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东海原甲藻增殖细胞核抗原的体外表达和抗体制备

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东海原甲藻增殖细胞核抗原的体外表达和抗体制备

作者：王国善中国海洋大学

学位级别：硕士

本研究针对东海原甲藻（Prorocentrum donghaiense）和中肋骨条藻（Skeletonema costatum）这两种东海常见赤潮藻,研究了其增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA）的体外表达和抗体制备方法,为建立赤潮藻快速、高... 详细信息

本研究针对东海原甲藻（Prorocentrum donghaiense）和中肋骨条藻（Skeletonema costatum）这两种东海常见赤潮藻,研究了其增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA）的体外表达和抗体制备方法,为建立赤潮藻快速、高效、特异的免疫学检测方法奠定了基础。我们首先依据东海原甲藻和中肋骨条藻PCNA基因的测序结果,利用DNAStar搜索开放阅读框（Open Reading Frame, ORF）并翻译成氨基酸序列;对东海原甲藻和中肋骨条藻PCNA的氨基酸序列进行比对,选择特异性高的区域作为目标区,将两者的氨基酸序列按照最优密码子原则转译为基因序列;然后对东海原甲藻和中肋骨条藻PCNA基因序列片段进行基因合成。利用基因工程技术,将合成的PCNA基因连接到PUC57质粒载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株进行基因克隆;通过筛选培养后DH5α菌株,获得有目的基因插入的质粒;运用双酶切技术将含有目的基因的片段插入到pGEX-6P-1载体上转化BL21菌株;筛选含有目的基因的单克隆菌株并进行培养后,加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导目的基因表达;利用超声波破碎经诱导表达的菌体,按照谷胱甘肽-S-转移酶（GST）亲和层析纯化蛋白质的方法,过柱纯化目的蛋白;用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法检测获得的目的蛋白。检测结果证明,本实验成功运用基因工程技术在国际上首次获得了在体外表达的东海原甲藻和中肋骨条藻的PCNA,并且其纯度大于85%,达到作为抗原免疫的要求。在以上工作基础上,以东海原甲藻为对象,进一步开展了其抗体制备技术的研究。我们将东海原甲藻PCNA蛋白片段与弗氏佐剂充分乳化后免疫小鼠;经过4次常规免疫和4次强化免疫后,取被免疫小鼠尾部血清,进行间接酶联免疫反应（iELISA）检测。检测结果显示,本实验成功获得了以东海原甲藻PCNA为抗原的多克隆抗体,且其效价大于80000,能够用于制备单克隆抗体。

关键词：赤潮增殖细胞核抗原（PCNA）多克隆抗体东海原甲藻中肋骨条藻

中国鞋履市场品牌营销研究 ——以卡骆驰Crocs品牌为例

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中国鞋履市场品牌营销研究 ——以卡骆...

作者：王国善复旦大学

学位级别：硕士

国外企业对于品牌的作用不仅有深入的认识,还能够充分利用品牌为企业创造价值。中国自主品牌参差不齐,许多还在摸索品牌的运作,许多已然驾轻就熟了。全球金融风暴,席卷了欧美国家,中国也是受灾户,然而数据和预测都在显示,中国的成长相... 详细信息

国外企业对于品牌的作用不仅有深入的认识,还能够充分利用品牌为企业创造价值。中国自主品牌参差不齐,许多还在摸索品牌的运作,许多已然驾轻就熟了。全球金融风暴,席卷了欧美国家,中国也是受灾户,然而数据和预测都在显示,中国的成长相对速度将要加快,很快就超越许多已开发国家。国外的经济萧条给中国自主品牌一个大好机会。本文分为六章结构: 第一章,主要说明研究背景及研究的意义。第二章,回顾品牌的经典定义,了解品牌的价值和功能,了解现今品牌对于消费的意义。第三章,研究鞋履市场,从中国宏观和大范围的供需现状,谈到上海市场鞋履消费者的特征和其消费倾向。尤其在全球金融风暴之下,市场供需的改变,产业结构的改变,消费者也在改变,今后中国鞋履产业势必面临巨大的挑战。品牌营销策略也势必重新了解上海今后的市场。第四章进入本文的重点,分析卡骆驰Crocs品牌的营销策略。先从美国Crocs品牌介绍开始,引入该品牌在中国、在上海市场的现状。接着以简化的品牌营销策略活动结构,一步一步分析卡骆驰Crocs品牌营销策略的利弊得失等等。本文还假设了一个可行的目标市场,根据营销策略活动运作的方式,模拟规划目标市场的营销活动。第五章回到自主品牌本身,了解其现状,并对品牌营销策略提出建议。第六章简要说明了本文的缺陷及不足之处。

关键词：品牌定位品牌营销营销策略

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毕瑞讲述智能包装的故事

上海包装 2014年第4期 23-25页

作者：王国善

智能包装是包装业的发展趋势，瑞典的各种创意公司都在花大力进行开发。瑞典的智能包装研发不但要满足基本的产品保护要求，还要符合品牌、智能和可持续发展方面的要求。下面，让我们走进毕瑞的智能包装。

关键词：智能包装故事可持续发展发展趋势产品保护包装业瑞典

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建筑工程造价与水利工程造价的异同

建材与装饰 2016年第38期 146-147页

作者：王国善石嘴山市水利勘测设计院有限公司

不同建设工程造价在项目划分、造价编制、造价费用等多个方面都有一定的不同。对此,本文将以与建筑工程为研究对象,将建筑工程造价与水利工程造价进行比较,首先对建筑工程设计和建设特点以及水利工程设计和建设特点进行分析,然后对两者... 详细信息

不同建设工程造价在项目划分、造价编制、造价费用等多个方面都有一定的不同。对此,本文将以与建筑工程为研究对象,将建筑工程造价与水利工程造价进行比较,首先对建筑工程设计和建设特点以及水利工程设计和建设特点进行分析,然后对两者造价管理的异同点进行详细探究。

关键词：水利工程建筑工程造价编制

Development of a real-time PCR assay(SYBR Green I) for rapid identification and quantification of scyphomedusae Aurelia sp.1 planulae

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Chinese Journal of Oceanology and Limnology 2015年第4期33卷 974-987页

作者：王建艳甄毓米铁柱于志刚王国善 College of Marine Life Sciences Ocean University of China College of Environmental Science and Engineering Ocean University of China Key Laboratory of Marine Environment and Ecology Ministry of Education Ocean University of China College of Chemistry and Chemical Engineering Ocean University of China Key Laboratory of Marine Chemistry Theory and Technology Ministry of Education Ocean University of China

The complicated life cycle of A urelia spp., comprising benthic asexually-reproducing polyps and sexually-reproducing medusae, makes it hard for researchers to identify and track them, especially for early stage individuals, such as planulae. To solve this problem, we developed a real-time PCR assay(SYBR Green I) to identify planulae in both cultured and natural seawater samples. Species-specific primers targeting Aurelia sp.1 mitochondrial 16 SrDNA(mt 16 SrDNA) regions were designed. Using a calibration curve constructed with plasmids containing the A urelia sp.1 mt 16 SrDNA fragment and a standard curve for planulae, the absolute number of mt 16 SrDNA copies per planula was determined and from that the total number of planulae per sample was estimated. For the field samples, a 100-fold dilution of the sample DNA combined with a final concentration of 0.2 μg/μL BSA in the PCR reaction mixture was used to remove realtime PCR inhibitors. Samples collected in Jiaozhou Bay from July to September 2012 were subsequently analyzed using this assay. Peak A urelia sp.1 planula abundance occurred in July 2012 at stations near Hongdao Island and Qingdao offshore; abundances were very low in August and September. The real-time PCR assay(SYBR Green I) developed here negates the need for traditional microscopic identification, which is laborious and time-consuming, and can detect and quantify jellyfish planulae in field plankton samples rapidly and specifically.

关键词：实时定量PCR SYBR 水母快速鉴定绿色发展量化线粒体16S 实时荧光定量PCR

基于mt-16SrDNA和mt-COI基因的海月水母分子生物学鉴定方法和检测技术

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应用生态学报 2013年第3期24卷 847-852页

作者：王建艳甄毓王国善米铁柱于志刚中国海洋大学海洋生命学院山东青岛266003 中国海洋大学海洋环境与生态教育部重点实验室山东青岛266100 中国海洋大学海洋化学理论与工程技术教育部重点实验室山东青岛266100

以我国近海海域常见的海月水母为目标生物,提取其水母基因组DNA,PCR扩增mt-16SrDNA(650bp)和mt-COI基因(709bp)的部分序列,经纯化、克隆、测序后,将获得的序列进行BLASTn分析,筛选目的序列中与其他水母差异较大的区域,设计出8对分别针... 详细信息

以我国近海海域常见的海月水母为目标生物,提取其水母基因组DNA,PCR扩增mt-16SrDNA(650bp)和mt-COI基因(709bp)的部分序列,经纯化、克隆、测序后,将获得的序列进行BLASTn分析,筛选目的序列中与其他水母差异较大的区域,设计出8对分别针对海月水母mt-16SrDNA和mt-COI基因序列的特异性引物.经过实验室培养样品和模拟现场样品检测发现,针对mt-16SrDNA的引物AS3和mt-COI的引物AC3具有较好的特异性,可以从海蜇、沙海蜇、霞水母、端鞭水母和海月水母中快捷地检测出目标水母,从而初步建立了海月水母的分子生物学鉴定方法和检测技术.本技术摆脱了水母形态学鉴定方法存在的局限,可准确、快速地对样品进行定性分析.

关键词：海月水母 mt-16S rDNA mt-COI 特异性引物

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“比较法”在高中地理教学中的应用

教育艺术 2022年第6期 36-36页

作者：王国善甘肃省民乐县第一中学

随着新课程改革的进一步推进,高中地理课程的教学目标更倾向于让学生深度了解地理知识的规律,使学生能够在掌握规律的前提下,进行更加高效地自主学习。本文以地理比较法为切入点,分析阐述如何提升高中地理教学质量。

关键词：高中地理地理比较法地理知识自主学习新课程改革教学目标教学中的应用掌握规律

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石嘴山市五分沟治理措施及存在问题

农业与技术 2016年第22期36卷 235-236,239页

作者：段克明王国善石嘴山市水利勘测设计院有限公司宁夏石嘴山753000

五分沟排域所处的银北地区属于青铜峡灌区下游,地势低洼,地下水埋深浅,大部分农田排水困难,加之灌排设施老化,农田建设标准较低,致使部分区域土壤盐渍化程度较为严重,盐碱地改良与综合治理已成为提高耕地质量、建设高标准基本农田、增... 详细信息

五分沟排域所处的银北地区属于青铜峡灌区下游,地势低洼,地下水埋深浅,大部分农田排水困难,加之灌排设施老化,农田建设标准较低,致使部分区域土壤盐渍化程度较为严重,盐碱地改良与综合治理已成为提高耕地质量、建设高标准基本农田、增加农民收入等最关键、最核心的问题。通过土壤盐渍化治理,改造了中低产田,提高灌区农业生产能力,保障粮食安全和增加农民收入,从而缩小了城乡差距,让农民实实在在地得到了实惠,同时也为打造一个生态良好、景观优美、清新舒适、人与自然和谐发展的绿水城乡打下基础。

关键词：土壤盐渍化砌护方案排水流量治理措施存在问题

改进选择实验法在居民浒苔治理意愿评估中的应用

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资源科学 2018年第10期40卷 1943-1953页

作者：单菁竹李京梅林雨霏王国善中国海洋大学经济学院青岛266100 中国海洋大学海洋发展研究院青岛266100 国家海洋局海洋减灾中心北京100194

选择实验法是通过问卷调查获取大量个体对资源环境属性状态选择集的偏好信息,评估资源环境非市场价值的前沿方法。受访者面对多种选择集的高信息负荷,由于认知水平受限,经常通过为物品属性设定可接受的最低/最高水平,即属性临界值,以简... 详细信息

选择实验法是通过问卷调查获取大量个体对资源环境属性状态选择集的偏好信息,评估资源环境非市场价值的前沿方法。受访者面对多种选择集的高信息负荷,由于认知水平受限,经常通过为物品属性设定可接受的最低/最高水平,即属性临界值,以简化决策过程,易造成模型估计结果的偏差。本文针对黄海胶州湾海域浒苔治理支付意愿,考虑属性临界值的存在及违反情况,设计引出属性临界值的选择实验问卷,建立修正选择模型,以青岛市实地调研的397个有效样本为数据来源,对居民浒苔治理意愿进行评估。研究结果表明:(1)属性临界值的存在及违反具有普遍性,忽略其存在及违反情况将导致估计结果的偏差;(2)将属性临界值存在及违反情况纳入效用方程,对传统选择实验分析框架进行修正,结果表明,经修正的选择模型的拟合度更优,能更好地解释受访者选择行为。在参数估计方面,浒苔治理恢复属性对居民效用水平显著正向影响,滨海景观、近海水质属性临界值的违反对居民效用水平显著负向影响;(3)青岛市居民对治理浒苔恢复滨海景观、改善近海水质、增加生物多样性和修复海洋生物资源的年支付意愿分别为90.68元、84.92元、49.34元、43.17元,2017年青岛市胶州湾海域浒苔治理总支付意愿为33.006亿元。与传统模型的对比表明,考虑属性临界值存在及违反情况的选择模型能更有效地反映受访者的实际边际效用,并在此基础上提高支付意愿估计结果的效度。

关键词：属性临界值选择实验法浒苔治理支付意愿青岛