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双向凝胶电泳中三种蛋白质检测方法的比较

中国生物化学与分子生物学报 2004年第4期20卷 551-556页

作者：马增春高月吕俊萍王升启军事医学科学院放射医学研究所北京100850

高通量双向电泳是蛋白质组学的核心 ,双向电泳凝胶上蛋白质点的检测方法应具有灵敏度高、线性范围宽和兼容质谱鉴定等优点 .采用差异凝胶电泳 (differencegelelectrophoresis ,DIGE)技术以Cy3(1 (5 carboxypentyl) 1′ propylindocar... 详细信息

高通量双向电泳是蛋白质组学的核心 ,双向电泳凝胶上蛋白质点的检测方法应具有灵敏度高、线性范围宽和兼容质谱鉴定等优点 .采用差异凝胶电泳 (differencegelelectrophoresis ,DIGE)技术以Cy3(1 (5 carboxypentyl) 1′ propylindocarbocyaninehalideN hydroxysuccinimidylester)和Cy5 (1 (5 carboxypentyl) 1′ methylindodicarbocyaninehalideN hydroxysuccinimidylester)荧光分别标记正常和TNF α处理细胞的蛋白质 ,用Cy2 (3 (4 carboxymethyl)phenylmethyl) 3′ ethyloxacarbocyaninehalideN hydroxysuccinimidylester)荧光标记正常和TNF α处理细胞蛋白质的等量混合样品作为内标 ,混合 3种荧光标记的蛋白质后 ,在同一等电聚焦胶条进行聚焦 ,然后在聚丙烯酰胺凝胶上进行第二向电泳 ,用 3种波长的激光激发扫描得到凝胶图象 ,DIGE中多个样品在同一条件下电泳 ,因而匹配率高 ,且引入内标使蛋白质点的检测与定量更为准确 .DIGE技术与质谱相结合 ,实现了高通量和相对准确定量 .与硝酸银和考马斯亮蓝染色结果相比较 ,DIGE技术具有灵敏度高。

关键词：荧光标记双向电泳图象分析蛋白质组学

乙肝病毒S基因区反义寡核苷酸对表面抗原表达的抑制作用

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临床肝胆病杂志 1998年第1期14卷 24-26页

作者：钟森王升启张定风四川泸州医学院附属医院北京军事医学科学院重庆医科大学

为了研究硫代反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）的抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用，以２．２．１５细胞为靶细胞，在ＨＢＶＳ基因起始区设计了１段ＡＳＯＮ，用酶联免疫吸附法检测了作用细胞的ＨＢＶ（ＨＢｓＡｅ）的分泌情况。结果显示，ＡＳＯ... 详细信息

为了研究硫代反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）的抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用，以２．２．１５细胞为靶细胞，在ＨＢＶＳ基因起始区设计了１段ＡＳＯＮ，用酶联免疫吸附法检测了作用细胞的ＨＢＶ（ＨＢｓＡｅ）的分泌情况。结果显示，ＡＳＯＮ在每天给予２ｕｍｏｌ／Ｌ的浓度情况下能抑制８８％的ＨＢｓＡｇ产生，无关序列的寡核苷酸无明显抑制作用，同时未见ＡＳＯＮ的细胞毒作用。提示ＡＳＯＮ可能成为抗ＨＢＶ治疗的新手段。

关键词：硫代反义寡核苷酸乙型肝炎病毒抗原

SELECTION AND THEIR ANTITUMOR ACTIVITY OF ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES TARGETING MESSENGER RNA OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR RECEPTOR 2

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Chinese Journal of Cancer Research 2005年第3期17卷 161-170页

作者：郑素军林汝仙夏云伯晓晨任红钟森王升启 Beijing Institute of Radiation Medicine Institute of Viral Hepatitis Chongqing University of Medical Sciences

Objective： To select the antisense oligonucleotides （asONs） which hybridize with the mRNA of vascular endothelial growth factor receptor2 （VEGFR2, also named as kinase insert domain-containing receptor：KDR） in an effective and specific way, and to investigate their antitumor activity in MCF-7 cells. Methods： The effective antisense oligonucleotides were chosen by computer prediction combined with oligonucleotide microarrays. The inhibition effect on MCF-7 cells proliferation was measured by MTT; and VEGFR2 expression was surveyed by Western-blotting and RT- PCR. Results： Using predicting secondary structure of VEGFR2 mRNA with RNA folding program, computer prediction designed 30 antisense oligonucleotide probes that were directed to local loose regions of RNA structure. In 30 probes, 4（4/30, 13.33%） antisense oligonucleotides showed strong hybridization intensities in oligonucleotide microarrays test and were selected. All these antisense oligonucleotides targeting 4 different sites of VEGFR2 mRNA lowered the level of VEGFR2 mRNA and protein present in MCF-7 cells. Proliferation of MCF-7 cells was reduced by 4 antisense oligonucleotides, respectively, in which asON1 was the most effective, with the inhibitory rates being 53.06% at 0.8 ***/L. Conclusion： Combination of computer prediction with oligonucleotide microarrays is an effective way in selecting optimal antisense oligonucleotides. The antisense oligonucleotides showed good correlation between their antitumor activity and the hybridization intensities. The antisense oligonucleotides targeting VEGFR2 mRNA demonstrated prominent antitumor role in vitro.

关键词： Target selection Computer prediction Oligonucleotide microarrays Antisense oligonucleotide VEGFR2/KDR

Plk1基因为靶的反义寡核苷酸对HepG2肝癌细胞的体内外抗肿瘤作用

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癌症 2001年第11期20卷 1233-1236页

作者：林莉王升启管伟杨秉呼胡小电军事医学科学院附属医院肿瘤一科北京100039 军事医学科学院放射医学研究所北京100850

目的:以Plk1基因为靶筛选抗肿瘤药物。方法:根据Plk1mRNA的二级结构设计8条反义寡核苷酸药物,以脂质体介导进行转染,MTT染色计算细胞生长抑制率,从中筛选出一条序列并对其进行优化。最后以最佳序列9号进行体外作用持续时间及裸鼠移植瘤... 详细信息

目的:以Plk1基因为靶筛选抗肿瘤药物。方法:根据Plk1mRNA的二级结构设计8条反义寡核苷酸药物,以脂质体介导进行转染,MTT染色计算细胞生长抑制率,从中筛选出一条序列并对其进行优化。最后以最佳序列9号进行体外作用持续时间及裸鼠移植瘤细胞生长抑制率分析。结果:针对5'编码区的5号序列在0.2μmol/L、0.4μmol/L和0.8μmol/L时抑制率分别是59.1%、75.5%和90.7%。它抑制细胞增殖作用最强。5号序列的5'端向内移动3个碱基形成的9号序列的抑制率高于其它3条序列,9号的IC50是0.081μmol/L。终浓度为0.2μmol/L的9号药物经脂质体介导转染给药1次后,抑制活性逐渐增加,第4天抑制率达到93.0%的峰值,然后缓慢下降,到第6天抑制率为78.3%。荷瘤裸鼠每日腹腔注射9号药物(25mg/kg)用药28天,处死时对照组的瘤重为(1.536±0.196)g,用药组瘤重为(0.485±0.378)g,方差分析表明用药组与对照组相比有显著性差异(t=5.59P<0.01),用药组抑瘤率达68.42%。结论:靶向Plk1的反义治疗能够抑制肿瘤的生长,对正常细胞无明显毒性。Plk1可作为肿瘤治疗的新靶点。

关键词： Plk1 反义寡核苷酸 HepG2 肝癌抗肿瘤

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利用基因芯片技术检测P53基因突变

生物工程进展 2000年第4期20卷 40-43页

作者：吴水清邹宗亮王升启深圳益生堂生物芯片有限公司深圳518000 军事医学科学院放射医学研究所北京100850

基因芯片技术是后基因组时代基因功能分析的最重要技术之一。利用基因芯片技术检测P53基因突变 ,具有快速、准确、高通量和自动化的特点。本文阐述了基因芯片技术的基本原理及其检测P53基因突变的方法。

关键词：基因芯片 P53基因突变肿瘤诊断

反义寡核苷酸pH敏前体脂质体的制备及性质分析

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生物化学与生物物理进展 2000年第2期27卷 178-181页

作者：王弘王升启王志清朱宝珍军事医学科学院放射医学研究所北京100850

为了提高反义寡核苷酸的稳定性和生物利用度及避免在溶酶体内降解 ,采用旋转蒸发薄膜水化、超声挤压、冻干三步法完成 pH敏前体脂质体的制备 ,研究了体外释药规律 ;以反义寡核苷酸为实验对象 ,测定了包封率 .制得的pH敏前体脂质体复... 详细信息

为了提高反义寡核苷酸的稳定性和生物利用度及避免在溶酶体内降解 ,采用旋转蒸发薄膜水化、超声挤压、冻干三步法完成 pH敏前体脂质体的制备 ,研究了体外释药规律 ;以反义寡核苷酸为实验对象 ,测定了包封率 .制得的pH敏前体脂质体复水后形成的 pH敏脂质体形态圆整 ,粒径 12 3～ 389 9nm范围内 ,平均粒径为2 2 7nm ;三批 pH敏脂质体的平均包封率为 6 8 3% ;体外释药方程为Q =1 8382 - 2 5 186× 10 -2 T (r =0 9913) ;结果说明制备的 pH敏前体脂质体水合形成的 pH敏脂质体粒度适宜 ,可用于反义寡核苷酸的包封 .

关键词： pH敏前体脂质体反义寡核苷酸制备包封性质

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陈旧骸骨DNA身份鉴定的法医学进展

法医学杂志 2023年第5期39卷 478-486页

作者：陈璐周喆王升启军事医学研究院生物信息中心北京100850

骨骼和牙齿是重要的生物样本,由于结构特殊,抗降解能力强,是自然条件下保留DNA理想的生物检材。在历史人物鉴定案例中,陈旧的骨骼和牙齿样本常常是唯一的生物检材,但其DNA呈微量、毁损和不同程度降解状态,需要经过特殊的实验处理以实现... 详细信息

骨骼和牙齿是重要的生物样本,由于结构特殊,抗降解能力强,是自然条件下保留DNA理想的生物检材。在历史人物鉴定案例中,陈旧的骨骼和牙齿样本常常是唯一的生物检材,但其DNA呈微量、毁损和不同程度降解状态,需要经过特殊的实验处理以实现身份鉴定。本文综合近年来相关研究报道,从采集检材、DNA提取、DNA富集、检测分析方案等方面进行综述,以期促进陈旧骨骼和牙齿检测体系的进一步发展和完善。

关键词：法医遗传学身份鉴定陈旧骸骨牙齿降解高通量测序综述

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RNA干扰作用(RNAi)研究进展

中国生物化学与分子生物学报 2002年第5期18卷 525-528页

作者：陈忠斌于乐成王升启军事医学科学院放射医学研究所北京100850

RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 .RNAi主要通过dsRNA被核酸酶切割成 2 1～ 2 5nt的干扰性小RNA即siRNA ,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现 .... 详细信息

RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 .RNAi主要通过dsRNA被核酸酶切割成 2 1～ 2 5nt的干扰性小RNA即siRNA ,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现 .RNAi要有多种蛋白因子以及ATP参与 ,而且具有生物催化反应特征 .RNAi是新发现的一种通过dsRNA介导的特异性高效抑制基因表达途径。

关键词： RNA干扰作用 RNAi 研究进展基因转录后沉默干扰性小RNA 沉默复合体反义药物

肿瘤相关寡核苷酸芯片筛选乳腺癌表达基因的研究

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中华检验医学杂志 2004年第9期27卷 594-595页

作者：徐笑红孟旭莉王升启浙江省肿瘤医院杭州310022 军事医学科学院放射医学研究所

乳腺癌的发生、发展和治疗具有很强的个体特异性.寡核苷酸芯片是一种高通量基因检测技术[1].目前,该项技术已被用于炎症[2]和细胞分化[3]相关基因等研究领域.本研究制备了288条人类肿瘤相关基因的寡核苷酸芯片,并对乳腺癌组织和正常乳... 详细信息

乳腺癌的发生、发展和治疗具有很强的个体特异性.寡核苷酸芯片是一种高通量基因检测技术[1].目前,该项技术已被用于炎症[2]和细胞分化[3]相关基因等研究领域.本研究制备了288条人类肿瘤相关基因的寡核苷酸芯片,并对乳腺癌组织和正常乳腺黏膜组织所表达的基因进行筛选,同时进行差异表达基因生物信息学分析研究,以揭示这些差异基因与乳腺癌发生、分化、浸润及淋巴结转移之间的内在联系。

关键词：乳腺癌组织人类肿瘤寡核苷酸芯片治疗癌发生正常炎症表达基因高通量筛选