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1例商品肉鹅新型鸭呼肠孤病毒和鹅星状病毒混合感染的诊断

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养禽与禽病防治 2024年第6期 30-35页

作者：刘兆洁刘湘王友令吴晓薇梁昭平曾小辉蔡广娣熊金光广东省华晟生物技术有限公司广州511300 广州达农生物科技有限公司广州510665 广州天易生物科技有限公司广州510650 广州海关技术中心广州510623 华南农业大学兽医学院广州510642

2023年9月中旬山东菏泽地区某规模化肉鹅养殖场5日龄维鹅发病,直至8日龄出现死亡现象且死亡率逐日上升。为查明该批雏鹅病死原因,根据临床症状以及死亡雏鹅剖检病理变化进行初步判断,并采集发病鹅肝脏病料进行分子生物学检测。通过剖检... 详细信息

2023年9月中旬山东菏泽地区某规模化肉鹅养殖场5日龄维鹅发病,直至8日龄出现死亡现象且死亡率逐日上升。为查明该批雏鹅病死原因,根据临床症状以及死亡雏鹅剖检病理变化进行初步判断,并采集发病鹅肝脏病料进行分子生物学检测。通过剖检病死雏鹅观察其器官病理变化,结果表明8日龄病死雏鹅肝脏出血、坏死,脾脏肿大、出血呈黑紫色;12日龄病死维鹅心脏、肝脏和肌胃等器官表面出现白色尿酸盐沉积。对8日龄病死雏鹅肝脏病料进行普通RT-PCR检测,结果显示禽流感病毒、鹅细小病毒和新城疫病毒均为阴性,鹅星状病毒与新型鸭呼肠孤病毒均为阳性;分别对8日龄、12日龄肝脏病料进行荧光定量RT-PCR检测,结果显示禽流感病毒、番鸭呼肠孤病毒和小鹅瘟病毒均为阴性,而8日龄、12日龄鹅星状病毒与新型鸭呼肠孤病毒均为阳性,上述结果表明该批雏鹅在8日龄前出现新型鸭呼肠孤病毒与鹅星状病毒混合感染。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒鹅星状病毒混合感染

鹅星状病毒实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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养禽与禽病防治 2024年第3期 19-24页

作者：梁昭平刘湘王友令刘兆洁吴晓薇曾小辉蔡广娣熊金光华南农业大学兽医学院广州510642 广州达农生物科技有限公司广州510665 广东省华晟生物技术有限公司广州511300 广州海关技术中心广州510623

研究旨在建立1种检测鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)的实时荧光定量TaqManRT-PCR检测方法。制备含有GAstV目的基因的标准质粒,以10倍比稀释的GAstV标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用5个稀释度的标准品验证该方法的批内和批... 详细信息

研究旨在建立1种检测鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)的实时荧光定量TaqManRT-PCR检测方法。制备含有GAstV目的基因的标准质粒,以10倍比稀释的GAstV标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用5个稀释度的标准品验证该方法的批内和批间重复性,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果:建立的实时荧光定量TaqMan RT-PCR方法仅在鹅星状病毒RNA样本中检出荧光信号。最低检出量为7.51×10^(2)copies/μL,敏感性良好,是常规RT-PCR的1000倍;线性范围达8个数量级。该方法重复性良好,批内和批间的变异系数均在1.4%以下。通过检测临床样本并结合常规RT-PCR的检出结果,计算二者的符合率高达96.15%,证明该法准确性高,可用于临床、生产实际的检测。综上该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性以及准确性,用于GAstV的临床诊断、流行病学调查,降低GAstV给养鹅业带来的影响。

关键词：鹅星状病毒实时荧光定量RT-PCR TaqMan探针痛风

实时荧光定量TaqManPCR检测禽腺病毒C4型方法的建立及初步应用

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养禽与禽病防治 2024年第5期 9-14页

作者：袁朝霞刘湘王友令吴晓薇梁昭平刘兆洁曾小辉蔡广娣熊金光仲恺农业工程学院广州510225 广州达农生物科技有限公司广州510665 广州天易生物科技有限公司广州510650 广州海关技术中心广州510623 华南农业大学兽医学院广州510642 广东省华晟生物技术有限公司广州511300

研究旨在建立一种检测禽腺病毒C4型的实时荧光定量TaqManPCR技术。以禽腺病毒C4型(Fowl aviadenovirus 4 isolate SD1601/FAdV-4株)DNA为模板,建立检测禽腺病毒C4型的实时荧光定量PCR方法。制备含有上述FAdV-C4目的片段的DNA作为标准品,... 详细信息

研究旨在建立一种检测禽腺病毒C4型的实时荧光定量TaqManPCR技术。以禽腺病毒C4型(Fowl aviadenovirus 4 isolate SD1601/FAdV-4株)DNA为模板,建立检测禽腺病毒C4型的实时荧光定量PCR方法。制备含有上述FAdV-C4目的片段的DNA作为标准品,以10倍比稀释的FAdV-C4标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用5个稀释度的标准品验证该方法的批内和批间重复性,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果:建立的实时荧光定量TaqManPCR方法仅在FAdV-C4DNA样本中检出荧光信号。最低检出量为4.738×10^(2)copies/μL,敏感性良好,是常规PCR的100倍;线性范围达9个数量级。该方法重复性良好,批内和批间的变异系数均在0.9%以下。以上结果表明,建立的FAdV-C4实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强和重复性好,有用于临床样品中禽腺病毒C4型的快速检测潜力,为诊断FAdV-C4提供分子生物学依据,以降低FAdV-C4对我国养禽业的影响。

关键词：禽腺病毒禽腺病毒C4型实时荧光定量PCR

实时荧光定量TaqManRT-PCR检测坦布苏病毒方法的建立及初步应用

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养禽与禽病防治 2024年第6期 2-7页

作者：袁朝霞刘湘王友令刘兆洁梁昭平吴晓薇曾小辉蔡广娣熊金光仲恺农业工程学院广州510225 广州达农生物科技有限公司广州510665 广东省华晟生物技术有限公司广州511300 华南农业大学兽医学院广州510642 广州海关技术中心广州510623

研究旨在建立一种检测鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu Virus,DTMUV)的实时荧光定量TaqManRT-PCR检测方法。制备含有DTMUV目的基因的标准质粒,以10倍比稀释的DTMUV标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用5个稀释度的标准品验证该方法的批... 详细信息

研究旨在建立一种检测鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu Virus,DTMUV)的实时荧光定量TaqManRT-PCR检测方法。制备含有DTMUV目的基因的标准质粒,以10倍比稀释的DTMUV标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用5个稀释度的标准品验证该方法的批内和批间重复性,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果:建立的实时荧光定量TaqManRT-PCR方法仅在鸭坦布苏病毒RNA样本中检测出荧光信号。最低检出浓度为3.70×10^(2)copies/μL,敏感性良好,是常规RT-PCR的100倍;线性范围达10个数量级。该方法重复性良好,批内和批间的变异系数均在0.8%以下。经临床样品检测证实该法可用于DTMUV的临床鉴别诊断及流行病学调查,为该病的综合防控措施提供分子生物学参考依据。

关键词：鸭坦布苏病毒实时荧光定量RT-PCR TaqMan探针

2023年我国禽流感等禽病流行情况与2024年预测分析

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养禽与禽病防治 2024年第2期 2-5页

作者：贾伟新孙敏华信爱国李珂叶贺佳王友令于可响郑朝锋曹伟胜亓文宝任涛廖明华南农业大学兽医学院国家禽流感专业实验室(广州)人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室农业农村部人畜共患病重点实验室农业农村部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广东省人兽共患病防控制剂工程实验室广州510640 广东省农业科学院动物卫生研究所农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室广州510640 云南省畜牧兽医科学院养禽与禽病研究所昆明650224 广州市华南农大生物药品有限公司广州511399 广州达农生物科技有限公司广州510145 山东省农业科学院家禽研究所济南250023 新疆生产建设兵团第三师畜牧兽医工作站新疆图木舒克843900

2023年我国家禽生产较为稳定,疫病控制总体良好。全球高致病性禽流感疫情持续威胁我国家禽业,对我国高致病性禽流感防控带来巨大压力,且在局部地区造成损失。本文将对我国2023年禽流感等重要家禽疫病发生情况简要回顾,对2024年禽病的流... 详细信息

2023年我国家禽生产较为稳定,疫病控制总体良好。全球高致病性禽流感疫情持续威胁我国家禽业,对我国高致病性禽流感防控带来巨大压力,且在局部地区造成损失。本文将对我国2023年禽流感等重要家禽疫病发生情况简要回顾,对2024年禽病的流行趋势进行预测分析。

关键词：高致病性禽流感疫病控制家禽生产家禽业禽病家禽疫病预测分析流行趋势

实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测鸭新型呼肠孤病毒方法的建立及初步应用

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养禽与禽病防治 2023年第9期 12-17页

作者：刘湘曾小辉蔡广娣熊金光王友令广州达农生物科技有限公司广州510665 广州天易生物科技有限公司广州N510650

研究旨在建立一种适用于鸭新型呼肠孤病毒检测的实时荧光定量TaqManRT-PCR技术。以鸭新型呼肠孤病毒(SDDZ株)RNA为模板,建立检测鸭新型呼肠孤病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。制备含有上述NDRV目的片段的RNA作为标准品,以10倍比稀释的标... 详细信息

研究旨在建立一种适用于鸭新型呼肠孤病毒检测的实时荧光定量TaqManRT-PCR技术。以鸭新型呼肠孤病毒(SDDZ株)RNA为模板,建立检测鸭新型呼肠孤病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。制备含有上述NDRV目的片段的RNA作为标准品,以10倍比稀释的标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用标准品检测该方法的批内和批间重复性,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果:建立的实时荧光定量TaqManRT-PCR方法能在鸭新型呼肠孤病毒(SDDZ株)RNA样本中检出荧光信号。最低检出量为1.77copies/μL;线性范围达10个数量级。该方法重复性良好,批内变异系数不足1.1%;批间变异系数不足1.7%。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,经体外感染细胞培养物以及临床样品检测证实,该方法可实时反映病毒液中的病毒含量,可在获得样品后3h以内得到检测结果,可用于临床样品中鸭新型呼肠孤病毒的快速检测。

关键词：鸭新型呼肠孤病毒实时荧光定量PCR TaqMan 探针

新城疫病毒HN和F基因遗传变异相关性的研究

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微生物学报 2006年第2期46卷 227-232页

作者：秦卓明马保臣何叶峰王友令崔治中徐怀英袁小远山东农业大学动物科技学院泰安271018 山东省农业科学院家禽研究所济南250100

选取国内1999-2005年发生的NDV毒株，经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖，对其融合蛋白（F）和血凝素．神经氨酸酶（HN）基因分别进行克隆测序，结合在GenBank中发表的具有F和HN基因的NDV序列，利用DNAStar软件，对其不同毒株的F或HN基因片段... 详细信息

选取国内1999-2005年发生的NDV毒株，经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖，对其融合蛋白（F）和血凝素．神经氨酸酶（HN）基因分别进行克隆测序，结合在GenBank中发表的具有F和HN基因的NDV序列，利用DNAStar软件，对其不同毒株的F或HN基因片段和全长、F和HN基因全长分别进行遗传变异的研究，利用统计学软件SPSS8．0进行同源性相关分析。结果表明：不同NDV毒株F或HN基因片段与其全长之间，核甘酸r≥0．973，氨基酸：0．911≤r≤0．968，遗传变异高度相关，但F与HN基因全长之间核甘酸的遗传变异呈现弱相关（r=0．312）。国内NDV野毒株之间HN核甘酸高度同源（同源率97％以上），而与LaSota同源率仅为79．2％-80．7％，且显示出明显的地域性。

关键词：新城疫病毒 F基因 HN基因同源性遗传变异相关性

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新城疫病毒非编码序列的遗传演化趋势

微生物学报 2014年第9期54卷 1073-1081页

作者：徐怀英秦卓明亓丽红张伟王友令刘金华中国农业大学动物医学院北京100094 山东省农业科学院山东济南250100

【目的】探讨新城疫病毒全基因序列中非编码序列的分子演化规律。【方法】结合本研究室2012年自产蛋下降鸭群中分离测序的一株鸭源新城疫病毒全序列,从GenBank下载35株不同基因型新城疫病毒全长cDNA序列,获取非编码序列,分别绘制引导序... 详细信息

【目的】探讨新城疫病毒全基因序列中非编码序列的分子演化规律。【方法】结合本研究室2012年自产蛋下降鸭群中分离测序的一株鸭源新城疫病毒全序列,从GenBank下载35株不同基因型新城疫病毒全长cDNA序列,获取非编码序列,分别绘制引导序列、尾随序列、F-HN及HN-L基因间隔序列(IGS)的遗传进化树,比较编码基因内5’及3’UTR序列核苷酸序列替代特点。【结果】非编码序列的长度及位置高度保守,而其核苷酸基因序列在不断发生变异,且变异趋势与编码基因序列相一致。【结论】新城疫病毒在整个基因组上编码和非编码序列同步发生变异。

关键词：新城疫基因组非编码序列演化

新城疫La Sota疫苗对不同基因型流行株的免疫保护

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浙江农业学报 2009年第5期21卷 446-449页

作者：王友令徐怀英李莉秦卓明山东省农业科学院家禽研究所山东济南250100

选取国内2001—2003年发生的5株NDV毒株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,克隆其融合蛋白(F)和血凝素—神经氨酸酶(HN)基因。利用F基因为Ⅱ型的疫苗La Sota活疫苗在隔离器中免疫SPF鸡,每7d采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病... 详细信息

选取国内2001—2003年发生的5株NDV毒株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,克隆其融合蛋白(F)和血凝素—神经氨酸酶(HN)基因。利用F基因为Ⅱ型的疫苗La Sota活疫苗在隔离器中免疫SPF鸡,每7d采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病毒(NDV)基因Ⅶ流行株潍坊毒SGM01,昌乐毒SCL03,东营毒SKY和莘县毒SSX03;基因为Ⅱ型日照毒SRZ03和基因为Ⅲ型经典强毒F48E9分别进行攻毒试验,同时设SPF鸡对照。每天观察,及时剖检发病鸡,检查鸡群病变,观查疫苗的保护性,便于对常规生产中的免疫失败原因进行分析。

关键词：新城疫免疫保护 F基因 HN基因