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紫外线诱导人黑色素瘤A375细胞自噬与凋亡效应的初步探讨

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紫外线诱导人黑色素瘤A375细胞自噬与凋亡效应的初步探讨

作者：王同帅南方医科大学

学位级别：硕士

黑色素瘤(Cutaneous Malignant Melanoma,CMM),又称恶性黑色素瘤,来源于黑素细胞,呈高侵袭性,易出现远端转移。紫外线是造成皮肤表层细胞DNA损伤的主要的物理因素之一,也是诱发黑色素瘤的明确病因之一。自噬(Autophagy)与凋亡(Apoptosis... 详细信息

黑色素瘤(Cutaneous Malignant Melanoma,CMM),又称恶性黑色素瘤,来源于黑素细胞,呈高侵袭性,易出现远端转移。紫外线是造成皮肤表层细胞DNA损伤的主要的物理因素之一,也是诱发黑色素瘤的明确病因之一。自噬(Autophagy)与凋亡(Apoptosis)是细胞内两种程序性死亡方式。细胞自噬性降解可维持生理状态下机体的稳态,过度自噬引起的自噬失调与肿瘤、感染、神经退行性变等疾病相关。凋亡是通过激活内源性DNA内切酶而诱导的细胞死亡过程。恶性黑色素瘤的发生、发展通常与细胞凋亡基因调控失常而导致凋亡障碍有关。自噬与凋亡作为两种调控方式共同存在于细胞内,二者共同的调控因子使二者可以发生相互转化,从而决定细胞的命运。MicroRNA通过降解靶基因参与自噬与凋亡的调控。因此深入研究UVB的辐射损伤机制及microRNA在其中的作用,能为预防和靶向治疗黑色素瘤提供重要依据。研究目的探讨中波紫外线(UVB)和模拟日光紫外线对A375细胞自噬、凋亡的影响,以及自噬与凋亡相互调控来分析紫外线对黑色素瘤A375细胞的生存能力等生物学功能改变,并初步探讨microRNA-664在相互调控中的作用机制。研究方法用不同剂量的UVB(功率密度:165 μW/cm2)照射A375细胞,在照后不同时间点双荧光自噬慢病毒监测10、30、50mJ/cm2UVB照后A375细胞自噬情况的变化;CCK-8法检测增殖变化;流氏细胞术分析细胞凋亡及周期变化;qPCR检测miR-664的表达;Western Blot分析自噬、凋亡、周期、DNA损伤等生物学功能标志蛋白变化。模拟不同剂量日光照射(UVA:UVB=95:5,UVA功率密度为118μW/cm2),观察照后不同时间点A375细胞自噬、凋亡变化,并分析相应的生物学功能标志蛋白变化。研究结果(1)UVB 照射:1)0～50mJ/cm2的UVB照射,对A375细胞自噬诱导的能力呈先增高后降低的抛物线趋势,30mJ/ccm2最强。10、30mJ/cm2照射后,自噬体数量在0～6h内逐渐增多,9h开始减少。相应地,LC3、Beclin1在0～50mJ/cm2UVB照后表达先增加后减少,10、30mJ/cm2组蛋白表达在0～6h逐渐增加,9h表达减少;2)UVB照射时,10、30mJ/cm2照后均有凋亡高峰(9h)延迟于自噬高峰出现(6h),且在自噬最强时有凋亡标志蛋白表达被抑制;3)10、30mJ/cm2的UVB照射A375细胞后,细胞增殖能力均有照后0～6h逐渐增强,9h开始减弱的趋势,但两个剂量增减幅度不同。1OmJ/cm2照射后,在0～9h内,S期细胞比例增多,对应的CDK4的表达也呈逐渐增加,且9h达最大值。30mJ/cm2照射组,未见细胞周期的明显改变。在照后24h后细胞均表现为存活。(2)模拟日光紫外照射:1)不同剂量(10、30、50mJ/cm2)照后均可诱导A375细胞产生自噬,10、30mJ/cm2照射,自噬体在0～6h内逐渐增多,9h开始下降,50mJ/cm2模拟日光照射后自噬体在3h即可形成,在观察时间内均维持较高自噬水平。与之对应的,10、30mJ/cm2组LC3、Beclin1表达在6h才出现显著增加,而50 mJ/cm2组在3h已显著增加,6～12h持续高表达;2)单纯UVA、单纯UVB及模拟日光紫外照射方式分别照射A375细胞后,三者对自噬诱导能力的由强到弱依次为:模拟照射>单独UVB照射>单独UVA照射;3)30mJ/cm2模拟日光紫外照射A375细胞后,凋亡高峰(照后9h)延迟于自噬高峰(照后6h)出现,且自噬高峰有凋亡蛋白Caspase3/9的表达降低。抑制自噬后,6h、9h凋亡蛋白Caspase3/9表达增加。(3)较于黑素原代细胞,miR-664在A375细胞中呈低表达,上调miR-664后,UVRAG、Beclin-1表达降低,Atg5、Atg12表达量上升,BAX及Bcl-2无明显变化。研究结论1.10、30mJ/cm2的UVB照射,诱导A375细胞产生的自噬促进细胞增殖,对细胞呈保护作用,10mJ/cm2的UVB照射,可诱导细胞发生S期阻滞;***或模拟日光紫外照射可诱导A375细胞产生自噬,UVB是主要贡献者;3.紫外照射诱导产生的自噬可以延迟凋亡的发生,促进细胞存活;4.A375细胞中miR-664的表达低于黑色素原代细胞,miR-664可能参与紫外诱导A375细胞自噬与凋亡相互调控。

关键词：紫外线 miR-664 黑色素瘤自噬凋亡交互调控

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我国绿色港口发展研究

我国绿色港口发展研究

作者：王同帅大连海事大学

学位级别：硕士

港口是世界经济增长的重要推动力,同时也是主要的污染源头和耗能单位。在全球环境恶化和能源危机的新形势下,全球气候变化诱发的”绿色工业革命”在世界范围内推广,越来越多的国家或地区日益意识到航运业发展与全球生态环境保护的密切联... 详细信息

港口是世界经济增长的重要推动力,同时也是主要的污染源头和耗能单位。在全球环境恶化和能源危机的新形势下,全球气候变化诱发的”绿色工业革命”在世界范围内推广,越来越多的国家或地区日益意识到航运业发展与全球生态环境保护的密切联系,港口界提出了绿色港口的发展理念。国家“十二五”综合交通运输体系规划中,提出了强化节约资源保护环境的发展要求,强调以绿色发展为指导思想,切实推进绿色交通系统建设,加大节能减排力度,努力控制交通运输领域温室气体排放,全面提高综合交通运输体系可持续发展能力。党的十八大报告更是把大力推进生态文明建设提升到战略高度。绿色港口发展作为生态文明建设的重要组成部分,其重要性不言而喻;在航运业绿色发展的大潮下,中国绿色港口的发展迫在眉睫。本文首先讲述了文章的选题背景,总结了国内外在绿色港口研究方面的不足,提出进一步研究的必要性、研究意义及文章的主要内容、框架。其次,讲述了绿色港口绿色发展的相关理论,主要包括可持续发展理论、绿色经济学理论,绿色港口的概念和内涵,绿色港口的价值。然后,分析了国内外绿色港口发展的现状,通过对比分析找出了我国绿色港口发展过程的不足之处;建立了绿色港口评价指标体系并以天津港为例进行了实证分析,找出了其绿色港口发展过程中的薄弱环节。最后,针对绿色港口建设、发展过程中的不足及薄弱环节提出相应的对策建议。

关键词：绿色港口评价指标体系发展对策

不同压力下梳形聚合物结构对油品流动性影响的研究

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不同压力下梳形聚合物结构对油品流动性影响的研究

作者：王同帅华东理工大学

学位级别：硕士

原油中的重质碳氢化合物常在环境温度低于原油的析蜡温度时析出,从而堵塞管道,为原油的开采和运输带来严重的困难。向原油中加入聚合物降凝剂改善原油的低温流动性是一种经济有效并被广泛采用的方法。然而,目前的研究普遍在常压下进行,... 详细信息

原油中的重质碳氢化合物常在环境温度低于原油的析蜡温度时析出,从而堵塞管道,为原油的开采和运输带来严重的困难。向原油中加入聚合物降凝剂改善原油的低温流动性是一种经济有效并被广泛采用的方法。然而,目前的研究普遍在常压下进行,而原油常常储存在压力很高的地层深处,在运输过程当中输油管道内部也存在着一定的压力。压力对于原油的流动性质有着不可忽略的影响。因此,有必要在高压条件下系统的研究原油的流动特性以及聚合物降凝剂的降凝效果。本文通过自由基聚合和侧链接枝的方法,制备了两类基于马来酸酐-α-烯烃共聚物的聚合物降凝剂,一种是含有脂肪侧链的MAC-24-18与MAC-18-18系列共聚物,另一种是具有芳香侧链***和ANMAC系列共聚物。通过核磁共振氢谱(1H-NMR)对聚合物的结构进行了分析。在常压下,运用流变仪、荧光显微镜等测量仪器探究了聚合物中烷基链长度和侧链芳香度对油品流动性及蜡结晶过程的影响。结果显示所合成的梳型共聚物均能够有效的降低含蜡模型油的屈服值,并对蜡晶的形貌或分散性起到一定的改善作用。通过荧光显微镜观测含蜡模型油中的蜡晶形貌以及聚合物分布后发现聚合物的侧链基团种类对蜡结晶过程有很大影响,不含芳环的聚合物(MAC系列)主要通过共晶的方式改变了蜡晶的形貌,而含有芳环的聚合物(AMAC、NMAC和ANMAC系列)则主要通过吸附及排斥机理起到分散蜡晶的作用。利用高压流变仪,考察了含蜡原油在不同静压力下流变性质的变化。压力的升高可以显著提高含蜡原油的粘度,同时通过促进原油中石蜡的结晶过程使得原油拥有更高的析蜡点和屈服应力。考察了芳香性和非芳香性共聚物在高压下对原油屈服值的降低效果,发现这两类聚合物在常压和高压下对含蜡油的改善效果有着不同的趋势。接枝有芳香性聚合物的添加剂在常压下可以显著的降低含蜡原油的屈服应力,然而在高压下其降低原油屈服应力的效果则增长缓慢,而MAC系列共聚物则在高压和常压下均能够与原油中的蜡进行共晶从而起到很好的效果。

关键词：压力高蜡原油梳型聚合物低温流动性

14-3-3σ在中波紫外线诱导的HaCaT细胞增殖和周期中的作用

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中华放射医学与防护杂志 2016年第4期36卷 246-251页

作者：黄海波周良王同帅周美娟南方医科大学公共卫生与热带医学学院放射医学系广东省热带病研究重点实验室广州510515

目的初步研究14-3-3σ在中波紫外线（UVB）照射诱导的HaCaT细胞增殖和周期阻滞中的作用。方法不同剂量UVB（0、10、20、30、40、50、60和80 mJ/cm2）照射HaCaT细胞和14-3-3σ稳定干扰细胞系（HaCaTKD14-3-3σ,以下简称HaCaTKD）。照后... 详细信息

目的初步研究14-3-3σ在中波紫外线（UVB）照射诱导的HaCaT细胞增殖和周期阻滞中的作用。方法不同剂量UVB（0、10、20、30、40、50、60和80 mJ/cm2）照射HaCaT细胞和14-3-3σ稳定干扰细胞系（HaCaTKD14-3-3σ,以下简称HaCaTKD）。照后48 h,结晶紫染色法观察细胞生长密度。30 mJ/cm2UVB照射后,CCK-8法检测HaCaT和HaCaTKD细胞的增殖变化,流式细胞术分析细胞G2/M期细胞比例的变化,Western blot检测UVB照射后两种细胞的14-3-3σ、Cdc2、Cdc25c和Cyclin B1蛋白表达水平。结果 UVB照后48 h,两种细胞存活率均呈剂量依赖性下降,且HaCaTKD在10 mJ/cm2即可出现明显下降（t=8.83~49.63,P〈0.05）。HaCaTKD细胞的增殖能力显著低于HaCaT细胞（F=32.89,P〈0.05）;30 mJ/cm2的UVB照射后,HaCaT细胞在24 h后恢复增殖能力,但HaCaTKD细胞在72 h仍未见增殖变化。HaCaTKD细胞在各观察点G2/M期细胞比例均未改变（P〉0.05）;30 mJ/cm2UVB照射后,HaCaT细胞在6~18 h发生G2/M期阻滞（t=7.41、9.22、9.16,P〈0.05）,HaCaTKD细胞G2/M期细胞比例未发生改变（P〉0.05）。UVB照后6、12、18、24 h和照前相比,HaCaT细胞中14-3-3σ表达量上调（t=5.42~9.57,P〈0.05）;HaCaT和HaCaTKD两种细胞中的Cdc25c和Cyclin B1的表达水平在照后均下调（t=3.95~11.21,P〈0.05）;Cdc2在HaCaT细胞中下调（t=4.93~5.37,P〈0.05）,在HaCaTKD细胞中无变化（P〉0.05）。结论 UVB照射或不照射,14-3-3σ的表达情况均能影响HaCaT细胞的增殖变化和细胞周期,UVB照射能诱导HaCaT细胞发生G2/M期阻滞,这种阻滞可能是由14-3-3σ的表达所介导,进而引起周期相关蛋白Cdc2、Cdc25c和Cyclin B1的表达改变而引发的。

关键词： 14-3-3σ 中波紫外线增殖细胞周期

紫外线对黑色素瘤细胞A375自噬与凋亡诱导效应

维普期刊数据库评论

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实用医学杂志 2017年第8期33卷 1223-1227页

作者：王同帅王超鹏周美娟南方医科大学公共卫生学院放射医学系广州市510515

目的:探究紫外线(UV)对黑色素瘤细胞A375自噬的诱导效应及自噬与凋亡之间的相互调控。方法:模拟日光UV(95%UVA,5%UVB)照射A375后,自噬慢病毒监测不同时间点细胞自噬的变化;流式细胞术分析30 m J/cm2混合照后6、9 h细胞凋亡的变化;蛋白... 详细信息

目的:探究紫外线(UV)对黑色素瘤细胞A375自噬的诱导效应及自噬与凋亡之间的相互调控。方法:模拟日光UV(95%UVA,5%UVB)照射A375后,自噬慢病毒监测不同时间点细胞自噬的变化;流式细胞术分析30 m J/cm2混合照后6、9 h细胞凋亡的变化;蛋白质印迹法检测30 m J/cm2照并干扰自噬后对凋亡标志蛋白的影响。结果:(1)UV能诱导A375自噬,10、30 m J/cm2的UV照后6 h能监测到细胞形成自噬体、9 h达高峰,50 m J/cm2照射组在照后6 h达自噬高峰且持续到观察时间的结束;(2)单纯UVB对自噬的诱导能力明显高于单纯UVA,且二者表现为协同效应;(3)30 m J/cm2的UV照射,在照后9 h发现Caspase 3、9表达降低,抑制自噬后,6、9 h凋亡标志蛋白Caspase 3、9表达增高,两组细胞在6、9 h的早期凋亡百分率差异显著(P<0.01)。结论:UV能够诱导A375自噬,UVB的贡献高于UVA。UV诱导的自噬能够推迟凋亡发生,对细胞起保护作用。

关键词：黑色素瘤紫外线自噬细胞凋亡

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这份“家庭作业”值得借鉴

这份“家庭作业”值得借鉴

添加钴对FeCuNbSiB非晶/纳米晶磁芯软磁性能的影响

企业家日报

作者：王同帅申屠建华

“咚咚咚”，在中国安能一局安徽大沙河综合治理怀宁段工程等EPC项目部办公区的二楼传来一阵清脆的敲门声。新来工地的大学生吕子豪推开了项目经理的门，一眼便瞧见了正埋头在办公桌前奋笔疾书的项目部负责人张杰。好奇的他凑到张杰跟... 详细信息

“咚咚咚”，在中国安能一局安徽大沙河综合治理怀宁段工程等EPC项目部办公区的二楼传来一阵清脆的敲门声。新来工地的大学生吕子豪推开了项目经理的门，一眼便瞧见了正埋头在办公桌前奋笔疾书的项目部负责人张杰。好奇的他凑到张杰跟前：“张总，还没下班呢?”“没有呢，......

关键词：项目部家庭作业大沙河

来源： cnki报纸评论

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机械工程材料 2018年第10期42卷 29-33页

作者：李久明王同帅刘启瑞蒋达国井冈山大学建筑工程学院吉安343009 井冈山大学数理学院吉安343009

在Fe_(73.5)Cu_1Nb_3Si_(13.5)B_9合金成分基础上用硅和钴取代硼,采用单辊快淬法制备了Fe_(73.5)Co_(0.3)Cu_1Nb_3Si_(14.2)B_8合金带,将其绕制成环型磁芯后进行不同温度退火处理,研究了钴的添加对合金带晶化行为及其磁芯软磁性能的影... 详细信息

在Fe_(73.5)Cu_1Nb_3Si_(13.5)B_9合金成分基础上用硅和钴取代硼,采用单辊快淬法制备了Fe_(73.5)Co_(0.3)Cu_1Nb_3Si_(14.2)B_8合金带,将其绕制成环型磁芯后进行不同温度退火处理,研究了钴的添加对合金带晶化行为及其磁芯软磁性能的影响。结果表明:添加钴对合金带的晶化行为没有显著影响,试验合金带为非晶态结构,经550℃退火处理后磁芯为非晶和纳米晶共存的结构;添加钴后,试验合金非晶/纳米晶磁芯的起始磁导率和饱和磁感应强度分别减小了0.149 9H·m^(-1)和388T,矫顽力增大了0.338 5A·m^(-1),直流软磁性能降低;试验合金非晶/纳米晶磁芯在高频(小于100kHz)下的有效幅值磁导率、电感、品质因数均增大,比总损耗和矫顽力均减小,交流软磁性能提高。

关键词： FeCuNbSiB非晶带材钴晶化行为软磁性能

Ni取代对FeCuNbSiB纳米晶磁芯软磁性能的影响

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磁性材料及器件 2018年第5期49卷 1-4,35页

作者：文兴旺王同帅郭斌井冈山大学数理学院江西吉安343009 井冈山大学网络中心江西吉安343009

用单辊法制备了宽20 mm、厚25μm的Fe_(73.5)Cu_1Nb_3Si_(13.5)B_9和Fe_(73.5)Ni_(0.3)Cu_1Nb_3Si_(14.2)B_8合金带材,然后绕制成外径为40 mm、内径为25 mm的环型磁芯,并在不同温度下进行退火处理,研究了Ni取代对合金带材的晶化行为以... 详细信息

用单辊法制备了宽20 mm、厚25μm的Fe_(73.5)Cu_1Nb_3Si_(13.5)B_9和Fe_(73.5)Ni_(0.3)Cu_1Nb_3Si_(14.2)B_8合金带材,然后绕制成外径为40 mm、内径为25 mm的环型磁芯,并在不同温度下进行退火处理,研究了Ni取代对合金带材的晶化行为以及纳米晶磁芯软磁性能的影响。结果表明,与FeCuNbSiB合金带材相比,Ni取代的FeNiCuNbSiB合金带材,其一级起始晶化温度Tx1和一级晶化峰温度Tp1降低,其二级起始晶化温度Tx2和二级晶化峰温度Tp2升高,两级起始晶化温度之间的差值ΔTx增大。与FeCuNbSiB纳米晶磁芯相比,Ni取代的FeNiCuNbSiB纳米晶磁芯的起始磁导率μi、饱和磁感应强度Bs减小,矫顽力Hc增大;当测试频率f和最大磁感应强度Bm不变时,有效幅值磁导率μa增大,比总损耗Ps和矫顽力Hc减小;当测试频率f不变时,电感Ls和品质因数Q增大。

关键词： FeCuNbSiB非晶带材 Ni取代晶化行为纳米晶软磁性能

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要让职工群众来评价

思想政治工作研究 1997年第5期 47-47页

作者：王同帅王群芳河南洛阳春都集团党办

企业深化改革,其举措成功与否,评判者只能是广大职工。有句话说得好:“工人的心,企业的根。”要而言之,工人阶级是企业的主体,是社会主义财富的创造者,也是我国改革开放、社会稳定、经济发展的根本力量。过去搞革命。

关键词：职工群众河南洛阳春都集团全心全意依靠工人阶级深化企业改革社会主义改革措施深化改革社会稳定经济发展根本力量