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实时荧光PCR法快速检测乙型肝炎病毒基因YMDD突变株

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中国生物制品学杂志 2008年第4期21卷 333-335,342页

作者：陈建王缦陈华王卓莹华兵华东理工大学生物化学与分子生物学系上海200237 上海科华生物工程股份有限公司上海200233

目的建立一种敏感、特异、快速的实时荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒基因YMDD突变株的方法,为临床治疗提供指导。方法设计引物和TaqMan-MGB探针,利用TaqMan-MGB探针技术,建立实时荧光定量PCR法。检测临床HBV-YMDD变异标本36份和野生型HBV... 详细信息

目的建立一种敏感、特异、快速的实时荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒基因YMDD突变株的方法,为临床治疗提供指导。方法设计引物和TaqMan-MGB探针,利用TaqMan-MGB探针技术,建立实时荧光定量PCR法。检测临床HBV-YMDD变异标本36份和野生型HBV标本20份,并将其YMDD变异结果与DNA测序结果进行比较。结果该方法检测灵敏度为101拷贝/μl;特异性为100%;最低检测限度为101DNA拷贝/30μl反应体系;实时荧光PCR方法测得YMDD野生株20份,变异株36份,与DNA测序结果完全一致,符合率为100%。结论应用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测YMDD变异株基因,具有灵敏、特异和精确等优点,对临床监测拉米夫定耐药具有重要意义。

关键词：乙型肝炎病毒实时荧光PCR TaqMan-MGB探针 YMDD变异株

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大学生专业课学习动机及策略之比较实证研究

心理学进展 2017年第12期7卷 1462-1472页

作者：童馥卉郭海涛王卓莹闵月美国德克萨斯A&M大学教育与人文发展学院教育心理学系美国大学城深圳大学传播学院传媒与文化发展研究中心广东深圳

根据Pintrich的学习动机策略调查问卷并结合当代大学生专业课程学习的实际情况编译出《中国大学生学习动机及策略问卷》,选取505名本科生为调查对象,采取单因素方差分析方法,在信度和效度验证的基础上,重点探究不同性别、专业的学生在... 详细信息

根据Pintrich的学习动机策略调查问卷并结合当代大学生专业课程学习的实际情况编译出《中国大学生学习动机及策略问卷》,选取505名本科生为调查对象,采取单因素方差分析方法,在信度和效度验证的基础上,重点探究不同性别、专业的学生在专业课学习动机和策略上的差异。研究结果显示:1) 女大学生比男大学生更善于合理安排学习时间以及制定高效科学的学习计划;2) 文科生考试焦虑感较低且更加重视课堂任务,而理科生在面对课程难点时压力较大,对时间的管理能力与文科生相比也略有不足。此项研究有助于有针对性地对学生进行学业指导,激发他们的学习动机,引导他们增强信心,创造多元学习方法;同时对于提升学生学习专业课的兴趣也有一定的启示意义。

关键词：大学生专业课学习动机学习策略方差分析

垫枕练功配合自拟通络止痛散外敷治疗压缩性胸腰椎骨折的疗效观察

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中国中医药科技 2019年第5期26卷 802-803页

作者：黄小芬徐晓琴邹雪飞王卓莹龙游县人民医院骨科

随着建筑和交通业的快速发展,胸腰椎骨折的发生率日趋增高.胸腰椎骨折占脊柱骨折的 80. 0%,多数为单纯性、稳定性骨折,无脊髓神经损伤[ 1],临床一般采用非手术方法治疗,尤其是老年患者.非手术治疗具有从操作简便、安全可靠、利于脊柱恢... 详细信息

随着建筑和交通业的快速发展,胸腰椎骨折的发生率日趋增高.胸腰椎骨折占脊柱骨折的 80. 0%,多数为单纯性、稳定性骨折,无脊髓神经损伤[ 1],临床一般采用非手术方法治疗,尤其是老年患者.非手术治疗具有从操作简便、安全可靠、利于脊柱恢复等优点[ 2].其中垫枕疗法为中医经典治疗方法,目前已经趋向专业化、系统化[3].功能锻炼具有复位和矫正畸形的作用,与垫枕结合应用,可预防长期卧床引发的并发症.中药外敷可有效减轻胸腰椎压缩性骨折患者的疼痛程度,使患者对垫枕和功能锻炼的依从性增高.本文笔者观察了垫枕练功配合中药通络止痛散外敷对脊柱骨折患者疼痛及康复的影响,现报道如下.

关键词：胸腰椎压缩性胸腰椎骨折垫枕练功外敷治疗止痛散疗效观察通络自拟

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光动力治疗骨与软组织肉瘤的疗效及其机制

中华骨科杂志 2013年第5期33卷 584-592页

作者：曾辉周承豪孙梦熊王卓莹尹飞傅泽泽华莹奇蔡郑东同济大学附属第十人民医院骨科上海200072

目的探讨血卟啉单甲醚介导光动力疗法（hematopotphyrin monomethyl ether induced photodynamic therapy，HMME-PDT）的抗肉瘤效应及其机制。方法流式细胞仪检测骨肉瘤细胞和成肌细胞的胞内HMME摄取，MTT法检测骨与软组织肉瘤细胞存活... 详细信息

目的探讨血卟啉单甲醚介导光动力疗法（hematopotphyrin monomethyl ether induced photodynamic therapy，HMME-PDT）的抗肉瘤效应及其机制。方法流式细胞仪检测骨肉瘤细胞和成肌细胞的胞内HMME摄取，MTT法检测骨与软组织肉瘤细胞存活率，流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡率，Hoechst33342染色法观察细胞凋亡，不可逆caspase通路抑制刹及坏死抑制剂检测PDT介导的细胞死亡形式，蛋白免疫印迹和免疫组化检测肿瘤细胞中caspase-l、-3、-6、-9、PARP蛋白相对表达量，测定瘤体体积及瘤重评估PDT的抗肿瘤效应，HE染色检测肿瘤组织形态学改变。结果光敏剂HMME选择性的聚集于骨肉瘤细胞中，而正常细胞摄取较少，且骨肉瘤细胞的摄取呈孵育时间及浓度依赖性。HMME-PDT能显著杀伤骨与软组织肉瘤细胞。HMME－PDT可明显诱导贴壁及悬浮培养骨肉瘤细胞发生凋亡。Hoechst33342染色可见典型的捌亡改变。凋亡是HMME-PDT介导的细胞死亡的主要形式，且与easpase依赖的凋亡通路密切相关。HMME－PDT可明显上调easpase-1、-3、-6、-9、PARP蛋白表达寄HMME-PDT组肿瘤体积及瘤重均较空白组明显减小，且肿瘤区域出现广泛坏死。结论HMME-PDT能有效地抑制肉瘤生长，其抗肉瘤效应与caspase依赖的凋亡通路密切相关。

关键词：血卟啉光照疗法血卟啉类骨肉瘤肉瘤

四次跨膜蛋白CD151通过调节AKT通路促进骨肉瘤肺转移

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四次跨膜蛋白CD151通过调节AKT通路促进骨肉瘤肺转移

第八届中国肿瘤学术大会暨第十三届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：王卓莹汪红胜尹飞华莹奇蔡郑东上海市第一人民医院骨科

＜正＞目的研究四次跨膜蛋白CD151对骨肉瘤转移的作用及其相关分子机制,探讨其在骨肉瘤转移靶向治疗中的价值。方法 western blot比较高、低转移性骨肉瘤细胞中CD151的表达差异,并用流式细胞仪检测高、低转移性细胞膜CD151的表达差异,用... 详细信息

＜正＞目的研究四次跨膜蛋白CD151对骨肉瘤转移的作用及其相关分子机制,探讨其在骨肉瘤转移靶向治疗中的价值。方法 western blot比较高、低转移性骨肉瘤细胞中CD151的表达差异,并用流式细胞仪检测高、低转移性细胞膜CD151的表达差异,用PLKO.1干扰系统对高转移细胞构建CD151沉默的稳定细胞株,检测抑制CD151对细胞黏附、迁移和侵袭性的影响,并利用体内模型研究CD151沉默对骨肉瘤肺转移的影响。结果高转移性骨肉瘤细胞中CD151的表达量高于低转移骨肉瘤细胞。shRNA干扰高转移骨肉瘤细胞CD151表达,导致细胞的黏附率、迁移率和侵袭性都明显减弱。体内模型中,CD151沉默的高转移骨肉瘤细胞肺转移灶明显减少。对于CD151调控骨肉瘤转移的机制,在细胞内可能与PI3K-Akt细胞信号通路有关,在细胞外可能与细胞黏附有关。结论 CD151在骨肉瘤中与骨肉瘤的转移有关,可能为骨肉瘤治疗的新靶点。

关键词：骨肉瘤肺转移跨膜蛋白信号通路

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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骨与软组织肉瘤PDX模型的建立及应用研究

中华骨科杂志 2017年第6期37卷 340-346页

作者：孙梦熊尹飞孙伟沈嘉康马小军傅泽泽周承豪王卓莹华莹奇蔡郑东上海交通大学附属第一人民医院骨科上海市骨肿瘤研究所200080

目的建立恶性骨与软组织肉瘤患者来源移植瘤模型（patient-derived xenograft，PDX）模型并统计其建模的成功率，观察PDX化疗反应与临床的符合率，以为筛选敏感二、三线药物提供理论基础。方法收集自2015年1月至2016年5月共31例骨与软... 详细信息

目的建立恶性骨与软组织肉瘤患者来源移植瘤模型（patient-derived xenograft，PDX）模型并统计其建模的成功率，观察PDX化疗反应与临床的符合率，以为筛选敏感二、三线药物提供理论基础。方法收集自2015年1月至2016年5月共31例骨与软组织肿瘤患者，男12例，女19例；年龄为9~67岁，平均（28.5±19.9）岁。手术当天取材，取患者手术中新鲜的活性组织，无菌条件下转移到实验室后，切至约2 mm3大小，接种于采用穿刺套管针接种于T淋巴细胞缺陷小鼠（BAL B/C裸鼠）或T、B淋巴细胞双缺小鼠（SCID小鼠）背部皮下，待小鼠背部肿瘤长至1~2 cm直径时取出肿瘤组织并传代，同时保存P0组织；若小鼠背部肿瘤3个月无生长则视为建模失败；分别接种化疗前和化疗后的病例，比较化疗对PDX建模成功率的影响，同时观察不同病理类型病例的建模成功率，观察PDX建模成功率与患者预后的关系；药物试验：将成瘤的PDX小鼠分组，每组3只，不同组给予不同的化疗药物，分别按照化疗药物特性给药，通过T/C计算抑制率，比较得出PDX模型敏感药物及不敏感药物，并与对应的患者用药情况进行比较。结果本组共接种骨与软组织肉瘤31例，总体建模成功率45.2%。按病理亚型分别为：骨肉瘤24例，建模成功率37%；平滑肌肉瘤2例，成功率100%；软骨肉瘤2例，成功率50%；尤文肉瘤1例成功；纤维肉瘤1例及滑膜肉瘤1例均未成功。化疗后建模成功率33%（4/12），未化疗建模成功率53%（10/19）。PDX建模较容易的患者往往提示预后不佳，PDX模型对化疗的敏感性与临床实际疗效具有较好的相符合性。结论骨与软组织肉瘤的PDX成功率在30%~40%，与肿瘤病理类型、化疗有关，PDX与临床病例具有较好的相似性，有望用于患者个体化药物筛选。

关键词：骨肉瘤抗肿瘤联合化疗方案分子靶向治疗

HMME介导的光动力疗法对骨肉瘤细胞的杀伤效应及机制研究

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中国骨与关节杂志 2012年第5期1卷 494-500页

作者：曾辉孙梦熊王卓莹廖宇昕付东吴非华莹奇蔡郑东同济大学附属第十人民医院骨科上海200072

目的探讨血卟啉单甲醚介导的光动力疗法(HMME-PDT)对骨肉瘤LM-8细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法将LM-8细胞与不同浓度的HMME(10、20、30μg/m1)共同孵育,4h后,给予不同能量密度的激光(3、6、9J/cm^2)照射,同时设空白组(无光敏剂也... 详细信息

目的探讨血卟啉单甲醚介导的光动力疗法(HMME-PDT)对骨肉瘤LM-8细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法将LM-8细胞与不同浓度的HMME(10、20、30μg/m1)共同孵育,4h后,给予不同能量密度的激光(3、6、9J/cm^2)照射,同时设空白组(无光敏剂也无光照)、暗毒组(无光照但加入光敏剂)、激光组(不加光敏剂但给予光照)。MTT法检测细胞存活率,采用AnnexinV-FITC/PI染色的流式细胞分析法检测LM-8细胞凋亡和周期情况,Hoechst33342染色法观察细胞凋亡,实时定量PCR(QRT-PCR)分别检测Caspase-3、Bcl-x、p53、RelA mRNA表达水平,免疫印迹(Western blotting)分别检测Caspase-3、Bcl-x、p53、RelA蛋白的相对表达量。结果 HMME-PDT能显著抑制骨肉瘤LM-8细胞增殖,且杀伤效应随着HMME浓度及能量密度的增高而增强。然而单独光照或单独给予光敏剂孵育,对骨肉瘤LM-8细胞均无杀伤作用。流式细胞术检测发现凋亡率显著增高,10μg/ml HMME组为(12.3±2.82)%,20μg/ml HMME组为(20.67±5.58)%,30μg/ml HMME组为(42.53±4.64)%,凋亡率与空白组比较,结果分别为(t=-2.889,P=0.045)、(t=-4.418,P=0.014)、(t=-5.780,P=0.04)。周期结果显示:G_0/G_1期细胞明显增高、S期细胞明显降低,30μg/ml组G_0/G_1期为(50.09±3.15)%、S期为(28.17±1.10)%,与空白对照组比较,结果分别为(t=-6.081,P=0.004)、(t=5.852,P=0.004)。HMME-PDT处理LM-8细胞后经Hoechst33342染色后呈现出典型的凋亡改变(如:核固缩、细胞变网等)。QRT-PCR和Western bloting结果显示:HMME-PDT可显著上调Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量且表达量随着HMME浓度增高而增高。而HMME-PDT可明显下调Bcl-x、p53、RelA mRNA和蛋白相对表达量且表达量随着HMME浓度增高而降低。结论在体外HMME-PDT对骨肉瘤LM-8细胞有显著的杀伤效应,其杀伤效应与Caspase-3、Bcl-x、p53和RelA密切相关。

关键词：光动力疗法骨肉瘤 HMME 凋亡基因

光敏剂HMME对人骨肉瘤细胞U-2OS的光动力作用及其作用机制的初步研究

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现代生物医学进展 2013年第14期13卷 2622-2624,2673页

作者：王卓莹曾辉孙梦熊蔡郑东廖宇昕左冬青付东华莹奇上海市第十人民医院骨科同济大学骨肿瘤研究所上海200072

目的:探讨光敏剂(HMME)介导的光动力疗法对人骨肉瘤细胞U-2OS的杀伤效应及机制研究。方法:使用不同浓度(0、10、20、30、40μ***-1)的光敏剂,采用不同光照能量(0、3、6、9 ***-2)照射人骨肉瘤细胞,与空白对照组、药物对照组(无光照但加... 详细信息

目的:探讨光敏剂(HMME)介导的光动力疗法对人骨肉瘤细胞U-2OS的杀伤效应及机制研究。方法:使用不同浓度(0、10、20、30、40μ***-1)的光敏剂,采用不同光照能量(0、3、6、9 ***-2)照射人骨肉瘤细胞,与空白对照组、药物对照组(无光照但加光敏剂)和光照对照组(不加光敏剂但加光照)进行比较,MTT法检测细胞的存活率,选择半数有效量药物浓度和光照能量,作为实验组。以空白对照组为对照,采用Hoechst33342染色法,观察细胞凋亡情况。用western blot方法检测细胞凋亡蛋白caspase-7、caspase-9和PARP-1。结果:MTT结果显示,空白对照组、药物对照组和光照对照组对细胞存活率在96.7%和100%之间,药物的半数有效量为40.1μ***-(16 ***-2)和25.0μ***-(19 ***-2)。Hoechst33342染色法观察到实验组细胞明显凋亡。westen blotting检测结果,实验组与对照组相比,caspase-7、caspase-9和PARP-1表达明显增高。结论:HMME-PDT对人骨肉瘤细胞U-2OS有显著的杀伤效应,且呈光敏剂浓度和光照强度依赖性,其杀伤效应与caspase途径相关。

关键词：光动力疗法光敏剂HMME 骨肉瘤细胞凋亡

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骨肿瘤专病数据库的构建与应用

中华骨科杂志 2023年第12期43卷 821-830页

作者：曾柯吕毓汪红胜孙梦熊左冬青王崇任马小军沈嘉康昝鹏飞王卓莹孙伟华莹奇蔡郑东上海市第一人民医院骨肿瘤科上海200080

目的探讨多中心骨肿瘤专病数据库的构建与应用方法。方法经由上海市第一人民医院、海军军医大学第二附属医院、复旦大学附属中山医院、上海市第六人民医院、上海交通大学医学院附属瑞金医院、复旦大学附属肿瘤医院和上海交通大学医学院... 详细信息

目的探讨多中心骨肿瘤专病数据库的构建与应用方法。方法经由上海市第一人民医院、海军军医大学第二附属医院、复旦大学附属中山医院、上海市第六人民医院、上海交通大学医学院附属瑞金医院、复旦大学附属肿瘤医院和上海交通大学医学院附属第九人民医院组成的多中心专家团队研究讨论,建立骨肿瘤标准数据集。按标准字段自动采集临床数据并标准化处理。搭建数据库并开发用户界面,在保障数据安全存储的同时,提供原始数据导出,统计分析可视化和临床队列研究项目建立与研究等服务。通过与申康大数据平台对接,完成骨肿瘤数据库的共享工作,实现多中心数据对接。结果建立了包含603个字段的骨肿瘤标准数据集并出版、建立了骨肿瘤数据自动采集系统,包括完整的数据收集、数据整理及可视化功能。数据类别包括患者的电子病案信息,实验室血常规、生化、肿瘤标志物等信息,影像学信息,手术信息,病理信息及放化疗记录等模块。患者的姓名、身份证号等个人信息经脱敏加密后,可导出供进一步研究使用。自2015至2023年,数据库采集的骨肿瘤病例总数为10789例;2015年至2019年,回顾性分析收治的骨肉瘤队列112例,并绘制了患者的五年生存曲线,五年生存率为68%。结论通过建立区域级的骨肿瘤专病大数据网络和数据共享平台,及建立数据共享机制和标准,包括数据标准、安全标准、质量评价标准等,可为我国骨肿瘤数据库的建设提供参考及高效的新方案,为骨肿瘤规范化诊疗及新技术提供研发平台。

关键词：骨肿瘤数据库多中心研究