学研究

以古代论说文培养高中生思辨能力的教学研究

作者：黄健烨南宁师范大学

学位级别：硕士

注重培养学生“实证、推理、批判与发现的能力,增强思维的逻辑性和深刻性”,是新课标思辨性阅读与表达任务群发展理念及其学科素养的发展要求,这与学科素养思维发展与提升的培养相契合,主要在于强调培养学生的思辨能力。古代论说文是一... 详细信息

注重培养学生“实证、推理、批判与发现的能力,增强思维的逻辑性和深刻性”,是新课标思辨性阅读与表达任务群发展理念及其学科素养的发展要求,这与学科素养思维发展与提升的培养相契合,主要在于强调培养学生的思辨能力。古代论说文是一种具备议论和说理特征的文本,内含丰富的思辨因素,是教师开展学生思辨能力培养的文本载体。笔者通过文献研究、问卷调查、访谈调查等研究方法,在前人已有的理论和实践基础上,结合利用古代论说文教学培养学生的思辨能力,做出思考和论述,以期能为古代论说文培养高中生思辨能力的教学提供切实可行的策略。本论文整体内容如下:第一部分,介绍本论题的研究缘起和研究意义,明确思辨能力培养已经成为语文教学的重要内容,针对国内外对思辨能力培养的研究现状进行分析总结,发现我国思辨能力培养研究已经获得了较为丰富的研究成果,而利用古代论说文培养思辨能力的相关理论和实践研究成果还比较少,在这样的基础上,笔者尝试运用相关研究方法进行本论文的研究。第二部分,则对古代论说文和思辨能力进行概述,结合语文学科核心素养和语文学习任务群分别对古代论说文及思辨能力进行概念界定,论述了利用古代论说文培养高中生思辨能力教学的辩证唯物主义、皮亚杰的认知发展心理学、语文思维学三方面的理论基础。第三部分是对以古代论说文培养高中生思辨能力的教学现状与问题的分析。其中,对G中学的225位高二学生进行了调查问卷,对4位高二语文教师进行了访谈调查。问卷调查了高中生古代论说文学习的思辨能力表现情况、古代论说文课堂教学培养学生思辨能力的情况、古代论说文课外思辨能力拓展训练的情况三个层面的问题。访谈调查了教师对高中古代论说文教材的了解、教师借古代论说文文本特征的教学来培养学生思辨能力的情况、教师对思辨性教学的认知程度以及教师古代论说文教学的重视程度、教师在古代论说文教学中的思辨性思维拓展训练的情况,发现教师教学中存在不能充分利用古代论说文教学培养学生思辨能力的问题。第四部分是本论文的重点,针对上述的问题分析和现状调查,结合一线教学实际提出具体的利用古代论说文培养高中生思辨能力的教学策略,一是立足古代论说文特征培养学生思辨能力,利用具有:论点鲜明,寓意深刻、对比论证,多元思辨、辩证严谨,立场鲜明、语言凝练,条理清晰文本特征的古代论说文来分别培养学生的质疑、反思、判断、推理能力。二是着眼教材文本,引导学生展开思辨性学习,在古代论说文的课堂内充分利用古代论说文的整体说理性和议论性对学生的思辨能力进行培养。三是联系学生现实生活,发掘思辨能力培养途径,将利用古代论说文培养学生思辨能力的教学引导向课外延伸,促进学生在课外进行积极的辩证思考。目前利用古代论说文培养学生思辨能力是一个新的探索,笔者期待通过研究来解决利用古代论说文培养思辨能力教学中的一部分问题,提高高中语文教师在古代论说文教学中培养学生思辨能力的教学水平。

关键词：古代论说文教学思辨能力推理能力思辨学习辩证思考

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CQM标准中冷热冲击试验的等效性研究

CQM标准中冷热冲击试验的等效性研究

作者：汪佳烨华东师范大学

学位级别：硕士

本文主要研究了 CQM标准中不同条件的冷热冲击试验的等效性问题。本文讨论了运用三参数威布尔(Weibull)模型,如何根据冷热冲击试验获得的分组数据进行参数估计。文中分别采用了极大似然函数和似然函数简化计算的方法进行估计,确认了简... 详细信息

本文主要研究了 CQM标准中不同条件的冷热冲击试验的等效性问题。本文讨论了运用三参数威布尔(Weibull)模型,如何根据冷热冲击试验获得的分组数据进行参数估计。文中分别采用了极大似然函数和似然函数简化计算的方法进行估计,确认了简化方法的不可行。同时使用极大似然函数得到了不同冷热冲击试验条件的威布尔模型的参数和期望寿命。通过期望寿命的比较、证明了 CQM标准中规定的冷热冲击试验条件并不等效。在确认了试验条件不等效的基础上,本文讨论了运用Norris-Landzberg模型,计算CQM标准中不同试验条件的等效方法。在温度条件不同的情况下,可以通过调节循环数来达到等同的效果。

关键词：三参数威布尔模型冷热冲击试验 Norris-Landzberg模型 CQM 等效

TSC1/TSC2基因通过调控mTOR通路对非小细胞肺癌的影响及作用机制

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TSC1/TSC2基因通过调控mTOR通路对非小细胞肺癌的影响及作用机制

作者：王延烨天津医科大学

学位级别：硕士

【目的】非小细胞肺癌是最常见的肺部恶性肿瘤,约占肺癌整体的85%,目前仍无法完全治愈。随着基因检测技术的不断发展,针对非小细胞肺癌患者的特定基因突变靶向治疗屡创佳绩。本研究发现TSC1/TSC2基因突变可能影响非小细胞肺癌患者的预... 详细信息

【目的】非小细胞肺癌是最常见的肺部恶性肿瘤,约占肺癌整体的85%,目前仍无法完全治愈。随着基因检测技术的不断发展,针对非小细胞肺癌患者的特定基因突变靶向治疗屡创佳绩。本研究发现TSC1/TSC2基因突变可能影响非小细胞肺癌患者的预后。通过引起TSC1,TSC2复合物功能的丧失,最终导致mTOR的异常激活和细胞生长增殖失控。因此,本研究将通过改变已知TSC突变以及未发生TSC突变的NSCLC细胞系中TSC1和TSC2的表达水平,观察了非小细胞肺癌细胞表型变化以及在使用mTOR抑制剂后的表型差异并讨论其潜在机制。【方法】收集燃石医学基因突变数据报告、TCGA在线数据库cbioportal以及Kaplan-Meier Plotter网站数据:通过检索分析并总结TSC1、TSC2基因突变的预估模型。并观测TSC1、TSC2表达差异对非小细胞肺癌患者中的生存影响。通过细胞增殖实验、细胞凋亡实验、细胞划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验等方法培养实验细胞,观察细胞表型;BCA试剂盒浓度测定蛋白浓度后,通过Western blot实验,荧光定量PCR等方法分别检测实验组与对照组细胞的相关蛋白以及mRNA表达情况,最终通过使用mTOR通路抑制剂依维莫司处理低表达的肺癌细胞,采用Western blot方法观察处理后信号通路不同分子磷酸化的改变情况并使用CCK-8法观察细胞凋亡情况。【结果】根据各项临床数据显示,TSC1/TSC2突变患者约占所有检测患者的3%(30/1002),总结突变的临床数据提示:TSC1/TSC2突变患者以老年、男性、吸烟患者为主。通过Kaplan-Meier Plotter在线网站分析TSC1、TSC2基因表达:TSC1/TSC2低表达在非小细胞肺癌中预示预后不良,其中以吸烟、男性、早期腺癌为主要特征。对实验室现有细胞系检测,对于正常肺上皮细胞系B2B来说,大部分肺癌细胞在TSC1/TSC2的mRNA,蛋白表达水平均降低。与对照组相比,H1975S细胞的TSC1 siRNA组,TSC2 siRNA组在增殖,侵袭及迁移方面显著增强(P>0.01);过表达TSC1、TSC2的A549细胞组与对照组相比增殖,侵袭能力减弱。配合依维莫司处理后可轻度抑制H1975S细胞TSC1 siRNA组与TSC2siRNA组的增殖,但结果无明显统计学差异,另外细胞迁移能力可观察到明显差异。【结论】***1,TSC2非小细胞肺癌患者中突变率为约2%,3.66%;且以老年、男性、吸烟为特征;***1,TSC2在大部分非小细胞肺癌中低表达,尤其在肺腺癌中表达程度越低预后越差,是影响肺腺癌患者总体生存期的独立危险因素之一;3.通过实验验证改变TSC1,TSC2表达水平后,将显著影响H1975S细胞的恶性程度。其中低表达使细胞恶性程度提高,而高表达促进H1975S细胞凋亡;提高A549细胞TSC1,TSC2表达水平后,细胞恶性程度可降低。***通路抑制剂依维莫司可轻度抑制TSC1低表达与TSC2低表达的H1975S细胞增殖能力,显著抑制其迁移能力;依维莫司作用结果有待进一步确认。依维莫司作用效果仍需进一步体内及体外实验验证。

关键词：非小细胞肺癌 TSC1 TSC2 mTOR通路抑制剂