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利用转基因胡萝卜表达肺结核疫苗

Acta Botanica Sinica 2001年第2期43卷 132-137页

作者：王凌健倪迪安陈永宁李忠明中国科学院上海植物生理研究所上海200032 复旦大学上海医学院基因免疫和疫苗研究中心

利用转基因植物生产研制疫苗 ,不但可以改变传统的疫苗生产方式和接种手段 ,而且会大大降低疫苗的生产成本。以胡萝卜 (DaucuscarotaL .***)无菌幼苗的子叶和下胚轴为外植体 ,通过携带有 35S启动子驱动的结核杆菌 (Mycobacteriumtubercu... 详细信息

利用转基因植物生产研制疫苗 ,不但可以改变传统的疫苗生产方式和接种手段 ,而且会大大降低疫苗的生产成本。以胡萝卜 (DaucuscarotaL .***)无菌幼苗的子叶和下胚轴为外植体 ,通过携带有 35S启动子驱动的结核杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis (Zopf)LehmannetNeumann)分泌蛋白MPT6 4基因的根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)LBA44 0 4的介导进行转化 ,在筛选培养基上诱导形成抗性愈伤组织 ,经胚状体发生途径分化得到抗性苗 ,植株移栽后生长情况正常。经PCR和Southern等方法鉴定 ,确认结核杆菌分泌蛋白MPT6 4基因已整合到胡萝卜的染色体中。Western检测结果表明 ,在转基因胡萝卜的蛋白质中含有MPT6 4分泌蛋白 ,为进一步研究利用转基因植物研制口服疫苗和防治肺结核的新型疫苗提供了新材料。

关键词：转基因胡萝卜口服疫苗结核杆菌MPT64分泌蛋白肺结核疫苗

iaaM基因在烟草花粉中的表达及其在花粉发育中的作用

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实验生物学报 2002年第1期35卷 1-6页

作者：倪迪安于晓红王凌健许智宏中国科学院上海植物生理生态研究所

试验利用花粉特异表达的启动子(Lat52)和绒毡层特异表达的启动子(TA29)引导外源生长素合成代谢基因(iaaM)在烟草花粉中表达以研究生长素在花粉发育中的作用。转Lat52-iaaM基因或转TA29-iaaM基因烟草在形态上表现出变异,如从茎上形成不定... 详细信息

试验利用花粉特异表达的启动子(Lat52)和绒毡层特异表达的启动子(TA29)引导外源生长素合成代谢基因(iaaM)在烟草花粉中表达以研究生长素在花粉发育中的作用。转Lat52-iaaM基因或转TA29-iaaM基因烟草在形态上表现出变异,如从茎上形成不定根,叶呈卷曲状等典型的生长素过量表达的性状。另外,与对照相比,转基因烟草花药中IAA水平显著增加,且植株矮化,开花期推迟,有的转基因烟草未能开花。上述现象表明:Lat52和TA29启动子的表达并不仅限于花粉或绒毡层,或者说这两个启动子的表达有些泄漏。转基因烟草的花药形状有较大的变异,早期的每个花药中花粉数明显减少,但这些花粉可被醋酸一洋红染色。所有能开花的转基因烟草均可收到种子,但收自某些转基因株系的种子不能萌发。所有这些结果表明生长素在花粉发育过程中起重要作用,过量的生长素会导致花粉发育的异常。

关键词：生长素转基因烟草花粉发育 iaam基因表达 IAA

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植物萜类次生代谢及其调控

中国科学：生命科学 2013年第12期43卷 1030-1046页

作者：王凌健方欣杨长青李建戌陈晓亚中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所植物分子遗传国家重点实验室上海200032

植物次生代谢在植物生长发育、环境适应、抵御病虫害等方面发挥着重要作用,这些天然产物组成地球上最丰富的有机化合物的宝库.萜类是植物代谢产物中种类最多的一类,具有重要的生理和生态功能,一些成分还有应用价值.近十几年来,人们在萜... 详细信息

植物次生代谢在植物生长发育、环境适应、抵御病虫害等方面发挥着重要作用,这些天然产物组成地球上最丰富的有机化合物的宝库.萜类是植物代谢产物中种类最多的一类,具有重要的生理和生态功能,一些成分还有应用价值.近十几年来,人们在萜类化合物的分离、鉴定、应用、生物合成、相关基因与基因族、酶蛋白结构和功能、代谢调控以及代谢工程等各方面取得了重大进展.本文概述了植物萜类化合物代谢及其调控领域的研究进展与发展趋势.

关键词：次生代谢萜类生物合成代谢调控基因工程

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植物转基因技术的诞生和发展

生命科学 2011年第2期23卷 140-150页

作者：杨长青王凌健毛颖波陈晓亚中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所上海200032

在过去的几十年里,转基因技术经历了从诞生、成长到大规模商业化应用等阶段,在农业生产中表现出巨大优势和潜力。本文简单介绍转基因技术的诞生、发展历程以及产业化情况。

关键词：基因转基因植物作物育种

Actin Visualization in Living Immature Pollen of Rice Using a GFP-Mouse Talin Fusion Protein

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Acta Botanica Sinica 2002年第6期44卷 642-648页

作者：徐是雄王凌健丘志平叶永健余旭红香港大学植物系

Green fluorescent protein (GFP) fused to the F_actin binding domain of mouse talin labels the actin cytoskeleton in the immature pollen of stable transformed rice (Oryza sativa L.) plants. Actin microfilaments could be visualized only in the late_developmental stage of the immature pollen. During this developmental stage, microfilaments, initially composed of very short fibrils, develop into a very complex and novel network that sometimes totally and sometimes partially encloses the vegetative nucleus and the spherical shaped generative cell in the central cytoplasm of the immature pollen. The behavior of the actin microfilamentous structure throughout the late_developmental stage of the immature pollen is extremely dynamic, and the likelihood of this structure in generating forces for vegetative nucleus and generative cell movement in the immature pollen has been discussed. No actin filaments were visualized in the spherical generative cells.

关键词： Oryza sativa pollen green fluorescent protein (GFP) mouse talin actin microfilament

转异源abp基因烟草的叶外植体不同培养中的形态发生

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植物生理学报（0257-4829) 1998年第2期24卷 105-110页

作者：王凌健倪迪安许智宏夏镇澳中国科学院上海植物生理研究所上海200032 中国科学院北京100864

以转正义和反义abp基因[生长素结合蛋白（ABP）的基因]烟草及对照的叶外植体为材料，在附加2mg／L或1mg／L的6－BA和不同浓度的NAA的MS培养基上进行不定芽分化试验。在较低NAA浓度条件下，转正义abp基因烟草（SE2）的叶外植体分化的不... 详细信息

以转正义和反义abp基因[生长素结合蛋白（ABP）的基因]烟草及对照的叶外植体为材料，在附加2mg／L或1mg／L的6－BA和不同浓度的NAA的MS培养基上进行不定芽分化试验。在较低NAA浓度条件下，转正义abp基因烟草（SE2）的叶外植体分化的不定芽数高于对照（SR1）和转反abp基因烟草（AS3），说明SE2对生长素的敏感性比SR1和AS3高；而在较高NAA浓度条件下，AS3分化的不定芽数大于SE2和SR1，说明AS3对生长素的敏感性比SE2和SR1低。在培养基中加入生长素极性运输抑制剂HFCA后，不定芽分化受到抑制，分化不定芽中部分叶的形态由两侧对称性生长转变为形成不对称的喇叭状叶。在HFCA浓度为0－7．5mg／L条件下，SE2的喇叭叶发生频率明显高于SR1和AS3，其中SE2和SR1的喇叭叶发生频率分别在HFCA浓度为6．5和7．5mg／L时达到最高以后保持平稳，而AS3的喇叭叶发生频率在HFCA处理浓度直到15mg／L时仍保持上升趋势。这些结果说明ABP具有结合外源生长素，从而促进芽器官分化的功能，同时可能作为生长素受体参与了生长素的极性运输。

关键词：烟草转异源基因生长素叶外植体形态发生

生长素极性运输的抑制对叶生长发育模式的影响

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Acta Botanica Sinica 1996年第11期38卷 867-869页

作者：倪迪安王凌健陈永宁许智宏夏镇澳中国科学院上海植物生理研究所上海200032

以烟草 ( Nicotiana tabacum L.品种“革新一号”)无菌幼苗叶片为材料 ,在 MS培养基中分别加不同浓度的生长素极性运输抑制剂 (三碘苯甲酸、反式肉桂酸、9-羟基芴 - 9-羧酸 )和 2 mg/ L BA ,探讨不定芽分化的情况 ,在这些培养基上都观... 详细信息

以烟草 ( Nicotiana tabacum L.品种“革新一号”)无菌幼苗叶片为材料 ,在 MS培养基中分别加不同浓度的生长素极性运输抑制剂 (三碘苯甲酸、反式肉桂酸、9-羟基芴 - 9-羧酸 )和 2 mg/ L BA ,探讨不定芽分化的情况 ,在这些培养基上都观察到不同形态的喇叭状叶片形成。结果表明 ,再生喇叭叶的发生频率与培养基中抑制剂一定范围内的浓度密切有关。当三碘苯甲酸浓度为 7.5 mg/ L 时 ,喇叭叶的发生频率最高可达到 82 .1 % ,在再生不定芽的不同位置均观察到有喇叭叶的发生。实验证明 ,抑制生长素的极性运输可导致叶形态发生改变。

关键词：烟草生长素极性运输叶形态生长发育模式

水稻(Oryza sativa)原生质体经钝化后诱导融合再生可育体细胞杂种

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实验生物学报 1998年第4期31卷 413-421页

作者：王凌健倪迪安宛新杉夏镇澳中国科学院上海植物生理研究所上海200032

本研究在初步实现水稻原生质体培养的程序化后,选用普通栽培稻P339和特种稻苏御糯选的原生质体为融合亲本,利用碘乙酸(IA)和罗丹明-6G(R-6G)这两个代谢互补抑制剂钝化处理亲本原生质体,确定了合适的抑制条件。P339用0.25mmol/L IA,苏御... 详细信息

本研究在初步实现水稻原生质体培养的程序化后,选用普通栽培稻P339和特种稻苏御糯选的原生质体为融合亲本,利用碘乙酸(IA)和罗丹明-6G(R-6G)这两个代谢互补抑制剂钝化处理亲本原生质体,确定了合适的抑制条件。P339用0.25mmol/L IA,苏御糯选用50μg/ml R-6G分别经30min钝化处理,通过PEG和高Ca^(2+)、高pH法诱导融合,异源融合体具有代谢互补效应,经培养得到愈伤组织17块,并进一步分化获得不同形态的再生植株12棵。移栽存活的再生植株成熟后可育,通过对这些植株的形态以及酯酶和过氧化物酶同工酶电泳的分析表明是融合后的体细胞杂种植株。

关键词：水稻原生质体钝化体细胞杂种诱导融合

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水稻原生质体培养再生植株程序化的初步研究

实验生物学报 1995年第4期28卷 361-369页

作者：王凌健倪迪安宛新杉夏镇澳中国科学院上海植物生理研究所上海200032

从12个品种水稻成熟种子诱发愈伤组织并继代培养,通过MS培养基中2,4-D浓度的变换,研究了2,4-D对水稻愈伤组织生长的影响。用AA培养基建立适合原生质体培养的胚性细胞悬浮系仅需3个月。由悬浮细胞系游离的原生质体在改良的KPR培养基中进... 详细信息

从12个品种水稻成熟种子诱发愈伤组织并继代培养,通过MS培养基中2,4-D浓度的变换,研究了2,4-D对水稻愈伤组织生长的影响。用AA培养基建立适合原生质体培养的胚性细胞悬浮系仅需3个月。由悬浮细胞系游离的原生质体在改良的KPR培养基中进行液体浅层培养,有10个品种获得高植板率的细胞团。变换使用不同的分化培养基,从7个品种得到再生植株。实验重复性达到80%,初步实现了水稻原生质体培养的程序化。

关键词：水稻原生质体培养再生植株程序化