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Sam68对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

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Sam68对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

作者：王力扬南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景和目的结直肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一。近年来,由于我国人民生活水平的改善和饮食结构的调整,结直肠癌的死亡率在我国所有癌症中高居第三,且其发病年龄有逐渐年轻化的趋势。结直肠癌的发生发展是一个多步骤、多阶段... 详细信息

研究背景和目的结直肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一。近年来,由于我国人民生活水平的改善和饮食结构的调整,结直肠癌的死亡率在我国所有癌症中高居第三,且其发病年龄有逐渐年轻化的趋势。结直肠癌的发生发展是一个多步骤、多阶段的过程,而这一过程中仍有许多未知的领域需要我们去探究。尽管目前在结直肠癌的诊断和治疗上已经取得了长足的进步,但是发生了远处转移的结直肠癌患者预后仍然很差,临床上多数结直肠癌患者在进行根治性手术前己出现微转移,并且是结直肠癌术后转移和复发的直接原因,这也促使我们去进一步探究结直肠癌的发生发展过程和其生物学特性以寻找有效的治疗靶点来改善结直肠癌患者的预后。 Sam68（Src—associated during mitosis of68KD）作为信号转导和RNA激活蛋白（STAR）成员之一,自发现以来便由于其在肿瘤发生发展中所起的作用而受到关注。人类Sam68基因定位于1p32,通过KH结构域与RNA结合,在细胞分裂期是Src蛋白酪氨酸激酶的底物。Sam68在调控信号转导、基因转录等方面发挥重要的作用,它还能调控CD44, Bcl-x1,SMN2, SF2/ASF和Cyclin D1等多种肿瘤相关基因的选择性剪接。结直肠癌的发生与发展是一个多基因参与、多因素相互作用并经过多个阶段最终形成的极其复杂的生物学过程。通过发现癌基因和抑癌基因的存在以及对细胞信号传导通路机制的逐步阐明,极大地丰富了人类在细胞癌变机制领域的认识。在这其中,APC及MCC基因突变、MMR基因的失活、K-ras基因突变、抑癌基因DCC的缺失、抑癌基因p53的突变与缺失等一系列改变的分子遗传学模式是结直肠癌发生发展的经典分子遗传学模式。国内外研究报道指出,Sam68在正常人体中广泛表达,在信号转导、基因转录、选择性剪接中发挥重要作用。另外Sam68在不同的细胞类型中对细胞周期,细胞增殖和转化,肿瘤发生和转移有促进作用,参与了人类肿瘤相关基因表达转录及转录后的调控。BusaR等证实在前列腺癌组织中,Sam68在蛋白质和mRNA水平都存在着不同程度的表达上调,而在前列腺癌细胞中下调Sam68会导致细胞周期延缓,细胞增殖能力降低。近年有研究指出,在乳腺癌、宫颈癌、肾细胞癌和非小细胞肺癌中,Sam68的表达上调,对这些肿瘤的发生发展起促进作用,且与这些癌症患者的低存活率密切相关。而在体外实验中,下调Sam68能抑制乳腺癌和鼻咽癌细胞的增殖能力及宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力。以上结论表明Sam68很可能具有癌基因的特性,但Sam68在结直肠癌中的具体作用目前尚未明确。在前期实验中,我们研究发现Sam68在结直肠癌组织中表达上调,且Sam68的高表达与结直肠癌的强临床侵袭性、低分化程度和预后不良密切相关,但Sam68在体外对结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力的影响目前国内外尚未见报道。本研究通过建立Sam68稳定过表达和稳定干扰Sam68的结直肠癌细胞株,检测Sam68对结直肠癌细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的影响,进一步探讨Sam68在结直肠癌发生发展和转移过程的作用,以期为结直肠癌的分子靶向治疗提供新的思路。方法 1.构建携带人Sam68基因的逆转录病毒载体pbabe/Sam68 首先,我们以含人Sam68cDNA的质粒为模板进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳后用试剂盒回收纯化,以BamHI和EcoRI为酶切位点双酶切Sam68cDNA回收产物和pbabe空载体,然后将酶切产物T4连接酶16℃连接8h,转化,涂LB/AMP板37℃过夜培养,挑取阳性克隆提取质粒,经酶切及PCR鉴定后测序,命名为pbabe/Sam68。2.构建过表达Sam68稳定细胞株及过表达Sam68对结直肠癌细胞生物学特性的影响我们利用慢病毒感染的方法将Sam68和vector分别稳定表达于结直肠癌细胞株SW480和Ls174t中。首先运用PCR法扩增目的基因Sam68,与空载体pbabe连接后,构建携带人Sam68基因逆转录病毒载体pbabe/Sam68,经293FT病毒包装细胞后,产生重组逆转录病毒,感染相对低表达Sam68的结直肠癌细胞株SW480和Ls174t,用含空载体的病毒做对照。用嘌呤霉素筛选稳定的细胞克隆,得到稳定过表达Sam68的细胞株（SW480/Sam68、Ls174t/Sam68）,及阴性对照细胞株（SW480/vector、Ls174t/vector）.利用荧光定量PCR和Western blot法鉴定转染后Sam68在细胞中的蛋白表达水平,利用MTT法、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验检测Sam68转染前后对结直肠癌细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的影响。 3.干扰Sam68稳定细胞株的构建及Sam68表

关键词： Sam68 结直肠癌增殖侵袭迁移

温州市社会治安防控体系建设现状与优化对策研究

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温州市社会治安防控体系建设现状与优化对策研究

作者：王力扬西南大学

学位级别：硕士

作为沿海开放城市的温州,走在改革开放与现代化建设的前沿,同时由于其具有良好的经济发展形势及优越的地理位置,吸引了大批务工人员。随着流动人口的增加,其治安管理问题也日益严峻。目前,温州市作为浙江省的经济、贸易中心,更是浙江省... 详细信息

作为沿海开放城市的温州,走在改革开放与现代化建设的前沿,同时由于其具有良好的经济发展形势及优越的地理位置,吸引了大批务工人员。随着流动人口的增加,其治安管理问题也日益严峻。目前,温州市作为浙江省的经济、贸易中心,更是浙江省对外展示其政治、经济和文化的窗口,其社会治安的好坏与否,不仅是关系着整个温州的整体形象,同时也将影响百姓的生活和地区的招商引资,继而对温州的地区经济发展和社会的安定和谐产生负面的影响。因此,为了有效的避免或减少治安事件的发生,建立健全温州市社会治安防控体系具有重要的现实意义。本文采用理论分析与实证研究相结合、定性分析与定量分析相结合、历史分析与比较分析相结合的研究方法,根据温州治安及防控现状与存在的问题,从如何有效进行治安防控工作的优化与健全角度进行研究。首先,通过查阅相关资料,对研究中涉及到的主要概念和相关理论进行梳理和学习,借鉴国内外关于治安防控体系的相关理论,从而在理论层面对本文的研究提供指导。其次,对温州市的治安实际情况进行调研分析后,总结目前温州市治安防控工作方面的现状,并对现状中存在的主要问题进行归囚,为有针对性地提出改革创新对策提供现实基础。最后,根据温州社会治安防控体系现状以及末来发展趋势,明确了温州市社会治安防控体系建设的指导思想与原则,提山优化温州市社会治安防控体系建设的主要对策。

关键词：温州市社会治安防控社会治安防控体系对策

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扬州市土地资源质量及管理方法

土壤 1997年第1期29卷 29-32页

作者：王力扬马谈斌周学金扬州市农业局扬州225002

为缓解人多地少的矛盾．必须在控制建设用地过快增加的同时，加强对土地资源的质量管理，提高土地的生产能力，保证“高产、高效、优质”农业的持续发展，为此．提出了一系列的土地资源的管理方法．

关键词：土地资源管理

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扬州市土壤水溶态硼的含量及硼肥的合理施用

江苏农业科学 1989年第9期17卷 18-19页

作者：张炳宁王力扬扬州市农业局土肥站

我市地处苏中平原,属北亚热带气候区,土壤主要由长江冲积物、湖相沉积物及第四纪黄土发育而成。已有的研究表明,这种条件下发育的土壤多属于缺硼土壤。1978年我市开始推广种植甘蓝型油菜,沿江及丘陵地区发生大面积花而不实的缺硼症状,1... 详细信息

我市地处苏中平原,属北亚热带气候区,土壤主要由长江冲积物、湖相沉积物及第四纪黄土发育而成。已有的研究表明,这种条件下发育的土壤多属于缺硼土壤。1978年我市开始推广种植甘蓝型油菜,沿江及丘陵地区发生大面积花而不实的缺硼症状,1979年施用硼肥后获得显著的增产效果。随后的试验表明,硼肥不仅对油菜、棉花等喜硼作物有效,在极度缺硼的土壤上,三麦、水稻施用硼肥也有较好的增产效果。为了明确本市所辖范围内各种类型土壤硼素丰缺状况,指导农民合理施用硼肥,对本市土壤水溶态硼的含量以及硼肥的合理施用进行了调查和研究。

关键词：土壤硼含量硼肥施肥

臭氧水处理器在农村小型生活饮用水供水系统中的应用及效果评价

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卫生研究 2002年第5期31卷 386-388页

作者：孙贤理刘玉敏王力扬张骥许志强石磊北京市爱国卫生运动委员会办公室北京100053 北京市疾病预防控制中心

1)目的 :报道了研制的一种适合农村水厂特点的经济、实用、简便易操作、高效的臭氧水处理设备。2 )设计思想及技术路线 :农村水厂的消毒设备必须具备作用迅速 ,运行成本低廉 ,同时自动化程度高、易于操作。臭氧水处理器的技术核心是产... 详细信息

1)目的 :报道了研制的一种适合农村水厂特点的经济、实用、简便易操作、高效的臭氧水处理设备。2 )设计思想及技术路线 :农村水厂的消毒设备必须具备作用迅速 ,运行成本低廉 ,同时自动化程度高、易于操作。臭氧水处理器的技术核心是产生高浓度臭氧并有效地掺混于待处理水中 ,根据用水量的变化 ,自动投加到供水主管路中。3)消毒效果 :加标实验表明 ,在臭氧浓度不低于 0 2mg L时 ,3分钟的接触时间足以杀灭水中的细菌和大肠菌群。现场应用实验结果表明 ,在三个村采集的 2 0个水样细菌总数和大肠菌群均符合生活饮用水水质卫生规范 ,说明臭氧水处理器对大肠菌群和细菌的杀灭作用可靠。 4)讨论及结论 :本研究的创新点在于研制出新型掺混技术 ,效果可靠、作用迅速、程控自动操作、设备自身和运行成本低廉。

关键词：臭氧消毒饮用水供水系统农村自来水厂臭氧水处理器

Sam68对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

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南方医科大学学报 2014年第4期34卷 546-551页

作者：王力扬崔艳梅廖雯婷刘思德南方医科大学南方医院消化内科广东广州510515 南方医科大学南方医院病理科广东广州510515

目的探讨Sam68在结直肠癌发生发展中的作用。方法建立Sam68稳定过表达和稳定干扰的结直肠癌细胞株,通过克隆形成实验、MTT法和Transwell侵袭实验检测Sam68对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果成功建立Sam68稳定过表达和稳... 详细信息

目的探讨Sam68在结直肠癌发生发展中的作用。方法建立Sam68稳定过表达和稳定干扰的结直肠癌细胞株,通过克隆形成实验、MTT法和Transwell侵袭实验检测Sam68对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果成功建立Sam68稳定过表达和稳定干扰细胞株;过表达Sam68的结直肠癌细胞株SW480和Ls174t增殖、侵袭和迁移能力明显增强(P<0.05);干扰Sam68的结直肠癌细胞株SW620和HCT116增殖、侵袭和迁移能力明显下降(P<0.05)。结论 Sam68促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,在结直肠癌发生发展过程中起重要作用。

关键词： Sam68 结直肠癌增殖侵袭迁移