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稀有鮈鲫ER基因的克隆及内分泌干扰物对其表达的影响

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稀有鮈鲫ER基因的克隆及内分泌干扰物对其表达的影响

作者：王厚鹏西北农林科技大学

学位级别：硕士

内分泌干扰物（Endocrine disrupting chemicals, EDCs）具有类激素的作用，能够干扰生物包括人类在内的正常的内分泌功能，环境雌激素是其中重要的一员。雌激素在脊椎动物的许多生理过程中起着重要的作用，机体中介导雌激素发挥雌激素... 详细信息

内分泌干扰物（Endocrine disrupting chemicals, EDCs）具有类激素的作用，能够干扰生物包括人类在内的正常的内分泌功能，环境雌激素是其中重要的一员。雌激素在脊椎动物的许多生理过程中起着重要的作用，机体中介导雌激素发挥雌激素效应主要是通过雌激素受体（Estrogen Receptor，ER）完成的，雌激素与ER结合形成雌激素-ER复合体，引起雌激素受体构象发生改变，通过与靶基因上游调控区域的雌激素反应元件（estrogen response element，ERE）结合，增强并调控靶基因的转录，进而影响靶基因编码蛋白的水平，调节机体的生长、发育及生殖活动。在鱼类中，ER大多包含三种类型，分别为ERα、ERβ1和ERβ2，参与鱼类的性别决定和性别分化等生理过程。稀有鮈鲫是我国特有的一种小型的鲤科鱼类，被广泛用于水生毒理学的研究，是一种理想的研究EDCs的模式鱼类。为研究EDCs对稀有鮈鲫雌激素受体基因mRNA的干扰作用，并探究EDCs在体内的作用机制，本实验通过同源克隆和RACE的方法获得了稀有鮈鲫雌激素受体基因ERα、ERβ1和ERβ2三个基因的全长cDNA序列，长度分别为2438bp、2724bp和2600bp，共编码氨基酸残基分别为598、608和554个。序列分析发现，稀有鮈鲫ERα、ERβ1和ERβ2基因结构同其他的核受体家族一样，也是分为六个功能结构域，从N端到C端依次为A/B，C，D，E和F，其中C区和E区高度保守，分别为DNA结合区和配体结合区。多重序列比对及系统发育树分析表明，获得的稀有鮈鲫ER基因编码的氨基酸与其他鲤科鱼类的氨基酸具有较高的相似性，ERα与黑头软口鲦的ERα相似性为91.1%，ERβ1与拟鲤的ERβ1相似性为92.9%，ERβ2与唐鱼的ERβ2相似性为93.5%。半定量RT-PCR的方法检测ERα、ERβ1和ERβ2基因的组织分布情况，结果显示ERα基因mRNA主要在性腺和肝脏中表达;ERβ1在雌鱼中，肝脏的表达量最高，在雄鱼中，主要在肠、睾丸及肝脏中表达;ERβ2在肠、肝脏及性腺中具有较高的表达量。用受精后34天的稀有鮈鲫幼鱼进行EDCs（EE2，NP和BPA）暴露试验，每种EDCs设三个暴露浓度：EE2（0.01，0.1，1nM）、NP（10，100，1000nM）、BPA（0.1，1，10nM），暴露3天后，实时定量PCR的方法检测ERα、ERβ1和ERβ2基因mRNA的变化。同对照相比结果显示，三个浓度的EE2能够极显著的升高ERα基因mRNA的表达，但又均抑制ERβ1基因mRNA的并在1nM时抑制作用达到极显著的水平，对ERβ2基因mRNA的表达变化在高低浓度之间表现出相反的结果，0.1nM的EE2显著升高ERβ2基因mRNA的表达而1nM的EE2显著降低ERβ2基因mRNA的表达;除了10nM的NP对ERα基因mRNA的表达略有升高外，三个浓度的NP对ERα、ERβ1和ERβ2基因mRNA的表达均表现出不同程度的抑制作用;BPA作为一种具有弱雌激素效应的EDCs，对稀有鮈鲫ERα、ERβ1和ERβ2基因mNRA的表达影响不是很明显，只在10nM和1nM的BPA浓度下分别对ERα的升高和ERβ2的降低达到了显著的水平，其他浓度均无明显的影响。结果表明，EDCs（EE2、NP、BPA）对不同类型的雌激素受体基因mRNA影响并不是以相同的方式产生作用的;不同类型的雌激素受体基因也可能参与到其他的调控方式共同调节鱼类的生长、发育和繁殖。

关键词：雌激素受体稀有鮈鲫内分泌干扰物实时定量 PCR

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月面灵巧探测网络系统设计探讨

载人航天 2021年第1期27卷 86-92页

作者：曹素芝李昌浩王厚鹏孙雪中国科学院空间应用工程与技术中心北京100094 中国科学院大学北京100049

针对月球广覆盖、长时连续探测的需求,提出了一种基于无线传感网络的月面灵巧探测网络系统。该系统以低功耗探测器作为感知节点,基于LoRa技术构建月面分布式探测网络,通过容器技术封装上层信息处理流程,实现月面探测数据实时处理。仿真... 详细信息

针对月球广覆盖、长时连续探测的需求,提出了一种基于无线传感网络的月面灵巧探测网络系统。该系统以低功耗探测器作为感知节点,基于LoRa技术构建月面分布式探测网络,通过容器技术封装上层信息处理流程,实现月面探测数据实时处理。仿真选取了月球南半球一块面积为23350 m×58300 m的典型区域,搭建了月面灵巧探测网络的地面演示系统,模拟了环境检测数据的采集与实时处理过程。仿真结果表明:当移动接入点M-AP节点数超过46时,其覆盖率能够达到100%,且总趋势大致呈线性上升,验证了月面分布式通信组网、数据实时收集处理方案的可行性。

关键词：月球探测分布式组网无线传感网络灵巧探测器

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团头鲂nanos3基因的克隆鉴定

水生生物学报 2019年第3期43卷 457-464页

作者：朱林王厚鹏朱作言孙永华叶鼎中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072 中国科学院大学现代农业科学学院武汉430072

为了标记团头鲂(Megalobrama amblycephala)的原始生殖细胞(Primordial Germ Cells, PGCs),首次克隆并鉴定了团头鲂nanos3基因(mananos3)。mananos3全长1027 bp,包括48 bp 5′UTR (5′untranslated Region),490 bp 3′UTR和489 bp开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)。该基因编码162个氨基酸。通过序列比对发现Mananos3蛋白和其他物种Nanos蛋白一样,存在一个保守的RNA结合功能域,该功能域包含一个锌指基序(Motif)。系统发育树结果显示, Mananos3与鲤(Cyprinus carpio)的Nanos3最为相近。半定量和定量PCR结果表明, mananos3具有较高的母源表达,并在胚胎发育早期高量表达,而在1000细胞期之后表达量逐渐降低。在成体组织中, mananos3仅在卵巢中检测到表达。mananos3和斑马鱼(Danio rerio) nanos3 (zfnanos3)的3′UTR均可以介导绿色荧光蛋白特异标记团头鲂和斑马鱼胚胎发育早期的PGCs,但是mananos3的3′UTR能够更特异地标记团头鲂的PGCs。通过比对mananos3和zfnanos3的3′UTR发现, mananos3的3′UTR中有一个非经典的miR430识别位点(GCACTA)。通过对该位点的突变研究证实其有利于nanos3在非PGCs组织中的降解。综上所述,团头鲂mananos3的3′UTR序列中的非经典miR430识别位点(GCACTA)可能与介导报告基因在PGCs中特异表达相关。

关键词： Nanos3 团头鲂原始生殖细胞斑马鱼

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煤矿主斜井带式输送机设计优化

石化技术 2019年第8期26卷 333-334页

作者：王厚鹏山西运裕煤业有限责任公司

主斜井带式输送机是煤矿生产运输系统中的一个重要设备,其运行质量及效率直接影响到煤矿企业生产的安全可靠性及经济效益,加强主斜井带式输送机优化设计意义重大。基于此,对煤矿主斜井带式输送机设计优化进行了探究,旨在提升主斜井带式... 详细信息

主斜井带式输送机是煤矿生产运输系统中的一个重要设备,其运行质量及效率直接影响到煤矿企业生产的安全可靠性及经济效益,加强主斜井带式输送机优化设计意义重大。基于此,对煤矿主斜井带式输送机设计优化进行了探究,旨在提升主斜井带式输送机设计应用水平,促进煤矿行业更好发展。

关键词：煤矿生产主斜井带式输送机设计

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矿山机电设备安装及其质量控制技术措施

中国石油和化工标准与质量 2019年第17期39卷 113-114页

作者：王厚鹏山西运裕煤业有限责任公司山西阳泉045000

随着煤矿现代化的进行,越来越多的机电设备被用到煤矿生产中。经过多年的发展,煤矿机电设备越来越先进,这也导致了矿山机电设备的安装也发生了巨大的变化。机电设备的安装施工对于机电设备的使用产生了不可忽视的影响,因此保证矿山机电... 详细信息

随着煤矿现代化的进行,越来越多的机电设备被用到煤矿生产中。经过多年的发展,煤矿机电设备越来越先进,这也导致了矿山机电设备的安装也发生了巨大的变化。机电设备的安装施工对于机电设备的使用产生了不可忽视的影响,因此保证矿山机电设备的安装质量对于煤矿生产的高产高效具有重要意义。本文通过分析煤矿不同系统机电设备安装的特点,给出了一些提高安装质量的措施,可以为相关的技术人员提供参考。

关键词：煤矿开采机电设备安装质量措施

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一起计量回路异常现象相量分析

能源技术与管理 2005年第2期30卷 73-74页

作者：孔令胜王厚鹏徐州土宅城电力有限责任公司江苏徐州221142

　结合现场出现的一起计量回路的异常现象,利用相量分析的原理,找出问题的根本原因,为现场工作人员提供一种解决同类问题的基本方法。

关键词：相量分析异常现象计量回路工作人员现场

多目标跟踪的飞行器集群协同实时任务分配策略

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导弹与航天运载技术 2020年第3期 32-37页

作者：王厚鹏曹素芝闫蕾吴少俊中国科学院空间应用工程与技术中心北京100094 中国科学院大学北京100049

针对跟踪过程中,多动态目标优先级变化引起的飞行器任务实时重分配问题,提出了一种飞行器集群智能自组织控制方案。该方案基于飞行器集群组网和集群协同计算技术,实现分布式集群实时控制与协同任务分配,以保证对多目标的实时跟踪。针对... 详细信息

针对跟踪过程中,多动态目标优先级变化引起的飞行器任务实时重分配问题,提出了一种飞行器集群智能自组织控制方案。该方案基于飞行器集群组网和集群协同计算技术,实现分布式集群实时控制与协同任务分配,以保证对多目标的实时跟踪。针对跟踪目标优先级变化的场景,提出了具有双向选择机制的合同网改进算法,能够解决突发情况导致的飞行器集群任务实时分配问题。最后进行仿真验证,实验结果表明,该方案能够提高飞行器集群的协商效率,减少通信频率,提升任务分配的时效性。

关键词：合同网算法飞行器集群任务分配动态目标

斑马鱼ca15b的克隆及在原始生殖细胞中的特异表达

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水生生物学报 2014年第1期38卷 142-149页

作者：杨明宇王厚鹏朱作言孙永华中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072 中国科学院大学北京100049

高保真PCR克隆获得了ca15b基因的全长,利用胚胎整体原位杂交等技术研究了ca15b基因在斑马鱼早期发育过程中的动态表达。结果发现,ca15b在斑马鱼早期发育过程中存在显著的原始生殖细胞(Primordial germ cell,PGC)特异表达模式。ca15b是... 详细信息

高保真PCR克隆获得了ca15b基因的全长,利用胚胎整体原位杂交等技术研究了ca15b基因在斑马鱼早期发育过程中的动态表达。结果发现,ca15b在斑马鱼早期发育过程中存在显著的原始生殖细胞(Primordial germ cell,PGC)特异表达模式。ca15b是一个母源性表达的基因:在分裂期的胚胎中,其mRNA集中分布于位于分裂沟的生殖质(Germ plasm);从囊胚期开始,可以观察到其在PGC中的特异表达;在原肠胚中,其mRNA在体细胞中急剧降解,仅特异表达于PGC,这一表达特征一直持续到受精后1d的胚胎。将体外合成的包含5′UTR和3′UTR的ca15b全长mRNA注射到斑马鱼胚胎后,仅能增强原肠期之前胚胎中ca15b的整体杂交信号;在原肠胚期之后,注射的mRNA在体细胞中快速降解。这提示在ca15b mRNA上可能存在某种转录后调控其在早期胚胎体细胞中降解而在PGC中稳定存在的机制。

关键词：斑马鱼原始生殖细胞表达模式 ca15b

两种密码子优化的Cas9编码基因在斑马鱼胚胎中基因敲除效率的比较

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遗传 2016年第2期38卷 144-154,181-184页

作者：张峰华王厚鹏黄思雨熊凤朱作言孙永华中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072

为在斑马鱼中获得特异且高效的基因敲除,多个实验室独立人工合成了序列彼此不一的Cas9 c DNA序列,并克隆入不同的体外转录载体。本文选取两种斑马鱼密码子优化的Cas9编码序列(z Cas9_bz和z Cas9_wc),对斑马鱼胚胎中的7个基因(外源egfp... 详细信息

为在斑马鱼中获得特异且高效的基因敲除,多个实验室独立人工合成了序列彼此不一的Cas9 c DNA序列,并克隆入不同的体外转录载体。本文选取两种斑马鱼密码子优化的Cas9编码序列(z Cas9_bz和z Cas9_wc),对斑马鱼胚胎中的7个基因(外源egfp及内源chd、hbegfa、th、eef1a1b、tyr、tcf7l1a)分别进行敲除,通过PCR产物测序、克隆测序和表型分析比较了两种Cas9的敲除效率。结果发现,z Cas9_wc在各种情况下都显现出较高的敲除效率,而z Cas9_bz的效率相对较低。

关键词： CRISPR/Cas9 斑马鱼基因敲除突变效率